东弗里升细管冻精与洼地绵羊杂交改良研究

吴 昊，任艳玲，马文奎，朱宽峰，王建军，沈志强，徐 尚，周 强，富 强，富俊才，刘国世*

（1.中国农业大学动物科学技术学院，北京 100193；2.山东省滨州畜牧兽医研究院，山东滨州 256600；3.北京田园奥瑞生物科技有限公司，北京 100096；4.内蒙古金草原生态科技集团有限公司，内蒙古巴彦淖尔 015115；5.察右前旗强禾生态种业有限公司，内蒙古乌兰察布 012200）

东弗里升是世界著名的奶绵羊品种，原产德国，具有极佳的生产性能，体型结构良好，体躯宽长，优秀个体泌乳量达1 200 kg 以上。我国现有绵羊品种基本以肉用和毛用品种为主，奶用绵羊存栏甚少。因此，培育乳肉兼用品种具有巨大的市场发展潜力。洼地绵羊是《山东省地方畜禽品种保护名录》地方保护品种，羊肉鲜美，多胎，耐粗饲，哺乳能力强。陈其新等将东弗里升、杜泊羊与小尾寒羊进行经济杂交对比试验，东寒F代的平均初生重和成活率优于杜寒杂交后代。因此，将东弗里升与洼地绵羊进行杂交，可以将东弗里升产奶性能和宽大体型结构的生产性能与洼地绵羊的多胎性状和肉质鲜美的生产性能相结合，继而培育出具有多种优秀性状的新品种，满足市场需求。精液冷冻和腹腔内窥镜输精是进行种质资源保护和提高优秀种公羊利用效率的重要途径。王一明等利用细管冻精腹腔内窥镜输精技术进行哈萨克羊的品种改良，效果良好。本研究制备东弗里升细管冻精，利用腹腔内窥镜技术对洼地绵羊进行输精，以期获得具有多种优秀性状的新品种。

1 材料与方法

1.1 实验动物 2 只东弗里升种公羊选自内蒙古察右前旗强禾生态种业有限公司种羊场，年龄为2～3 岁，膘情上等，体质健壮；28 只洼地绵羊选自山东省滨州畜牧兽医研究院羊场，所有母羊健康无病，膘情良好。所有羊按常规方式进行饲养管理。

1.2 药品与试剂 孕马血清促性腺激素（PMSG）购自宁波三生药业有限公司；阴道栓（EAZI-BREED-CIDR）购自北京绿欣康农牧科技有限公司；精液冷冻稀释液及0.25 mL 细管购自上海卡苏生物科技有限公司；新鲜鸡蛋、酒精、碘酒、新洁尔灭、土霉素等为国产。

1.3 主要仪器 实验仪器主要包括精液质量分析系统[CASAS-QH-III 型（TSINGHUATONGFANG）]、电热数显恒温水浴锅（JOANLAB，SYG）、冰箱（BCD-215DM，海尔）、光学显微镜（LV100ND，NiKon）、腹腔内窥镜系统（K3EC-2358，德国KARL）、程序冷冻仪与全自动细管灌装封口机为北京田园奥瑞生物科技有限公司自主研发。

1.4 实验方法

1.4.1 东弗里升冻精制备 使用假阴道法采集公羊精液，立即于37℃下进行常规品质检查。选择活力在0.8 以上的精液，用精液冷冻稀释液等比例稀释至7 倍，每支0.25 mL冻精总精子数5.0×10个，即精子密度2.0×10个/mL。然后将稀释好的精液放入4℃低温操作柜中降温平衡3～4 h 后灌装封口。使用程序化冷冻仪进行冷冻，冷冻曲线（4～-10℃，-5℃/min；-10～-100℃，-55℃/min；-100～-140℃，-20℃/min）。

1.4.2 精液品质检测 利用计算机辅助精液分析系统[CASAS-QH-III 型（TSINGHUATONGFANG，北京，中国]进行运动指标分析，运动指标包括活力、曲线速度（VCL）、直线速度（VSL）、平均路径速度（VAP）、精子头侧摆幅度（ALH）、快速直线运动精子比例。

1.4.3 洼地绵羊同期发情处理 使用CIDR+PMSG 法对洼地绵羊进行同期发情处理。在发情周期内随机选取1 d植入CIDR 栓（含0.3 g 孕酮），将其定为第0 天，第12 天撤去CIDR，注射280 IU 孕马血清促性腺激素（PMSG），12 h 后用公羊试情，记录发情时间。

1.4.4 腹腔内窥镜输精 将细管冻精取出，于37℃水浴1 min 解冻，立即取出备用。将经过同期发情处理且确认发情的洼地绵羊进行保定。采用腹部微创手术法进行微创开孔，腹腔内窥镜观察，单侧卵巢卵泡1 个及以上则进行输精或直接进行输精。每只同期发情母羊输解冻后细管冻精2 支，冻后精子活力0.5 左右，每侧子宫角各输精1 支。然后用少量磺胺处理创口后缝合1 针，注射黄体酮和土霉素。

1.4.5 东洼F代生长发育测定 东洼F代羔羊出生哺乳1 月后，进行常规舍饲圈养。使用卷尺分别于出生、6、12 月龄和18 月龄测定后代体重数据，并详细记录育肥期后代体重变化情况，计算耗料增重比。耗料增重比=消耗饲料总量/增重总量。

1.4.6 统计分析 精液冷冻前后相关指标检测重复 3 次，数据使用SPSS 25.0 进行单因素方差分析（One-way ANOVA），结果均以平均值±标准差表示。>0.05 表示无显著差异，<0.05 表示差异显著。

2 结果

2.1 东弗里升绵羊鲜精理化特性分析 由表1 可知，2只东弗里升EF1（249）、EF2（239）精液的采精量、密度和颜色均无显著差异。

表1 东弗里升鲜精质量检测

2.2 东弗里升绵羊冷冻前后活力及运动能力分析 由表2 可知，EF1 个体的VCL、VAP、ALH 和快速运动精子比例均低于鲜精组（<0.05）。EF2 个体的 VCL、ALH 和快速直线运动精子比例均低于鲜精组（<0.05）。

表2 东弗里升绵羊精液运动能力分析

2.3 东弗里升冻精与洼地绵羊腹腔内窥镜输精 利用腹腔内窥镜技术对28 只洼地绵羊母羊进行内窥镜输精，结果显示妊娠率为71.43%（20/28），产羔率为128.57%（36/28）。

表3 东弗里升冻精与洼地绵羊输精杂交统计

2.4 腹腔内窥镜输精产羔情况统计 如表4 所示，5 只母羊单产1 羔，8 只母羊单产2 羔，5 只母羊单产3 羔，2 只流产，窝产2～3 羔比例为72.22%（13/18）。随窝产羔数增加，羔羊平均出生重降低。

表4 洼地绵羊单胎产数分布统计

2.5 东洼杂交F代生长发育及育肥效果分析 如表5 所示，东洼杂交F代同时期体重均高于洼地绵羊，18 月龄东洼杂交F代母羊高于洼地绵羊母羊（<0.05）。由表6 可知，东洼F代育肥期平均日增重、耗料增重比均高于洼地绵羊（>0.05）。

表5 东洼杂交羊与洼地绵羊不同月龄的体重

表6 东洼杂交羊与洼地绵羊育肥效果比较

3 讨论

3.1 腹腔内窥镜输精 绵羊同期发情处理常用阴道栓法，包括CIDR 栓和海绵栓等。阴道栓法具有使用安全、发情率高、无不良反应等优点。本次实验中，为保证同期发情效果，使用CIDR 栓法进行埋植，同时准确保证了放栓、撤栓、输精时间，因此保证了较高的发情率。绵羊冻精输精的妊娠率目前无法超过50%，本实验采用腹腔内窥镜输精方式进行输精。腹腔内窥镜输精技术减少了精子的运动距离，能够提高冷冻精液受胎率。张效生等对腹腔内窥镜输精效果的影响因素进行研究，筛选出最佳输精时间为撤栓后48 h、最佳输精部位为子宫角前、中段，最低有效输精剂量为2×10个。在本研究中，腹腔内窥镜输精借鉴了以上技术要点，输精时间采取撤栓后48 h，输精部分为子宫角前段。为保证妊娠效果，输精剂量达到3×10个。石国庆等用腹腔内窥镜对活力仅0.2 的冷冻精液进行子宫角深部输精，情期受胎率达72.73%。张朝玉等对135 只萨福克羊开展内窥镜输精配种试验，一次输精受胎率达到84%。本研究中洼地绵羊的妊娠率为71.43%，平均胎产羔1.8 只，取得较为理想的效果。

3.2 东洼杂交F代生长性能分析 家畜杂交改良可以把同一畜种内不同品种之间优势生产性状整合到一起，培育出具有多种优秀生产性能的个体。张永东等将澳大利亚白羊、杜泊羊和小尾寒羊进行杂交，后代繁殖性能好，生长率高。王志武应用萨福克羊改良山西本地羊，杂交1 代的胴体重平均提高7.73 kg，羊单只利润增加196.40 元，改良效果显著。本研究将东弗里升绵羊与洼地绵羊进行杂交，预期将东弗里升的产奶性能和洼地绵羊的多胎性能相结合，培育出乳肉兼用新品种，测定发现东洼杂交F代的同时期体重均高于洼地绵羊，其中18 月龄F代母羊显著高于洼地绵羊母羊；育肥处理后，东洼F代育肥期的平均日增重、耗料增重比均高于洼地绵羊，但差异不显著。李义海等将东弗里升与湖羊杂交，发现F代的体长、体高、胸围测定结果显著优于湖羊。因此，东弗里升可以作为优质改良品种，提高绵羊的生长性能。

4 结论

本实验通过细管冻精腹腔内窥镜技术进行东弗里升与洼地绵羊杂交，产羔率为128.57%（36/28），F代育肥期的平均日增重、耗料增重比与洼地绵羊相比有所提高。