柏子仁中黄酮提取工艺研究

王琳榕，钟 君，陈方山，郝成龙

（内江师范学院 生命科学学院，四川 内江 641199）

柏子仁是柏科植物侧柏的干燥成熟种仁，其中的黄酮抗氧化能力很强，可帮助人体清除自由基，还具有改善血液循环、降低胆固醇、抑制炎性生物酶渗出、促进伤口愈合和止痛等作用。黄酮苷元一般难溶或不溶于水，但易溶于乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂。黄酮类化合物糖苷化后易溶于水、乙醇、乙酸乙酯、吡啶等溶剂，难溶于乙醚、三氯甲烷、苯等有机溶剂。采用乙醇提取柏子仁中的黄酮，通过单因素试验确定乙醇浓度、提取温度、时间对黄酮含量的影响，再利用正交试验确定取柏子仁中黄酮类化合物的最佳工艺条件，以期为其成分研究和应用提供数据支撑。

1 试剂与方法

1.1 试验原理

总黄酮类化合物可溶于乙醇，故用乙醇提取样品中的黄酮类化合物。黄酮类化合物与铝离子可生成有色络合物，在510 nm波长附近有吸收峰且符合定量分析的比尔定律。

1.2 仪器与试剂

超声波清洗机；JT1001N电子天平；L420离心机；紫外分光光度计。

无水乙醇、乙醇、5%NaNO2溶液、5%Al（NO3）3溶液、1 mol/L的NaOH溶液、2 g/L芦丁标准溶液。

1.3 试验方法

1.3.1 柏子仁中黄酮提取工艺称取柏子仁干粉1.000 0 g置于洁净的100 mL锥形瓶中，加入40.0 mL乙醇（不同乙醇浓度重复实验），超声功率500 W，超声温度、超声时间，4℃、12 000 rpm离心25 min，收集上清，得粗提液。

1.3.2 黄酮含量测定方法吸取2.0mL粗提液于50mL洁净的试管中，分别加入0.28mL 5%NaNO2溶液，放置6 min后加入0.28mL 5%Al(NO3)3溶液，6 min后再加入4 mL 1mol/L的NaOH溶液，用30%乙醇稀释至10 mL，15 min后于波长510 nm处测定吸光度，0.0 mL为空白对照，测得各粗提液的吸光度A1；另吸取1.0 mL粗提液于10 mL洁净的离心管中，再加入4.0 mL30%乙醇，于波长510 nm处测定吸光度。计算出粗提液中的浓度C，g/L，再计算总黄酮含量。

式中：V为浸提液体积，mL；m为样品质量g。

1.3.3 单因素和正交试验通过单因子试验，分别探究不同温度、时间、乙醇浓度对黄酮提取的影响，再进行正交试验，进一步确定最佳提取温度、时间和乙醇浓度。

2 结果与分析

2.1 不同提取温度对提取效果的影响

不同提取温度对提取效果的影响见图1。

由图1可知，随着提取温度升高，总黄酮的含量显著提高，并在70℃时达到最高值，然后明显降低。综合考虑提取率和含量，选取60，70，80℃进行正交试验。

图1 不同提取温度对提取效果的影响Figure 1 Effects of different extraction temperatures on the extraction effect

2.2 不同提取时间对提取效果的影响

不同提取时间对提取效果的影响见图2。

由图2可知，随着提取时间的延长，总黄酮的含量显著提高，在提取时间为20 min时达到最高，而后明显降低。提取时间20，25，30 min时的含量高于其它时间，因此选取此3个提取时间做正交试验。

图2 不同提取时间对提取效果的影响Figure 2 Effects of different extraction time on the extraction effect

2.3 不同乙醇浓度对提取效果的影响

不同乙醇浓度对提取效果的影响见图3。

图3 不同乙醇浓度对提取效果的影响Figure 3 Effects of different ethanol concentration on the extraction effect

试验结果表明，随着乙醇浓度的增高，总黄酮含量显著提高，在乙醇浓度为75%时达到最高。选取70%，75%，80%的乙醇浓度进行正交试验。

2.4 正交试验

正交试验因素及结果见表1。

表1 正交试验因素及结果Table 1 The orthogonal test factors and the results are shown in Table 1

通过正交试验结果得知，柏子仁中黄酮提取的最佳条件为A2B2C3，即提取温度70℃，提取时间25 min，乙醇浓度为80%，此时总黄酮含量为0.213%。

3 结论

提取柏子仁中的黄酮含量，不仅可以了解黄酮的可利用率，也可为后续产物的研发提供数据基础。通过单因素试验和正交试验确定的提取最佳条件为：提取温度70℃，提取时间25 min，乙醇浓度80%。