快速定量分析氢氯噻嗪片的研究

彭梦侠，郭金卡

（嘉应学院 化学与环境学院/广东省山区特色农业资源保护与精准利用重点实验室，广东 梅州 514015）

氢氯噻嗪是利尿类的一种降压药，广泛运用于临床，用于治疗高血压、水肿，是高血压防治指南的一线药物.其调节血压的原理是通过排钠利尿，减少细胞外容量，降低高血压容量负荷.氢氯噻嗪的疗效得到肯定的同时也存在一些不良反应，如低血钾、脂代谢紊乱、高钙低磷血症、高尿酸痛风、直立性低血压等.[1-2]市售氢氯噻嗪片的厂家较多，价格相差较大，药效是否相同是消费者关心的问题，更是药物监督部门需要解决的问题.

目前，氢氯噻嗪含量的检测以高效液相色谱法为主，以乙腈-水（12∶88）流动相，检测波长为271 nm，氢氯噻嗪质量浓度线性范围为2.05～10.25μg/mL，平均回收率为98.48%.该方法简便，灵敏度高.还有紫外分光光度法：在最大吸收波长272 nm 测定吸收值，计算氢氯噻嗪片的含量，在2.0～14.0 μg/mL浓度范围内成较好的线性关系.毛细管电泳法：毛细管电泳法测定复方降压片中的维生素B1、维生素B6、氢氯噻嗪等五种组分的含量，在测定范围内有良好的线性关系，回收率高.反高效液相色谱法：以ZORBAX C18为色谱柱，0.02 mol/L 磷酸盐缓冲液-甲醇（80∶20）为流动相，紫外检测波长为226 nm，重现性好，回收率高.[3-8]

近年来，近红外光谱技术讯速发展，在药品检测、化工、食品等方面得到了广泛的应用.[9-16]与传统分析方法相比，近红外技术操作简单、成本低、不受样品状态影响等特点.本文拟采用近红外光谱技术，建立样品中氢氯噻嗪的定量分析模型，为药品监督管理部门日常打击假劣药品提供一种可靠便捷快速的分析方法.

1 实验部分

1.1 实验仪器

LC-20AT 高效液相色谱仪（日本岛津公司）、AntarisⅡ型近红外（FT-NIR）光谱仪（美国赛默飞科技公司）、Super-Shak IR 震荡机（日本株式会社）.

1.2 实验药品、样品

表1 实验药品及样品

1.3 实验方法

1.3.1 参比方法：HPLC 测定样品中的氢氯噻嗪含量[8]

流动相：磷酸二氢钠15.60 g，加少量的超纯水溶解、搅拌，待达到室温时，加水稀释至1 000 mL，再加111.1 mL 乙腈，磷酸二氢钠-乙腈体积比例为9∶1，然后用磷酸调节pH 至3.00，用0.45μm 的滤膜在溶剂抽滤器上抽滤.

色谱柱条件：C18 烷基硅烷键合硅胶色谱柱；以磷酸二氢钠-乙腈（9∶1）为流动相；检测波长为271 nm；流速：1.5 mL/min；进样量：20 μL；柱温：30 ℃.

标准曲线的绘制：取10 mg 氢氯噻嗪标准品置于100 mL 的容量瓶中，用乙腈定容，作为对照品储备液.用移液管移取氢氯噻嗪对照品储备液分别向7 个10 mL 容量瓶加入1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0 mL，用乙腈定容，配制不同浓度的标准溶液.横坐标用质量浓度(X)、纵坐标用色谱峰面积(Y)，做线性回归，得到氢氯噻嗪的线性回归方程.

测定样品中氢氯噻嗪的含量：用震荡机将样品氢氯噻嗪片制成粉末，称取 10 mg 样品，置于50 mL容量瓶中，用乙腈定容，超声5 min.每种样品取两个样，得到的值取平均，结果为样品中氢氯噻嗪的实测值.

1.3.2 样品的近红外光谱测定

光谱采集条件：用空气做背景，用积分球模块附件采样，波数范围10 000～4 000 cm-1，扫描64 次，分辨率设为8 cm-1，优化增益设为1 x.

光谱的采集：取样品10 片，用震荡机研磨成粉（震荡机的转速设为4 000 转/min，时间设为1 min)，分成3 份，装入3 个样品杯中，用积分球模块采集其谱图，每个样采集5 张图，每种样品得到15 张谱图.

1.3.3 氢氯噻嗪片中氢氯噻嗪含量的定量分析模型的建立及外部验证

以1.3.1 HPLC 法得到的样品中氢氯噻嗪含量为参比方法，从实验样品中选A1-A 10 为建立模型的训练集样品，任意取每个样品中的12 张谱图为训练集样本，其余3 张谱图为内部验证集样本.采用偏最小二乘法（PLS），建立氢氯噻嗪片中氢氯噻嗪含量的定量分析模型.

对优化出的模型进行外部验证，进一步验证模型的准确性.未参与建立模型的A11-A 12 样品为外部验证样品，每个样品选3 个样本谱图（每个样本测5 张谱图，取平均谱图），对模型进行外部验证.

2 结果与讨论

2.1 HPLC 分析样品结果

按照1.3.1 的方法，绘制标准曲线（见图1），标准曲线呈线性相关，线性回归方程为y=50,225,081.69x-4,385.53，相关系数R2=0.999 7，线性关系良好.得到A1-A 12 样品中氢氯噻嗪的含量，氢氯噻嗪的质量百分比在9.37%～31.10%之间.

图1 氢氯噻嗪标准曲线

2.2 样品中氢氯噻嗪含量的分析模型的建立

按照1.3.3 建模，用常规光谱数据、一阶导数光谱数据和二阶导数光谱数据，结合手动选择波段和预处理方式优化模型.结果表明，用一阶导数光谱数据，选5 939.01～5 815.21 cm-1、4 443.34～4 170.92 cm-1等两个波段，诺里斯导数滤噪，得到的模型最佳.最优模型的校正均方差(RMSEC)：0.297，校正系数Rc：0.999 1，样品预测均方差(RMSEP)：0.263，预测系数Rp：0.995 3，模型的性能指数（performance Index）：95.5.模型氢氯噻嗪片样本中氢氯噻嗪预测值与真实值的关系见图2.

图2 样品中氢氯噻嗪的预测值与真实值

2.3 最优模型的外部验证

用1.3.3 的方法，对2.2 得到的最优模型作外部验证，得到A11、A12 样品中氢氯噻嗪含量的预测值，如表2.

表2 模型的预测值及其与HPLC 测定值的误差

从表2 可看出，模型的预测值与HPLC 实测值的绝对误差：-0.34%～0.61%，相对误差：-1.30%～2.19%.外部验证结果，进一步证明了得到的模型对氢氯噻嗪片中氢氯噻嗪含量的预测是准确可靠的.

3 结论

以HPLC 法为参比方法分析样品中氢氯噻嗪的含量，测定样品的近红外光谱，用偏最小二乘法，建立了粉末样品中氢氯噻嗪的快速、准确定量分析模型.在应用模型时，仅仅需要采集待测样品的近红外光谱图，然后导入模型，迅速得到分析结果.建立了一种检测氢氯噻嗪片中氢氯噻嗪含量的新方法.这种新方法不用溶剂、不用对照品、不用对样品进行处理，是一种快速可靠的检测方法.