脱毒马铃薯试管薯繁育技术

王学贵 魏 涛 许 杰

（1.枣庄市峄城区吴林街道农业综合服务中心 山东枣庄 277300；2.枣庄市农业科学研究院 山东枣庄 277300）

枣庄市是山东省最大的马铃薯产区和全国最大的马铃薯二季作产区，2016年种植面积已发展到近120 万亩，仅滕州市全年种植马铃薯就有80 多万亩，已成为较大规模的马铃薯生产基地。 滕州市被农业农村部命名为“中国马铃薯之乡”和“山东省马铃薯生产先进市”，商品薯远销国内外，市场前景广阔。 但是，我国的马铃薯单产低，种薯退化严重，是目前制约其产业发展的主要因素。 特别是最近几年，在鲁南二季作马铃薯产区， 多数农民在自繁自用脱毒种薯时，由于温度、湿度较高，蚜虫大量发生，加之老基地的连年种植，致使脱毒种薯退化严重，同时种薯生产管理部门， 由于脱毒品种检测手段、 检测标准不普及，致使脱毒品种的质量较差，给农民带来巨大的经济损失。 试管薯体积小，无病原，储藏、运输方便，加之可以在夏季高温、高湿时进行诱导生产，并克服了试管苗移栽成活率差、剪尖扦插易污染等问题，能够取代常规试管苗直接用于繁殖， 或取代常规薯用于商品马铃薯生产， 这对于加速脱毒种薯在生产上的应用有利。

1 茎尖苗的脱毒培养

选取 32～35℃催芽 20 d 的块茎上 3～4 cm 的幼芽，自来水冲洗 30 min，75%的酒精浸泡 30 s，0.1%的升汞浸泡 5～8 min，无菌水冲洗 4～5 次，在超净工作台的解剖镜下剥离， 用解剖刀或解剖针一层一层剥去芽顶的嫩叶片，待露出1～2个叶原基和生长锥后，用解剖刀把带1～2个叶原基的生长锥切下， 立即接种在MS+1 mg/L 6-BA+1 mg/L IAA+2%糖的试管培养基上， 每个试管只接种1个茎尖， 琼脂为1%、pH 5.7～5.8。 培养基预先在 121℃湿热灭菌 20 min，接种后放在温度 20～25℃、光照度 1 600～3 000 lx、每日光照16 h 的条件下培养。 茎尖成活后30 d 左右即可看到明显增长。 在叶原基形成小叶后如未生根，可把茎尖转入无生长调节剂的培养基上， 小苗很快形成根系，经过 100～120 d，待茎尖长成 4～5 节、5～6 片叶的茎尖苗时， 进行单节切段接种到MS 三角瓶培养基上，注明编号，经过30 d 左右再把三角瓶中的小苗单节切段接种到3～4个三角瓶中， 待瓶中苗高10 cm左右时，直接将2～3 瓶苗进行病毒检测，或移栽于温室供病毒检测用，留一瓶保存于培养室内，用于检测后的扩繁。

2 茎尖苗的病毒检测

常用目测法和指示植物检测法进行检测。 目测法即选生长快、叶色浓、叶平展、生长健壮的茎尖苗，除去长势弱、叶色淡、叶片上出现花叶褪绿斑的茎尖苗；指示植物检测是将症状可疑的植株作接穗，然后用指示植物千日红进行汁液接种，接种2 周后，在指示植物的叶片上出现病斑，应将对应的茎尖苗除去。同时还可到省农科院进行血清检测。

3 脱毒苗的继代繁殖技术

在无菌条件下，将待繁的脱毒苗一叶一节切段，扦插于1/2MS 培养基中，3 d 后，50%的切段萌根，5 d后全部生根，3～5 d 腋芽萌发。 30 d 左右长成 5～7 片叶的试管苗，可再进行循环繁殖。

4 试管薯综合诱导技术

4.1 壮苗培养

将脱毒苗切去顶部和基部， 把长到3～4 节的茎段放入液体培养基中培养，每瓶放入10个茎段。 液体培养基为 MS 基础培养基， 附加 0.5 mg/L 6-BA、0.1 mg/L NAA 和 0.15%活性炭及 3%的蔗糖，在三角瓶中作浅层液体静止培养。 培养室的温度为20～25℃，每日光照16 h，光照度在2 000 lx 以上，茎段培养3～5 d 即有腋芽萌出，4 周左右瓶内长满小苗，即可转入暗培养诱导试管薯。

4.2 试管薯诱导

试管苗经过壮苗培养以后， 即可加入专门诱导培养基进行暗培养诱导试管薯。 试管薯诱导的培养基为 MS+5 mg/L 6-BA+100 mg/L 矮壮素+0.5%活性炭+8%蔗糖。 暗培养需要在无菌室内更换培养基，以防污染，把原液体培养基倒掉，加入诱导培养基，封口后放在暗培养室中培养，暗培养应以散射光为主，温度保持在18～20℃， 培养5 d 后即有试管薯出现，55～70 d 即可收获。

5 试管薯繁育技术

试管薯由于体积小， 在生产应用中技术要求较高，因而将其在温室、网室种植繁育原原种、原种后再加以利用。 经过室内诱导的脱毒试管薯，在其度过3～4个月的休眠期后，才可进行温室、网室的种植。但在种植前应清除温 （网） 室中的杂草并喷施乐果灭蚜， 同时将栽培基质如蛭石用0.1%的高锰酸钾喷施灭菌，试管薯可采用直接播种于育苗盘中的方法，每盘播种50 棵，出苗后定期浇水喷施营养液，营养液的成分见表1。 2个月后可收获原原种，平均单株结薯 3～4个，每个微型薯重2～3 g，每盘可收获脱毒微型薯 150～200个。

表1 脱毒马铃薯无土栽培营养液成分

用该种方法繁育的脱毒马铃薯原原种， 每天要喷水，隔2 d 浇1 次营养液，管理比较麻烦，并且幼苗生长也不够健壮， 不能获得较高的产量。 为此，从2009年开始对该种繁育方法进行了改进， 其做法是先把土壤耕翻耙平做畦， 然后施入腐熟的有机肥2 000～2 500 kg/亩， 每平方米撒施 8～10 g 地菌净灭菌，然后铺上10～12 cm 厚的蛭石，每立方米蛭石中加入1 kg 磷酸二铵以保证幼苗健壮生长， 播种时按15 cm×10 cm 行株距播种，播深 5～7 cm，播后覆盖蛭石，这样在生长过程中一般只需进行水分管理，特殊情况下，喷施一定量的微量元素肥料，管理简单，并能获得较高的原原种产量， 其对照为直接在蛭石中播种，产量结果见表2。

由表2 可知， 改进栽培方式后的脱毒马铃薯原原种小区产量， 由原来的 13.4 kg 增加到 23.5 kg，增产 42.9%， 差异极显著， 单株薯重由 19.6 g 增加到36.5 g。 该种栽培方式极大地提高了脱毒马铃薯的产量，为马铃薯的原原种生产打下了良好的基础。

表2 不同栽培状况下的脱毒马铃薯原原种产量比较

6种性保纯

在试管薯诱导与原原种繁育成功的基础上，选择适宜的保种技术尤为重要， 因二季作地区5月中旬蚜虫大量发生，生产上应采取防蚜、避蚜措施，防止种薯退化、保持良种种性。 因此，首先必须选择适宜的繁种地点，原种繁殖地点要选在地势高寒、蚜虫少、 天然隔离条件好和无传播病毒及细菌性病害的土地， 一般选禾本科作物的前茬，3年以上未种过马铃薯的地块，500 m 以内没有其他的马铃薯生产田，良种生产田也要和商品薯生产地块严格分开。 针对枣庄市马铃薯生产的特点， 应主要采取以下保种繁育技术。

6.1 阳畦保种

阳畦繁种于1月20日前后催芽，2月中旬播种。可取南北走向， 并选背风向阳的地点做畦， 畦宽1.2 m、深33 cm，长度根据需要和面积而定，在畦内每平方米施腐熟的圈肥25 kg，铺平后深翻，浇足底水，建1 m 高的拱架，播前在畦内喷800 倍液的乐果乳剂防治蚜虫， 在畦内南北向播种3 垄种薯， 每垄2 行，垄距40 cm，株距16 cm。 播完后先覆纱网后覆盖薄膜，并把小棚封好，待4月中旬气温稳定在15～20℃时，撤掉薄膜，只留防虫网直至收获。

6.2 春季早种早收、秋季晚播繁种

根据本市的生产特点和蚜虫发生规律， 春季可采用三膜覆盖于1月中下旬播种或采用双膜覆盖于2月中旬播种，4月下旬或5月初收获， 以避开蚜虫的发生期。 秋季繁育可于8月中下旬播种，同时早春的密度可加大到1 万～2 万株/亩， 秋播的密度可达0.8 万株/亩。于霜降之前收获，在繁育过程中，要做到精细管理，及时防治病虫杂草。