一例蛋鸡H9亚型禽流感与大肠杆菌病共感染的诊治

张和阳 王梦鸽 伍志文 黄 瑜 傅光华，3

（1.福建省农业科学院畜牧兽医研究所 福州 350013；2.福建农业职业技术学院 福州 350119；3.龙岩学院 福建龙岩 364012）

H9N2亚型禽流感病毒（Avain influenza virus，AIV）在世界范围的禽群中广泛流行[1]。虽然该病致病力不高但病毒易变异，鸡群感染后往往会影响生产性能，蛋鸡感染后表现呼吸道、消化道异常及零星死亡、产蛋性能下降等症状，是近年来蛋鸡养殖的常见疾病[2]。大肠杆菌病是由大肠杆菌引发的肠道疾病，伴有继发性局部感染或全身感染，常表现为蛋鸡多个脏器病变，具有较高的发病率和病死率，传播速度极快[3]。部分蛋鸡养殖场设施化程度较低，环境卫生较差、疫病防控措施不到位，在气温骤降或持续高温等应激因素影响下，蛋鸡群很容易发生多病原共感染[4-6]。2022年3月，龙岩某蛋鸡场发生一起以产蛋率下降，伴随大面积死亡的病情。场方将病死鸡样本寄到本实验室，经检查后确诊为H9亚型禽流感与大肠杆菌病共感染，通过紧急治疗后病情得到有效控制。

1 发病情况及临床症状

龙岩某蛋鸡场饲养的3 000羽产蛋鸡群出现呼吸困难，咳嗽、流泪，产蛋量下降，并伴有产软壳蛋、畸形蛋，精神沉郁，采食量减少但饮水量增加，甩头，肛门外翻，部分有腹泻。

2 剖检病变

剖检3羽病死鸡，可见肝脏表面有白色纤维素性渗出物附着且有明显出血点，出现心包炎、肝周炎，肝脏及脾脏异常肿大易碎，肠道、气管均有出血，卵巢出血并且卵泡破裂，输卵管形成栓塞，卵黄凝固，胰腺有坏死点，喉头及鼻窦部位有脓性分泌物。

3 初步诊断

根据发病情况及临床剖检特点，疑似为禽流感、鸡安卡拉、传染性支气管炎、传染性喉气管炎、鸡传染性鼻炎和大肠杆菌病等。

4 实验室病原检查及诊断

4.1 病原检查无菌采集病死鸡的肝脏、脾脏及胰腺等实质性脏器，剪碎后与3倍体积的无菌PBS（每毫升含2 000 U青霉素和链霉素）制备成混悬液，取适量进行8 000 r/min离心5 min，取200 uL上清，以病毒DNA/RNA抽提试剂盒，按照产品说明书提取样品中的核酸。以获得的核酸作为模板，开展鸡腺病毒4型、禽流感病毒、鸡呼肠孤病毒、新城疫病毒、鸡传染性支气管炎、鸡传染性喉气管炎、鸡传染性鼻炎及产蛋下降综合征等鸡常见病毒性疾病的核酸检测。（RT-）PCR扩增产物经1%琼脂糖凝胶进行电泳。

结果表明，针对8种病毒的核酸（RT-）PCR检测发现，从样品中检测到禽流感病毒核酸（见图1），其余病原均呈阴性。将扩增产物送福州尚亚生物科技有限公司进行测序，获得序列经NCBI blast在线比对发现，与NCBI数据库中H9亚型禽流感病毒核苷酸序列同源性达99.2%以上。

图1 病原核酸扩增产物电泳图

4.2 细菌分离培养无菌采集发病鸡肝脏，挑取肝内部组织划线接种在LB培养基和麦康凯琼脂平板上，置37℃温箱培养24 h。发现麦康凯琼脂平板上长出圆形、边缘整齐、扁平、呈鲜红色的菌落。LB培养基上长出光滑、圆润、半透明菌落。根据菌落特征判断为大肠杆菌。

4.3 诊断根据以上实验室病原检测、分离鉴定结果，并结合发病鸡群临床症状及剖检病变，确定该蛋鸡群发病是因H9亚型禽流感与致病性大肠杆菌病共感染引起。

5 防 治

5.1 治疗措施发生低致病性禽流感与致病性大肠杆菌病共感染后，应采取紧急免疫接种，同时通过饮水或拌料途径给药。每100 L水添加卡那霉素和多西环素等抗生素，甘草颗粒拌料，鸡舍周边环境用0.02%百毒杀进行喷洒消毒。经过4 d的治疗后鸡群呼吸道症状明显好转，采食量和产蛋性能逐渐恢复正常。

5.2 防控措施加强鸡群疫苗免疫工作及血清抗体检测，加强饲养管理，注意养殖环境卫生，加强通风换气，做好定期消杀工作，加强带鸡消毒制度，利用中药提高动物机体抵抗力、抗生素加强抗病保健功能。发现病情后，立即采取治疗措施，诊断越及时、给药越早，治疗效果就越好。

6 讨 论

1）近年来随着家禽养殖业的迅猛发展，不同饲养规模和饲养方式的养禽企业、养殖合作社及大量散养户大量涌向，饲养条件、设施化程度及技术力量参差不齐。部分蛋鸡养殖场设施化程度较低，环境卫生较差、疫病防控措施不到位，尤其是禁抗令的实施，鸡场防疫形势更加复杂，常出现老病未除新病不断的局面，且常呈亚临床症状或多病原共感染[4-6]。

2）H9亚型禽流感病毒为低致病性病毒，在我国饲养的家禽中流行较广，感染蛋鸡致死率较低，临床上以呼吸道症状如咳嗽、啰音或鼻窦肿胀等为主，产蛋率及蛋品质下降，沙壳蛋、软壳蛋及畸形蛋增多[1-3]。

3）致病性大肠杆菌是一种常见的、对蛋鸡具有较高致死性的病原，蛋鸡发病后表现为食量下降、饮水增加、产蛋量减少，剖检病死鸡可见卵黄性腹膜炎，腹腔内散发恶臭味，腹腔中充满卵黄液，实质性脏器表面覆盖纤维素性渗出物，卵巢出血变形、卵泡破裂、输卵管内有多量浑浊物或干酪样物[3]。

4）临床上一旦出现气温骤降，或持续高温应激等，很容易出现这两种病共感染，给临床诊断带来困难，容易造成误诊或漏诊。因此在诊断时除要了解患鸭临床症状和剖检病变，还应结合病原流行病学、利用实验室检查等手段，以提高诊断的准确性。