牛副结核病的病原检测

张叶茹

摘要：牛副结核病在全球流行广泛，严重影响着畜牧业的发展和人类的健康。本文通过对几种牛副结核病诊断方法的研究，筛选出在生产中容易得到推广与应用的几种方法，从而为控制和消灭副结核病发挥作用。应用染色法检测方法来检测牛血清中的副结核分枝杆菌抗体具有快速、灵敏、准确的特点，其结果与临床检查结果相一致。

关键词：牛副结核；病原；检测法

牛副结核病（PTB）又名约翰氏病是由鸟分枝杆菌亚种肺结核（MAP）引起的慢性、进行性、传染性肉芽肿性肠炎，影响反刍动物，特别是奶牛和多种家畜。临床疾病和无症状动物是主要感染源。传染源是初级的，通过受感染动物的初乳、乳汁含有粪便的饮用水、胎盘和精液垂直传播。动物的高密度、较差的卫生条件和土壤质量（酸性和潮湿土壤）有利于感染的传播。牛副结核病是一种普遍存在的传染病，在不利的环境因素具有较高的传播力，构成了疾病传播的风险。

用于PTB鉴定的细菌学方法是染色法，它是基于分枝杆菌经品红染色后耐酸性酒精脱色的能力。结果是定性的。该方法具有简单、快速、廉价的优点，但对粪便、初乳和牛奶样品的灵敏度和特异性较低。在严重腹泻的情况下，MAP浓度相对于粪便量降低，从而增加假阴性结果的可能性。类似的情况也发生在患有亚临床PTB的动物身上。在涂片或组织切片中粪便排泄率较低，尤其是在回盲瓣或有明显病变的肠淋巴结上，病变内巨噬细胞内10～20个颜色鲜艳的杆菌群的可视化高度提示PTB，易于检测。

通过细菌培养鉴定活菌图谱被认为是参考诊断试验的标准。粪便、初乳、牛奶或肠粘膜碎屑可用作样本。为了降低成本，粪便培养可分为3～5个单独的样本进行，而不损失活性。在奶牛场中，也可以从牛奶收集系统的过滤器、牛奶罐和/或同一动物的粪便处收集样品。由于受感染的牛可以排泄10～12公斤的粪便并污染环境，因此还建议从粪便和/或排泄区培育牧场土壤样品。由于副结核杆菌和其他细菌的生长速度不同，在接种到培养基之前对样品进行净化，有可能杀死快速生长的竞争对手。有不同的方法可以做到这一点，但最流行的是十二烷基氯化吡啶。这种化学去污需要一天的工作，并且可以在的有效減少MAP的数量。据估计，经过去污程序后，细菌培养中的预期污染率为7%，组织培养中的预期污染率为0.2%（96）。粪便样本的污染部分与取样时动物的喂养方式有关。

由于在粪便和/或牛奶中排泄的酸性磷酸酶的数量变异性，直接影响诊断试验的敏感性，因此样品中微生物的浓度是分离方法的一个重要变量。一种细菌富集技术沉淀过滤法可以被用于检测。沉淀过滤法技术部分提高了MAP的检测，但增加了污染物的数量。在牛奶样品中，离心可以得到3种不同浓度的MAP。在2500克离心15分钟后，沉积物中MAP的浓度最高（69.4%），17.6%残留在乳清中，13%残留在脂肪中。声称MAP对牛奶的不同部分具有不同的亲和力，这取决于它们的加工过程（27）。因此，在离心前经过冷热处理的牛奶中，最高浓度的MAP出现在沉积物部分，而在未经处理的牛奶中，细菌主要出现在脂肪部分。在较低范围内的沉积物部分，乳清分离过滤是基于MAP形成比其他细菌和真菌更大的团块的趋势，这允许良好的浓度差。