高效液相色谱法测定洗涤剂中1,2-苯并异噻唑-3-酮含量

王 娟 雷 敏 查青青 于 文

西安开米股份有限公司，陕西西安，710075

随着洗涤剂越来越多地走入家庭，为了让消费者更放心地使用洗涤剂，需要监测洗涤剂中添加成分。其中，1,2-苯并异噻唑-3-酮作为防腐剂常添加于洗涤剂中，但目前洗涤剂中1,2-苯并异噻唑-3-酮含量的检测方法是一个空白，急需开发出一个关于洗涤剂中1,2-苯并异噻唑-3-酮含量的检测方法。

现有文献中基本上是关于1,2-苯并异噻唑-3-酮的研究方法[1,2]或原材料的检测方法[3-5]。选择1,2-苯并异噻唑-3-酮最大吸收波长为检测波长，由于洗涤剂中含有大量表面活性剂和功能成分，成分较复杂，干扰因素较多，故需对高效液相色谱法加以调整，以使其适用于洗涤剂中1,2-苯并异噻唑-3-酮的检测。笔者采用高效液相色谱法，确定了适宜的检测波长，有效去除干扰，以期建立一种准确性高、可靠性强、适用性广的检测方法。

1 实验部分

1.1 仪器及试剂

仪器：UV6000LP（二极管阵列检测器）液相色谱仪，Thermo Finnigan公司；乙腈：色谱纯，德国Merck公司；1,2-苯并异噻唑-3-酮：标准品（纯度≥99.0%，上虞三维化工公司）；无水乙醇：分析纯，安徽安特食品股份有限公司；冰醋酸：分析纯，重庆北碚精细化工厂；超纯水：自制。

1.2 色谱条件

色谱柱：Kromasil100-5C18 柱（1 5 0 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温：室温；进样方式：20 μl阀进样；检测波长：318 nm；流速：1 ml/min；流动相：A.0.35%醋酸水溶液，用0.45 μm滤膜过滤；B.乙腈；梯度洗脱：见表1。

表1 实验梯度洗脱

1.3 溶液的配制及样品处理

1.3.1 流动相的配制

流动相A：将3.5 ml冰醋酸加入1 000 ml超纯水中，混匀，用0.45 μm滤膜过滤，再用超声振荡脱气10 min，备用。

流动相B：将乙腈用超声振荡脱气10 min，备用。

1.3.2 标准溶液的制备

称取0.1000g 1,2-苯并异噻唑-3-酮标准样品于100 ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，再继续稀释配制一系列不同质量浓度的样品（0.4 μg/ml、4.0 μg/ml、10.0 μg/ml、40.0 μg/ml、80.0 μg/ml、100.0 μg/ml）备用。

1.3.3 样品溶液的制备

精确称量2.0000 g样品于50 ml容量瓶中，用无水乙醇稀释，超声振荡，定容至刻度备用。

2 结果和讨论

2.1 流动相的选择

主要进行甲醇/水系与乙腈/水系的筛选，并根据实际情况调整其配比，以达到最佳分离效果和减少干扰，最后比较看哪个体系比较适合洗涤剂中1,2-苯并异噻唑-3-酮的检测。实际实验过程中发现甲醇/水系与乙腈/水系两个体系峰形都不好，拖尾严重，于是在水中添加冰醋酸，改善峰形，并对甲醇体系与乙腈体系进行比较分析，总结出3.5%冰醋酸水溶液/乙腈起始比例75/25（体积比，v/v）、梯度洗脱能达到最佳分离效果、基线平稳和减少干扰，比较适合本项目检测。

2.2 检测波长的选择

1,2-苯并异噻唑-3-酮最大吸收波长为2 4 0 nm，其次为318 nm（图1）。由于洗涤剂中含有大量表面活性剂和其他成分，其紫外吸收波长大都在200～240 nm，在240 nm处的色谱图吸收峰较多，分离效果差，干扰大（图2a）。选择318 nm作为检测波长（图2b），其目标色谱峰与其他色谱峰分离度高，干扰峰少，提高了样品中1,2-苯并异噻唑-3-酮的检测精度，故选择318 nm作为检测波长。

图1 样品光谱图

图2 样品色谱图

2.3 线性关系

在上述色谱条件下，待仪器基线稳定后，采用浓度-峰面积外标法定量，配制质量浓度为0.4 μ g/m l、4.0 μ g/m l、1 0.0 μ g/m l、40.0 μg/ml、80.0 μg/ml、100.0 μg/ml的标准溶液进样分析。实验数据见表2，由实验得线性回归方程为y＝6×10-6X- 0.5202，r²＝0.9999，其中y为1,2-苯并异噻唑-3-酮浓度（μg/ml）、X为1,2-苯并异噻唑-3-酮峰面积、r为相关系数，r值＞0.999，说明在1,2-苯并异噻唑-3-酮浓度为0.4～100 μg/ml时线性关系良好。洗涤剂样品黏度较高，需要稀释定容后进样检测。

表2 标准曲线溶液

2.4 重复性

精确称取2.0000 g含1,2-苯并异噻唑-3-酮的样品于50 ml容量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释到刻度。按此方法配制6份样品溶液，进行6次检测，实验结果见表3。

由表3中实验结果可知，此样品检测结果RSD分别为2.40%，说明方法误差小，具有良好的重复性。

表3 重复性实验

2.5 精密度

精确称取0.1000 g 1,2-苯并异噻唑-3-酮样品于100 ml容量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀；再吸取1 ml上述溶液于25 ml容量瓶中，用无水乙醇稀释到刻度，摇匀。将此标准溶液，检测6次，实验结果见表4。由表4中实验结果可知，RSD为0.46%，说明方法误差小，精密度比较好。

表4 精密度实验

2.6 回收率

回收率实验采取已知含量（1,2-苯并异噻唑-3-酮含量1.99 μg/ml）的市售样品1作为基质样品，加入已知质量浓度的1,2-苯并异噻唑-3-酮标准溶液；精确称量2.0000 g含1,2-苯并异噻唑-3-酮的样品于50 ml容量瓶中，加入1 ml或2 ml浓度为40.08 μg/ml的1,2-苯并异噻唑-3-酮标准溶液，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，超声振荡，定容至刻度备用，利用选定的色谱条件进行分析，实验结果见表5。

由表5可知，回收率为101%～102%，满足分析要求。

表5 回收率实验（n=6）

2.7 市售样品的测试结果

精确称量2.0000 g市售样品于50 ml容量瓶中，用无水乙醇稀释，超声振荡，定容至刻度备用。测定样品中的1,2-苯并异噻唑-3-酮含量，实验结果见表6。

由表6中实验结果可知，两组市售样品的6次结果的RSD分别为2.40%和1.14%，说明方法误差小，平行性比较好。

表6 样品中的1,2-苯并异噻唑-3-酮的测试结果

3 结论

采用高效液相色谱法测定洗涤剂中1,2-苯并异噻唑-3-酮的含量方法简便、迅速，精密度高。标准溶液为0.4～100 μg/ml时线性相关，最低定量检测限为4 mg/kg，回收率为101%～102%。此方法精确、可靠，可作为产品质量控制的检测方法。