参芪颗粒对腺嘌呤致大鼠慢性肾功能衰竭模型的作用研究

杨振　李会影　刘建璇　于映霞　荆涛

【摘要】 目的：研究參芪颗粒对慢性肾功能衰竭模型大鼠的保护作用，为新药开发提供药效学依据。方法：选取65只雄性SD大鼠，除空白对照组（n=12）外，其余大鼠前14 d，每天灌胃腺嘌呤混悬液150 mg/kg;后7 d，每天灌胃腺嘌呤混悬液200 mg/kg，以制作慢性肾衰大鼠模型。将造模成功的50只大鼠随机分为5组，即模型对照组，参芪颗粒高剂量组、中剂量组、低剂量组，阳性对照组，每组10只。观察参芪颗粒对CRF模型大鼠的保护作用。比较六组大鼠24 h尿量、24 h尿蛋白、血清肌酐（Scr）、血清尿素氮（BUN）、尿酸（UA）、体重、肾脏重量、肾脏指数。结果：模型对照组大鼠的24 h尿量多于空白对照组，Scr、BUN、UA水平均高于空白对照组，差异均有统计学意义（P<0.001）。模型对照组24 h尿蛋白量高于空白对照组，差异有统计学意义（P<0.01）。参芪颗粒高、中、低剂量组大鼠的24 h尿蛋白量均低于模型对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。参芪颗粒高剂量组Scr水平低于模型对照组，差异有统计学意义（P<0.001）。参芪颗粒高剂量组BUN水平低于模型对照组，差异有统计学意义（P<0.01）。参芪颗粒高剂量组UA水平低于模型对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。参芪颗粒中剂量组和阳性对照组的Scr、BUN、UA均低于模型对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。参芪颗粒低剂量组UA水平低于模型对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。模型对照组体重低于空白对照组，差异有统计学意义（P<0.01）。模型对照组肾脏重量、肾脏指数均高于空白对照组，差异均有统计学意义（P<0.001）。参芪颗粒高剂量组肾脏重量低于模型对照组，差异有统计学意义（P<0.01）。阳性对照组的肾脏重量、肾脏指数均高于模型对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：参芪颗粒具有一定的改善肾功能，保护肾组织的作用，值得进一步开发利用。

【关键词】 参芪颗粒 腺嘌呤 慢性肾功能衰竭

The Effect of Shenqi Granules on Adenine-induced Chronic Kidney Failure in Rats/YANG Zhen， LI Huiying， LIU Jianxuan， YU Yingxia， JING Tao. //Medical Innovation of China， 2022， 19（18）： 00-011

[Abstract] Objective： To study the protective effect of Shenqi Granules on chronic kidney failure rats， and to provide pharmacodynamic basis for new drug development. Method： A total of 65 male SD rats were selected， except the blank control group （n=12）， the other rats were given intragastric administration of Adenine Suspension 150 mg/kg

daily for the first 14 d and 200 mg/kg daily for the next 7 d， to make a rat model of chronic renal failure. 50 rats successfully modeled were randomly divided into 5 groups， model control group， Shenqi Granules high-dose group， medium-dose group， low-dose group and positive control group， with 10 rats in each group. The protective effect of Shenqi Granules on CRF model rats was observed. The 24 h urine volume， 24 h urine protein， serum creatinine （Scr）， serum urea nitrogen （BUN）， uric acid （UA）， body weight， kidney weight and renal index of rats were compared in six groups. Result： The 24 h urine volume of the model control group was higher than that of the blank control group， the levels of Scr， BUN and UA of the model control group were higher than those of the blank control group， the differences were statistically significant （P<0.001）. The 24 h urinary protein level of the model control group was higher than that of the blank control group， the difference was statistically significant （P<0.01）. The 24 h urinary protein content of Shenqi Granules high-dose， medium-dose and low-dose groups were lower than those of the model control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. Scr level of the Shenqi Granules high-dose group was lower than that of the model control group， the difference was statistically significant （P<0.001）. The BUN level of the Shenqi Granules high-dose group was lower than that of the model control group， the difference was statistically significant （P<0.01）. UA level of the Shenqi Granules high-dose group was lower than that of the model control group， the difference was statistically significant （P<0.05）. Scr， BUN and UA of Shenqi Granules medium-dose group and positive control group were lower than those of model control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. UA level of the Shenqi Granules low-dose group was lower than that of model control group， the difference was statistically significant （P<0.05）. The weight of the model control group was lower than that of the blank control group， the difference was statistically significant （P<0.01）. The kidney weight and index of the model control group were higher than that of the blank control group， the differences were statistically significant （P<0.001）. Kidney weight of the Shenqi Granules high-dose group was lower than that of the model control group， the difference was statistically significant （P<0.01）. The kidney weight and renal index of the positive control group were higher than those of the model control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. Conclusion： Shenqi Granules has the function of improving renal function and protecting renal tissue， which is worthy of further development and utilization.

[Key words] Shenqi Granules Adenine Chronic kidney failure

First-author’s address： Academy of Traditional Chinese Medicine， Jilin Province， Changchun 130021， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2022.18.002

慢性肾功能衰竭（CRF）是严重威胁人类生命健康的重要病症之一。目前，血液透析和肾移植的治疗方法仍存在费用高及肾源的限制，给患者的治疗带来诸多不便[1-2]。近年来，中医药在治疗慢性肾衰方面具有十分明显的作用，为广大患者所认可。复方中药制剂“参芪颗粒”是在传统经验方的基础上研发的治疗早、中期慢性肾功能衰竭的中药新药。通过研究参芪颗粒对慢性肾功能衰竭模型大鼠的保护作用，为新药开发提供药效学依据，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料 选取SPF级SD大鼠，65只，雄性，体重180～220 g，由辽宁长生生物技术股份有限公司提供，许可证号：SCXK（辽）2020-0001。药物与试剂，参芪颗粒（生产厂家：吉林省中医药科学院制剂研究室，批号：20210704），是由黄芪、党参、肉桂、牛膝、大黄、益母草6味中药组成的复方制剂，本品为棕褐色粉末，气味微苦，每克粉相当于2.44 g生药;尿毒清颗粒[生产厂家：康臣药业（内蒙古）有限责任公司，批准文号：国药准字Z20073256，规格：5 g×15袋/盒];腺嘌呤（生产厂家：上海源叶生物科技有限公司，产品批号：S18009，高纯98%）;羧甲基纤维素钠（生产厂家：天津市福晨化学试剂厂，批号：20160412）。实验符合本院实验动物伦理委员会的相关规定。

1.2 方法

1.2.1 动物造模 选取SD大鼠65只，雄性，体重180～220 g。实验前，所有大鼠均适应性饲养7 d，正常进食，自由饮水。12只空白对照组大鼠灌胃蒸馏水，其余大鼠前14 d，每天灌胃给予腺嘌呤混悬液150 mg/（kg·d），用0.5%的CMC-Na配成浓度为1.5%腺嘌呤混悬液，后7 d，每天灌胃给予腺嘌呤混悬液200 mg/（kg·d），共灌胃21 d。选取2只空白对照组大鼠和3只造模大鼠，进行肾脏的病理组织学比较分析，以初步验证造模情况[3]，结果发现，慢性肾功能衰竭模型大鼠复制成功。

1.2.2 分组给药 将其余造模成功的50只大鼠随机分为5组，即模型对照组、参芪颗粒高剂量组、参芪颗粒中剂量组、参芪颗粒低剂量组、阳性对照组，每组10只。参芪颗粒高剂量组、中剂量组、低剂量组大鼠每天的用药剂量分别是5.16、2.58、1.29 g/（kg·bw）[相当于原生药12.60、6.30、3.15 g生药/（kg·bw）]，分别为大鼠的2倍临床等效剂量、临床等效剂量及1/2临床等效剂量。阳性对照组给予尿毒清颗粒，每天给药剂量为1.80 g/（kg·bw）。空白对照组和模型对照组的大鼠，均在给药期间给予蒸馏水灌胃，灌胃体积为每100克1.0 mL。各组大鼠均连续灌胃28 d。

1.3 观察指标 给药结束后，检测各组大鼠的24 h尿量、24 h尿蛋白、血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、尿酸（UA）含量、体重、肾脏重量并计算肾脏指数，并进行大鼠的肾脏组织病理检查。肾脏指数=肾脏重量/体重×100%。

1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，两两比较采用t检验，多组比较采用方差分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 六组大鼠24 h尿量、24 h尿蛋白量比较 模型对照组大鼠的24 h尿量多于空白对照组，差异有统计学意义（P<0.001）。模型对照组24 h尿蛋白水平高于空白对照组，差异有统计学意义（P<0.01）。参芪颗粒高、中、低剂量组大鼠的24 h尿蛋白量均低于模型对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.2 六组大鼠Scr、BUN、UA水平比较 模型对照组大鼠的Scr、BUN、UA水平均高于空白对照组，差异均有统计学意义（P<0.001）。参芪颗粒高剂量组Scr水平低于模型对照组，差异有统计学意义（P<0.001）。参芪颗粒高剂量组BUN水平低于模型对照组，差异有统计学意义（P<;0.01）。参芪颗粒高剂量组UA水平低于模型对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。参芪颗粒中剂量组和阳性对照组的Scr、BUN、UA均低于模型对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。参芪颗粒低剂量组UA水平低于模型对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.3 六组大鼠体重、肾脏重量、肾脏指数比较 模型对照组体重低于空白对照组，差异有统计学意义（P<0.01）。模型对照组肾脏重量、肾脏指数均高于空白对照组，差异均有统计学意义（P<0.001）。参芪颗粒高剂量组肾脏重量低于模型对照组，差异有统计学意义（P<0.01）。阳性对照组的肾脏重量、肾脏指数均高于模型对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表3。

2.4 六组大鼠的肾脏组织病理学变化 观察各组大鼠的肾脏组织染色病理切片。空白对照组：大鼠肾脏的病理组织学检查未见明显改变，HE染色观察肾小管、肾小球、系膜区宽度、系膜基质、间质均未见异常病变，见图1A。模型对照组：与空白对照组比较，模型对照组大鼠肾脏组织的肾小球出现扩张，个别肾小球萎缩;肾小管间质可见炎细胞浸润，血管壁增厚，肾小管内可见大量嘌呤结晶沉积，近曲肾小管变性、渗出，远曲小管扩张，已造成慢性肾功能衰竭的模型，见图1B。参芪颗粒高剂量组：与模型对照组比较，参芪颗粒高剂量组大鼠肾脏间质炎症状态明显好转，肾间质内淋巴细胞浸润数量明显减少，肾小球状态明显改善，肾小管变性明显减轻，嘌呤结晶沉积明显减少，见图1C。参芪颗粒中剂量组：与模型对照组比较，参芪颗粒中剂量组大鼠的肾脏间质中慢性炎症浸润程度，呈剂量效应关系;炎细胞浸润减少，血管壁增厚改善，肾小球和肾小管状态减轻，嘌呤结晶沉积减少，见图1D。参芪颗粒低剂量组：与模型对照组比较，参芪颗粒低剂量组大鼠的肾脏间质中慢性炎症浸润程度，呈剂量效应关系;炎细胞浸润减少，血管壁增厚改善，肾小球和肾小管狀态减轻，嘌呤结晶沉积减少，见图1E。阳性对照组：与模型对照组比较，阳性对照组大鼠肾脏间质有所改善，肾间质内淋巴细胞浸润数量有所减少，部分肾小球扩张，近曲小管变性程度得到改善，见图1F。

3 讨论

慢性肾功能衰竭（CRF）是一种慢性进行性肾损害，该疾病的病程较长，严重威胁患者的生命安全，因此，寻找合适的治疗手段对于患者至关重要。近年来，采用中医药治疗慢性疾病成为更多患者的选择，复方中药制剂“参芪颗粒”是在传统经验方基础上研发的治疗早中期慢性肾功能衰竭的中药新药，由黄芪、党参、肉桂等6味中药组成，黄芪具有利水消肿等功效;党参具有健脾益肺、补中益气之功效;牛膝具有利尿通淋之功效;大黄具有通腑泻浊之功效;益母草具有利尿消肿之功效，诸药合用可以改善肾功能，延缓慢性肾衰的病情进展[4-8]。

目前，关于慢性肾功能衰竭的动物模型的复制主要分为物理方法和化学方法，其中，物理方法主要是采用手术切除部分肾组织，进而导致肾小球部分硬化、肾小管扩张，导致残留肾组织的代偿作用不足，肾功能进一步恶化。化学方法则是采用给大鼠灌胃高浓度腺嘌呤，复制慢性肾功能衰竭的大鼠模型，大鼠体内的腺嘌呤沉积于肾小管而成功复制慢性肾衰[9-15]。

本研究笔者采用给大鼠灌胃高浓度腺嘌呤的方法复制慢性肾功能衰竭的大鼠模型，通过21 d造模，28 d给药，观察参芪颗粒各剂量组对于模型大鼠的作用。本研究发现，与模型对照组比较，参芪颗粒高剂量组大鼠的24 h尿蛋白量有所降低（P<0.05），肾脏重量明显降低（P<0.01）;血清Scr、BUN、UA等指标变化显著，Scr低于模型对照组（P<0.001），BUN低于模型对照组（P<0.01），UA低于模型对照组（P<0.05）;参芪颗粒中剂量组对血清肌酐、尿素氮、尿酸含量等指标略有降低作用（P<0.05）。由此表明，参芪颗粒对慢性肾功能衰竭模型大鼠具有一定的保护作用，值得进一步开发利用[16-20]。参芪颗粒高、中、低剂量组均可以不同程度改善大鼠的肾脏组织病变，以参芪颗粒高剂量组的作用最为明显。

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（收稿日期：2022-01-18） （本文编辑：张明澜）