饲粮中添加槲皮素对产蛋中后期蛋鸡蛋品质和脂代谢的影响

魏 翊 刘永发 巩 璐 扶佳欢 班志彬,2 呙于明 张炳坤*

(1.中国农业大学动物科学技术学院，动物营养学国家重点实验室，北京100193；2.吉林省农业科学院，长春130000)

蛋鸡产蛋高峰后期，生产性能和蛋品质都会随着日龄的增加而下降[1]，且产蛋中后期蛋鸡腹部沉积大量脂肪，卵巢和输卵管被大量脂肪包裹，尤其是分泌蛋壳的子宫部周围脂肪沉积增加，这会影响蛋壳形成，降低蛋壳质量[2-4]。因此，降低产蛋中后期蛋鸡的腹脂沉积，改善输卵管健康，是提高产蛋中后期蛋鸡蛋品质量的有效手段。研究表明，添加黄酮类化合物可以提高蛋鸡的生产性能，改善脂代谢和蛋品质[5]。槲皮素作为一种多酚类黄酮，主要以糖苷形式存在于各种食物中，包括浆果、洋葱和青葱、苹果、茶和巧克力[6]，其具有多种生物活性，包括改善肠道环境、抗氧化和抗凋亡特性[7-9]，其能通过改善异常脂代谢缓解机体脂肪沉积，提高产蛋性能和蛋品质[10-11]。但是目前槲皮素对蛋鸡影响作用的研究大多集中在产蛋前期或高峰期[12-15]，对产蛋中后期的研究较少，尤其是腹脂沉积和脂代谢等方面，目前尚无深入研究。因此，本试验以产蛋中后期的海兰褐蛋鸡为试验对象，研究槲皮素对产蛋中后期蛋鸡蛋品质、腹脂率和血清脂代谢等指标的影响，为改善产蛋中后期蛋鸡蛋品质和腹脂沉积提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物与试验饲粮

试验选用健康且体重[(2 110.8±105.5) g]相近的46周龄海兰褐蛋鸡320只，随机分为4组，每组8个重复，每个重复10只鸡，密闭鸡舍阶梯式笼养。试验分为预试期1周和正试期10周，预试期饲喂玉米-豆粕型基础饲粮，期间对蛋鸡进行替换，保证各组间蛋鸡初始体重和产蛋率相近；正试期对照组饲喂基础饲粮，试验组分别饲喂在基础饲粮中添加100、300和600 mg/kg槲皮素(购自陕西某生物科技有限责任公司，纯度为98%)的试验饲粮。基础饲粮参照NRC(1994)和《海兰褐蛋鸡管理手册(2008)》配制。基础饲粮组成及营养水平见表1。

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)

续表1项目 Items含量 Content营养水平 Nutrient levels3)表观代谢能 AME/(MJ/kg)11.67粗蛋白质 CP16.60钙 Ca 3.59有效磷 AP0.32苏氨酸 Thr0.58色氨酸 Try0.17蛋氨酸 Met0.42赖氨酸 Lys0.85蛋氨酸+半胱氨酸 Met+Cys0.72

1.2 饲养管理

试验开始前鸡舍清扫消毒，根据试验设计进行笼位编号。每天光照16 h，光照强度为20 lx左右。鸡舍温度控制在20～22 ℃，相对湿度50%～80%，舍内负压式通风。试验期间自由采食和饮水，每天清粪、喂料和捡蛋。人工喂料(每日2次，07：30、14：00)、捡蛋(每日1次，15：00)。每周消毒1次，常规免疫。

1.3 样品采集

蛋鸡饲养到56周龄的最后1 d晚上进行断料，12 h后称重，并记录蛋鸡重。称重后再饲喂各组对应饲粮，从每个重复中随机挑选1只体重相近的蛋鸡，按照指标测定要求采血后解剖，将肝脏、脾脏和腹脂分离后，置于-20 ℃保存，直至进一步检测。

1.4 指标测定与方法

1.4.1 蛋品质

在试验期第10周的最后1 d收集试验蛋鸡当天所产的所有鸡蛋，用蛋品仪(NABEL，日本)测定蛋重、蛋壳强度、蛋白高度、哈氏单位、蛋黄重量。使用电子数显卡尺测定鸡蛋大头端、中部和小头端的蛋壳厚度和鸡蛋的长径、短径，并计算蛋壳厚度均值和蛋形指数(长径/短径)。

1.4.2 器官指数和腹脂率

试验结束时，每个重复选择1只鸡，采血处理后剖开称取肝脏、脾脏和腹脂。按照下述公式计算肝脏指数、脾脏指数和腹脂率：

肝脏指数(‰)=(肝脏重/体重)×1 000；
脾脏指数(‰)=(脾脏重/体重 )×1 000；
腹脂率(‰)=(腹脂重/体重)×1 000。

1.4.3 血常规指标

试验结束后(第56周龄)，蛋鸡饥饿8 h后从每个重复中随机挑选1只称重，翅静脉采血于含有肝素钠抗凝管中，采用血常规生化仪(Sysmex K4500，日本)测定白细胞计数(WBC)、红细胞计数(RBC)、血红蛋白含量(HGB)、大型血小板比率(P-LCR)等血液常规指标。

1.4.4 肝脏甘油三酯(TG)含量

常温解冻-80 ℃冷冻的肝脏样品，称取10 g左右并记录肝脏鲜重，冷冻干燥机(FD-1A-50，北京博医康实验仪器有限公司)冻干并称重。按照GB/T 6433—2006的方法，称取1.0 g左右肝脏冻干样品装入滤纸包内，记录滤纸包、样品重和二者的总重。在索氏提取器内倒入石油醚(沸点30～60 ℃)，放入装有样品的滤纸包，抽提4～6 h；取出已抽提完毕的滤纸包，放入通风橱中，使残留的石油醚挥发完毕，再放入烘箱烘干后，称取烘干后的含有样品的滤纸包重量，计算肝脏甘油三酯含量。

肝脏甘油三酯含量(%)=(肝脏冻干重-脱脂
肝脏重)/肝脏冻干重×100。

1.4.5 血清脂代谢指标

试验结束后，每个重复随机选取1只蛋鸡，饥饿8 h后翅静脉采血5 mL左右于惰性带分离胶离心管中，4 ℃下3 000 r/min离心15 min，分离血清将其分装，保存在-80 ℃冰箱中。采用全自动生化分析仪(深圳市库贝尔生物科技有限公司，iChem-340)测定血清中总胆固醇(TC)(CHOD-PAP法)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)(直接法-选择抑制法)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)(直接法-表面活性剂清除法)、TG(GPO-PAP法)和游离脂肪酸(NEFA)(ACS-ACOD法)含量，先将血清样本用MX-S涡旋仪[大龙兴创实验仪器(北京)有限公司]涡旋15 s后上机检测，读取原始数据后，进行数据转换，离群值重新上机检测。

1.4.6 血清脂联素和瘦素含量

试验结束后，每个重复选取1只鸡，饥饿8 h后翅静脉采血5 mL左右于促凝管中，4 ℃下3 000 r/min离心15 min，分离血清将其分装，保存在-80 ℃冰箱中。按照脂联素和瘦素试剂盒(购于上海酶联生物科技有限公司)说明书进行检测，在多功能酶标仪(Molecular Devices，SpectraMax i3x，美国)于450 nm处读取数据，计算血清脂联素和瘦素含量。

1.5 统计分析

试验数据先经过Excel 2010处理后，再采用SPSS 26.0的one-way ANOVA程序进行分析，F检验先确定组间方差齐性，ANOVA进行方差分析，Duncan氏法进行多重比较。Contrast命令独立于多重比较用以检验线性和二次关系。Graph pad prism 9进行绘图分析，P<0.01判定为差异极显著，P<0.05判定为差异显著，而0.05≤P<0.10判定为差异具有显著趋势。

2 结果与分析

2.1 槲皮素对产蛋中后期蛋鸡蛋品质的影响

由表2可知，与对照组相比，饲粮中添加100、300和600 mg/kg槲皮素均极显著提高了蛋壳厚度和蛋壳强度(P<0.01)，其中槲皮素添加水平为300 mg/kg时效果最好；饲粮中添加300 mg/kg槲皮素显著提高了蛋壳重(P<0.05)，极显著提高了蛋白高度P<0.01)，且对蛋重和哈氏单位有提高趋势(P=0.079和P=0.059)。随槲皮素添加水平的提高，蛋重、蛋壳厚度、蛋壳强度呈线性和二次变化(P<0.05)，蛋白高度和哈氏单位呈现二次变化(P<0.05)。

表2 槲皮素对产蛋中后期蛋鸡蛋品质的影响

2.2 槲皮素对蛋鸡产蛋中后期器官指数和腹脂率的影响

由表3可知，与对照组相比，饲粮中添加100、300和600 mg/kg槲皮素均显著降低了蛋鸡的腹脂率(P<0.05)，对肝脏指数和脾脏指数均无显著影响(P>0.05)。随槲皮素添加水平的提高，肝脏指数和腹脂率有线性降低的趋势(P=0.095和P=0.082)，腹脂率则呈现二次变化(P=0.012)。

表3 槲皮素对蛋鸡产蛋中后期器官指数的影响

2.3 槲皮素对蛋鸡产蛋中后期血常规指标的影响

由表4可知，与对照组相比，饲粮中添加300 mg/kg槲皮素极显著提高了血小板数量(P<0.01)，大型血小板比例有增加趋势(P=0.062)，而添加100 mg/kg槲皮素则显著降低了血小板数量(P<0.05)。血小板数量随槲皮素添加水平的提高有线性升高的趋势(P=0.075)，而大型血小板比率则随槲皮素添加水平的提高呈二次变化(P=0.028)。

表4 槲皮素对蛋鸡产蛋中后期血常规指标的影响

2.4 槲皮素对蛋鸡产蛋中后期肝脏甘油三酯含量的影响

由图1所示，与对照组相比，饲粮中添加100、300和600 mg/kg槲皮素均极显著降低了肝脏甘油三酯含量(P<0.01)，其中以槲皮素添加水平为300 mg/kg时效果最好，且肝脏甘油三酯含量随槲皮素添加水平的提高呈线性和二次变化(P<0.01)。

数据柱形标注无字母或相同字母表示差异不显著(P>0.05)，不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)。

2.5 槲皮素对蛋鸡产蛋中后期血清脂代谢指标的影响

由表5可知，与对照组相比，饲粮中添加100、300和600 mg/kg槲皮素均显著降低了血清LDL-C、TG和NEFA含量(P<0.05)，且上述指标随槲皮素添加水平的提高呈线性和二次变化(P<0.05)。此外，300 mg/kg槲皮素组血清TC和GLU含量极显著低于对照组(P<0.01)。随槲皮素添加水平的提高，血清TC含量呈线性降低和二次变化(P=0.003、P=0.005)，血清GLU含量呈二次变化(P=0.040)。

表5 槲皮素对蛋鸡产蛋中后期血清脂代谢指标的影响

2.6 槲皮素对蛋鸡产蛋中后期血清脂联素和瘦素含量的影响

由表6可知，与对照组相比，饲粮中添加100、300和600 mg/kg槲皮素均极显著提高了血清脂联素和瘦素含量(P<0.01)，其中血清脂联素含量分别提高了7.6%、8.9%和9.4%，血清瘦素含量分别提高了7.1%、6.7%和11.6%。随槲皮素添加水平的提高，血清脂联素和瘦素含量均呈线性(P=0.001、P<0.001)和二次变化(P=0.001、P=0.001)。

表6 槲皮素对蛋鸡产蛋中后期血清脂联素和瘦素含量的影响

近年来，一些研究证实，黄酮类化合物可以提高家禽的生产性能，改善脂代谢和蛋品质[5,16-18]。槲皮素作为植物黄酮类物质的一种，也同样具有改善蛋鸡生产性能和蛋品质的功能[19,14]。前人研究报道，饲粮中添加一定剂量的槲皮素能够改善蛋鸡脂代谢，增加蛋壳强度、蛋壳厚度和哈氏单位[10-11,20]。本研究结果表明，蛋壳强度、蛋壳厚度和蛋白高度均随槲皮素添加水平的提高呈线性增加，分析原因可能与槲皮素发挥雌激素样作用，改善输卵管健康有关，这也与前人的研究结果[13]一致。类似的发现，如呼林林[14]对29周龄海赛蛋鸡进行了为期8周的试验，结果表明，槲皮素可以显著提高蛋鸡的蛋壳厚度和蛋壳强度。有报道指出，随着母鸡年龄的增长，因鸡体激素(甲状旁腺激素、降钙素、雌激素[21-22])水平和24-羟化酶活性降低等造成钙代谢

3 讨 论

紊乱

[23]

，使得蛋壳质量下降。雌激素物质对肠道钙吸收的积极作用已在人类中得到证实

[24]

。有研究指出槲皮素具有雌激素样作用

[25]

，可提高机体雌激素水平，增加产蛋后期蛋鸡的蛋壳厚度和蛋壳强度，从而提高蛋品质

[13,26]

，这可能也是本研究中蛋壳强度和蛋壳厚度提高的原因。此外，本研究结果表明，随槲皮素添加水平的提高，鸡蛋的哈氏单位呈二次变化，提示槲皮素能一定程度保持鸡蛋的新鲜度，延长鸡蛋的存储期。

血小板是循环血液中最小的血细胞，具有多项生理活性。研究表明，机体由于免疫系统功能紊乱导致外周血循环中血小板数量减少[27]，可引起皮肤、黏膜和内脏出血，严重危及生命。其中大型血小板是指骨髓新生的血小板，其聚集和黏附功能增强，是反映血小板活化的一个重要指标[28]。当人体代谢紊乱，血管内皮损伤时，血小板消耗增多，进而导致循环血液中大型血小板数量减少[28-29]。本试验结果表明，随槲皮素添加水平的提高，蛋鸡血小板数量有线性提高的趋势，提示槲皮素可能对缓解产蛋中后期蛋鸡炎症反应有一定作用。此外，在本试验中蛋鸡血浆中大型血小板比率随槲皮素添加水平的提高呈二次变化，这与之前的研究结果[30]存在不一致，这可能与试验动物和生理状态不同有关。因为家禽血常规指标的正常范围值尚不规范，因此具体机制有待进一步研究。

家禽体内的脂肪主要包括腹部脂肪、皮下脂肪和肌内脂肪，其中脂肪沉积主要出现在腹部和皮下[31]。前人研究报道，产蛋后期蛋鸡产蛋率与腹脂沉积存在一定的相关性，相关系数为-0.69～-0.83[32]。产蛋高峰后期，母鸡产蛋量逐渐下降，且对能量较为敏感，多余的能量一般以脂肪形式在体内沉积，其中以腹部脂肪沉积最多，然而沉积的腹脂又进一步影响蛋鸡的产蛋性能[33]。前人研究表明，黄酮类化合物具有调控脂代谢等多种内分泌调节功能[34-37]。研究发现，在饲粮中添加槲皮素后，蛋鸡腹脂沉积得到明显改善，蛋壳腺因受到腹脂的挤压减弱，从而维持其正常的分泌功能，进而显著改善蛋品质量。王密[38]通过在饲粮中添加0.06%槲皮素显著降低了肉鸡腹脂率，且指出槲皮素在肝脏通过肝激酶B1(LKB1)-腺苷酸活化蛋白激酶γ(AMPKγ)-过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)信号通路增加脂质氧化分解，加强脂质从肝脏中转出，减少脂肪沉积。本试验结果表明，随槲皮素添加水平的提高，蛋鸡腹脂率有线性降低的趋势，且呈二次变化，这进一步证实了槲皮素可降低产蛋中后期蛋鸡腹脂沉积。

为了进一步研究槲皮素对腹脂沉积的影响，本试验对蛋鸡血常规指标、血清脂代谢指标和肝脏TG含量进行了研究。多项研究表明，槲皮素可以显著降低肝脏中TG含量[35,39,40-42]，且呈剂量依赖性。另外，在相关荟萃分析中，长期补充槲皮素与血清TG、TC和LDL-C含量的降低有关[43]。本研究结果显示，饲粮中添加槲皮素未改变蛋鸡血清HDL-C含量，但线性降低了血清LDL-C、TC、TG和NEFA含量，且血清GLU含量随槲皮素添加水平的提高呈二次降低的趋势。研究表明，槲皮素可以显著改善db/db小鼠的血脂异常和肝脏脂肪变性，降低肝脏中TG和胆固醇的沉积[44]，这可能是因为槲皮素通过降低血清中合成胆固醇的3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶的活性，使胆固醇合成受到抑制[45]。过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)通过调节脂肪合成和能量储存相关基因的表达，进而调节脂肪的合成、转运和储存等[38]，槲皮素可通过抑制脂肪细胞中PPARγ的表达，调节脂肪的合成和胞内沉积[46]。血液中GLU的含量可反映机体内糖代谢的平衡状态。研究表明，饲粮中添加6 mg/kg大豆黄酮可使29周龄蛋鸡血清GLU含量降低81.05%[47]，可能是因为黄酮类物质增强胰岛素敏感性和刺激β细胞分泌胰岛素来降低GLU含量[48-49]。本研究结果显示，产蛋中后期蛋鸡饲粮中添加槲皮素显著提高了血清脂联素和瘦素含量，提高了GLU的利用率和胰岛素敏感性[50]，通过胰岛素的增加和脂肪酸氧化[51]，降低肥胖和血清GLU含量，提示槲皮素有利于改善产蛋中后期蛋鸡的糖、脂代谢，进一步证实槲皮素在改善肥胖和糖尿病方面的有益作用。

4 结 论

饲粮中添加100～600 mg/kg槲皮素可线性增加产蛋中后期蛋鸡血清脂联素和瘦素含量，降低血清和肝脏甘油三酯含量，调节糖、脂代谢，减少腹脂沉积，改善蛋壳腺正常分泌功能，进而改善产蛋中后期蛋品质。在本试验条件下，饲粮中添加300 mg/kg槲皮素对蛋鸡的作用效果最佳。