贵州惠水县H9亚型禽流感病毒流行情况调查

杨志艳，杨 茜，赵福琼，李 杰，陈启青，倪兴维，马卫红*

1.贵州省惠水县农业农村局，贵州惠水 550600；2.贵州省动物疫病预防控制中心，贵阳 550003

禽流感是由正黏病毒科甲型流感病毒引起的禽类传染病。根据禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）表面的血凝素（hemagglutinin，HA）和神经氨酸酶（neuramindase，NA）分为不同的亚型（H1～H18 和N1～N11）[1]；又根据该病毒毒力不同，可分为高致病性AIV，如H5N1、H5N6、H7N9 亚型等，低致病性AIV，如H6N6、H9N2、H9N9、H10N6 亚型等[2]。高致病性AIV 传播范围广、发病禽种类多、造成危害和损失巨大而引起全球多个国家的重视[3]，而低致病性AIV 对家禽的健康影响较小[4]，常常被人们忽视。目前，H9N2 亚型AIV 是我国乃至世界范围内流行最广的流感病毒之一[5]，近年来陆续有H9N2 感染哺乳动物和人的报道[6-7]，有研究证实H9N2 亚型AIV 无需中间宿主而感染人[8]。这些研究和报道表明，H9N2 亚型AIV 对人类的生命健康安全构成了新的潜在威胁。本试验调查了惠水县H9 亚型AIV流行情况，并对H9 亚型AIV 的防控进行总结，以期为禽流感防控提供参考。

1 材料与方法

1.1 样品来源

采集惠水县区域内8 个养鸡场（户）270 份血液，5 个养鸭场（户）170 份血液，1 个鹌鹑养殖场48份血液，以上采集的血液均已确认未免禽流感H9亚型疫苗。

1.2 主要试剂

H9 亚型AIV 血凝抑制试验抗原、H9 亚型AIV阳性血清均购自哈尔滨国生生物有限公司。

1.3 检测方法

采集未免疫禽流感疫苗的公鸡血，制备成1%的鸡红细胞悬液。

1）HA 试验。在96 孔V 型微量反应板中，每孔加入0.025 mL 生理盐水；第1 孔加0.025 mL 病毒抗原，反复吹吸3～5 次混匀；从第1 孔吸取0.025 mL混合液加入到第2 孔，混匀后吸取0.025 mL 加入第3 孔，依次进行2 倍系列稀释至第11 孔，从第11孔吸取0.025 mL 弃去，第12 孔为阴性对照；每孔加入0.025 mL 生理盐水；每孔加入0.025 mL 1%（体积分数）鸡红细胞悬液；轻扣反应板混合反应物，室温静置40 min，当对照孔的红细胞呈显著纽扣状时判定结果。

2）HI 试验。根据HA 试验测定的效价配制4 个血凝单位（即4 HAU）的病毒抗原；第1～11 孔加入0.025 mL 生理盐水，第12 孔加入0.05 mL 生理盐水作为空白对照；第1 孔加入0.025 mL 待测血清，混匀后吸取0.025 mL 于第2 孔，依次2 倍稀释第10 孔，从第10 孔吸取0.025 mL 弃去，第11 孔作为抗原对照；第1 至第11 孔均加入0.025 mL 4 HAU抗原，室温静置30 min；每孔加入0.025 mL 1%（体积分数）鸡红细胞悬液，震荡混匀，室温静置40 min，空白对照孔（第12 孔）的红细胞呈显著纽扣状时判定结果。根据高致病性禽流感诊断技术（国标号：GB/T 18936—2020）HA 和HI 试验判断结果，HI≥24 为抗体阳性。

2 结果与分析

经HA-HI 试验检测H9 亚型AIV 抗体情况，鸡血清270 份，阳性45 份，阳性率为16.67%；鸭血清170 份，阳性5 份，阳性率为2.94%；鹌鹑血清48份，阳性1 份，阳性率为2.08%，家禽总体阳性率为10.45%（表1）。

表1 家禽H9 亚型禽流感抗体检测结果

3 讨 论

有研究报道，能直接感染人的AIV 有H5N1、H5N6、H7N1、H7N2、H7N3、H7N4、H7N7、H7N9、H9N2和H10N3[9]。近年来，流行的H9N2 亚型AIV 已经出现抗原变异现象[10]，抗原变异间接地为高致病性禽流感提供重组的基因片段的几率[11]。有研究发现，H7N9 亚型AIV 与H9N2 亚型AIV 高度同源[12]，H7N9 亚型AIV 的某些基因片段可能来源于H9N2亚型AIV[13]。目前，H9N2 亚型AIV 的受体结合特性以优先结合唾液酸—2，3 半乳糖体转变为以双嗜性和优先结合唾液酸—2，6 半乳糖受体为主[10]，这种改变大大增强了病毒跨宿主传播感染哺乳动物的能力。陆勤勤等[14]调查我国2018年H9N2 亚型AIV阳性率为25.21%，其中江西、贵州、江苏等地检出率较高，本试验中惠水县H9 亚型AIV 的家禽血清抗体总体阳性率为10.45%。说明H9 亚型AIV 在我国流行很普遍，这大大增加了H9N2 亚型AIV 感染哺乳动物和人的风险，也会导致新的高致病性亚型AIV 的出现，给人类公共卫生健康带来新的挑战。

H9N2 亚型AIV 虽然致病力不强，但传播快，流行范围广，能明显地抑制细胞免疫应答，常引起与细菌、其他病毒混合感染，给家禽生产造成巨大损失[15-16]。火鸡和鸡是禽流感最易感的动物，从本试验结果来看，鸡血清中H9 亚型AIV 抗体阳性率较高，与禽流感易感性一致，应引起人们的高度重视，提前做好低致病性禽流感防控工作。一是加强饲养管理。养殖场（户）根据实际监测情况，对于H9 亚型AIV 流行地域进行常规免疫接种，已经出现症状的养鸡场进行紧急免疫接种，防止疫病蔓延。二是加强家禽防疫重点场所消毒。对养殖场、活禽交易市场、活禽屠宰场等重点场所进行全面消毒灭源。AIV在外界环境中存活能力较差，普通消毒药如醛类、含氯消毒剂、酚类、氧化剂、碱类等均能杀死环境中的病毒。三是加强基层动物防疫队伍建设与培训，进一步完善重大动物疫病防控体系，有针对性地加强散养户的家禽养殖的监管，指导兽医、养殖从业人员等密切接触都规范操作，严格落实动物疫情报告制度。四是加强动物检疫和流通环节监控，做好产地检疫工作，运输的家禽及其产品必须有相应的运输证件、车辆及其有关产品的消毒证明、检疫证，做到证物相符。