黏质沙雷氏菌与农药混配增效作用

梁佳梅 邹 悦 苏贵洪 张 乐 吴正伟

（广东海洋大学滨海农业学院 广东湛江 524088）

草地贪夜蛾（Spodoptera frugiperda）属鳞翅目（Lepidoptera）夜 蛾 科（Noctuidae），是 一 种 具 有 多 食性、飞行能力强、适生性广、无滞育现象等特点，分布于世界各国的迁飞性农业重大害虫[1]。其寄主植物达73科350多种，主要为害谷类和禾本科，其中包括多种经济作物，如玉米、水稻、甘蔗、烟草等[2]。

我国对草地贪夜蛾的防治经验较少，为了能有效地控制该虫的扩散，目前以化学防治为主。由于高频率使用或大量使用化学农药，草地贪夜蛾种群已产生不同程度的抗药性[3]，同时带来了环境污染、农药残留的问题。因此，探索新的草地贪夜蛾防治方法，对农业生产安全具有重要意义。生物农药具有不易产生抗药性的特点。黏质沙雷氏菌作为一种昆虫病原微生物，已经有多年的研究。单一使用黏质沙雷氏菌相较于化学杀虫剂效率低、作用慢，极大限制了该菌的应用。黏质沙雷氏菌与杀虫剂混配使用防治草地贪夜蛾的相关研究鲜有报道。为此，本研究以草地贪夜蛾2龄幼虫为试验对象，通过测定黏质沙雷氏菌ZJ9与10种农药单用及混配对草地贪夜蛾的杀虫活性，确定菌药混用对草地贪夜蛾的联合作用，为科学防治草地贪夜蛾提供新的方法。

1 材料与方法

1.1 供试虫源和菌株

草地贪夜蛾种群采自湛江玉米地，经室内多代饲养，挑选大小一致、健康的2龄幼虫作为试验虫源。供试菌株为广东海洋大学海洋微生物实验室保存的黏质沙雷氏菌ZJ9[4]。

1.2 供试药剂

本试验选用10种杀虫剂：6%乙基多杀菌素悬浮剂（SC），美国陶氏益农公司；0.5%苦参碱水剂（WG），河北中保绿农作物科技有限公司；20%虫酰肼悬浮剂（SC），山西奇星农药有限公司；1.8%阿维菌素乳油（EC），河北金德伦生化科技有限公司；10%虫螨腈悬浮剂（SC），巴斯夫欧洲公司；32 000 IU/mg苏云金杆菌可湿性粉剂（WP），武汉科诺生物科技股份有限公司；10亿PIB/mL斜纹夜蛾核型多角体病毒悬浮剂（SC），湖南泽丰农化有限公司；10%虱螨脲悬浮剂（SC），山东中石药业有限公司；5%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐乳油（EC），山东中石药业有限公司；90%杀虫单可溶粉剂（SP），安徽华星化工有限公司。

1.3 黏质沙雷氏菌ZJ9及杀虫剂对草地贪夜蛾的杀虫活性测定

黏质沙雷氏菌ZJ9菌液通过接种2%种子液在30℃、200 r/min的摇床上发酵5 d获得，在NA培养皿涂抹计数，用无菌的0.01%吐温80将发酵液稀释为浓度1.00×108CFU/mL备用。乙基多杀菌素、苦参碱、虫酰肼、阿维菌素、虫螨腈、苏云金杆菌、斜纹夜蛾核型多角体病毒、虱螨脲、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐（简称甲维盐）、杀虫单10种杀虫剂用无菌的0.01%吐温80按10倍梯度稀释104、105、106倍备用。杀虫活性测定采用叶片浸渍法：将草地贪夜蛾2龄幼虫单头置于开孔的2 mL离心管进行饥饿处理2 h，玉米叶片在稀释后的菌液或药液中充分浸泡10 s，待自然晾干进行喂食，设无菌的0.01%吐温80为对照，各处理3次重复，每重复10头。饲毒后的虫子置于28℃恒温箱中，每2 d更换一次处理过的玉米叶片。统计3 d后的校正死亡率。

死亡率（%）=死亡虫数/试验虫数×100。

校正死亡率（%）=（处理组死亡率-对照组死亡率）×（1-对照组死亡率）×100。

用SPSS 21.0进行差异显著性分析。进行各处理校正死亡率的方差分析时，先对百分比数据进行平方根反正弦转换，再进行方差分析和Duncan法多重比较。

1.4 黏质沙雷氏菌ZJ9与农药混配的杀虫活性测定

选择校正死亡率不足100%的农药浓度进行混配试验。先与黏质沙雷氏菌ZJ9进行1∶1体积比混合，按上述叶片浸液法生测。通过共毒因子法来评价黏质沙雷氏菌与农药混配两者之间是否存在增效作用。

共毒指数=（实测死亡率－理论死亡率）/理论死亡率×100。

实测死亡率为混配的校正死亡率，理论死亡率=单用药剂A的校正死亡率×药剂A在混合药剂的所占比（%）+单用药剂B的校正死亡率×药剂B在混合药剂的所占比（%）。评价标准：共毒指数≥20、-20～20、≤-20分别表示增效、相加和拮抗作用。选择增效作用且共毒指数最高的杀虫剂继续进行1∶9、3∶7、7∶3、9∶1不同比例混配试验。记录每日死亡虫数和试虫生命活动，计算各处理1 d、3 d、5 d对草地贪夜蛾的校正死亡率和共毒指数。

2 结果与分析

2.1 黏质沙雷氏菌ZJ9及10种农药单剂和混配后的杀虫效果

采用叶片浸渍法喂食黏质沙雷氏菌ZJ9后1 d、3 d、5 d、7 d，校正死亡率为6.67%～42.59%，而在处理3 d时只有7.04%。10种杀虫剂单剂的校正死亡率在51.58%～96.67%，其中甲维盐最高且浓度最低，但与乙基多杀菌素、虫螨腈、斜纹夜蛾核型多角体病毒和杀虫单差异不显著，相对最为高效。按照等体积混配后，乙基多杀菌素、苏云金杆菌、斜纹夜蛾核多角体病毒、虱螨脲和甲维盐均表现出增效作用并且甲维盐的共毒指数最高（表1）。

表1 黏质沙雷氏菌ZJ9及10种农药单剂和混配后的杀虫效果

2.2 甲维盐和黏质沙雷氏菌ZJ9不同比例混配的杀虫效果

进一步的黏质沙雷氏菌ZJ9与甲维盐不同比例混配试验中，混配比7∶3、3∶7、1∶9处理后5 d的校正死亡率均达到100%且高于甲维盐单剂校正死亡率（96.67%）。混配比9∶1的处理校正死亡率较低且明显低于其他配比。在处理后1 d，各混配比均表现为拮抗作用。在处理后3 d、5 d，混配比1∶9、3∶7、5∶5、7∶3对草地贪夜蛾2龄幼虫均有增效作用，共毒指数最大的均为混配比7∶3的处理，分别达到130.33和70.03（表2）。

表2 黏质沙雷氏菌ZJ9和甲维盐不同比例混配杀虫效果

3 结论与讨论

昆虫病原微生物与低剂量化学药剂混配具有提高昆虫病原微生物的药效、缩短作用时间等特点，发挥协同增效作用[5]。黏质沙雷氏菌产生的几丁质酶等能破坏昆虫的肠围食膜、上皮等结构[6-7]，对昆虫的消化系统和肠道菌群造成影响。有相关文献报道，生物农药的混配制剂比单一使用生物农药对草地贪夜蛾的防治效果更好[8]，通过室内生测和田间试验全面测定苏云金杆菌G033A分别与5%甲维盐、200 g/L氯虫苯甲酰胺和15%甲维盐·氯虫苯甲酰胺减量75%、50%和25%及常规用量联合使用对草地贪夜蛾的防治效果，结果表明，不仅草地贪夜蛾的死亡率明显上升，而且显著提高了低剂量化学农药的杀虫速率。在生产实践中具有减少化学农药施用同时提升防治效果的潜力。

本试验中，草地贪夜蛾取食1.00×108CFU/m L的黏质沙雷氏菌后3 d，死亡率仅为7.04%，胃毒活性很慢。但将其与乙基多杀菌素、苏云金杆菌、斜纹夜蛾核多角体病毒、虱螨脲和甲维盐混配均表现出增效作用且甲维盐增效最高。表明黏质沙雷氏菌ZJ9与杀虫剂混配使用可提高对草地贪夜蛾的杀虫活性。分析其原因可能有两点：一方面可能是杀虫剂降低了害虫对黏质沙雷氏菌的抵抗力，从而加快了该菌的感染速度；另一方面则可能是黏质沙雷氏菌感染害虫后，该菌及其代谢产物可影响虫体内的相关酶系，如解毒代谢相关的蛋白[9]。再者，喂食黏质沙雷氏菌后可能破坏虫体内微生物种群多样性，进而导致害虫自身抗逆性下降，从而影响了害虫对杀虫剂的敏感程度。已有报道显示，消除棉铃虫部分中肠微生物可对Cry1Ac的毒力产生影响[10]。

在与甲维盐的混配试验中发现混配比7∶3时，共毒指数最高，处理5 d校正死亡率达到100%。由于本试验是在室内稳定的环境下进行的，而田间环境中的温度、湿度、光照等因子显然会影响实际效果。因此，田间环境下黏质沙雷氏菌ZJ9与甲维盐的混配效果如何，还需进一步探究。本研究证实了黏质沙雷氏菌ZJ9可以与乙基多杀菌素、苏云金杆菌、斜纹夜蛾核多角体病毒、虱螨脲和甲维盐等杀虫剂联合使用，且与甲维盐7∶3混配时室内效果最好。