高效液相色谱-荧光检测法对动物源性食品中 氟喹诺酮类药物残留的检测

袁 丽，丁 磊，杨 希，丁建兰，欧阳倩

（1.鹰潭市检验检测认证院，江西鹰潭 335000；2.鹰潭市市场监督管理执法稽查局，江西鹰潭 335000）

氟喹诺酮（Fluoroquinolones，FQS）属于喹诺酮类，又称吡啶酮酸类，是一种化学合成的新型抗菌药，因其具有抗菌活性强、抗菌谱广、蛋白结合率低、高效、低毒、组织穿透力强、半衰期较长、用药次数少及价格低廉等特点，被广泛应用于水产和禽畜感染性疾病及临床上细菌感染性疾病的防治[1-5]。但由于氟喹诺酮类药物在动物体内代谢周期长以及养殖人员对其的不规范使用使其在动物源性食品中的残留超标。该药物残留通过食物链进入人体，严重危害人体健康。因此开展动物源性食品中氟喹诺酮类药物残留的检测。

目前，各县（或市）级检验检测机构用于检测动物源性食品中的氟喹诺酮类药物的残留量的方法主要有高效液色谱相法和液相色谱-质谱联用法。本文参照《水产品中诺氟沙星、盐酸环丙沙星、恩诺沙星残留量的测定 液相色谱法》（农业部783号公告-2-2006），通过改变色谱条件、除水剂用量的优化，为检验检测机构提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

乙腈（色谱纯，默克股份两合公司）；正己烷（色谱纯，默克股份两合公司）；盐酸（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；无水硫酸钠（分析纯，西陇科学股份有限公司）；磷酸（分析纯，西陇科学股份有限公司）。

标准品：盐酸沙拉沙星、环丙沙星、恩诺沙星（由江西省农业科学院农产品质量安全与标准研究所提供，100 μg/mL）。

1.2 仪器与设备

UltiMate3000高效液相色谱仪（配荧光检测器，赛默飞世尔科技中国有限公司）；BSA822-CW电子天平（赛多利斯科学仪器上海有限公司）；XW-80A涡旋振荡混合器（上海精科实业有限公司)；HY-4B调速多用振荡器（常州郎越仪器制造有限公司）；TG16-WS高速台式离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）；RE-5299旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；0.45 μm滤膜。

1.3 试验方法

参照标准《水产品中诺氟沙星、盐酸环丙沙星、恩诺沙星残留量的测定 液相色谱法》（农业部783号公告—2-2006）。

1.3.1 色谱条件

C18色谱柱（50 mm×46 mm，5 μm）；流动相：0.05 mol/L的磷酸溶液（三乙胺调pH至2.4）∶乙腈=82∶18（V∶V)；流速：0.8 mL/min；柱温：40 ℃；进样量：20 μL；荧光检测器：激发波长280 nm，发射波长450 nm。

1.3.2 样品处理

（1）提取。准确称取样品5 g于50 mL离心管中，加入酸化乙腈20 mL后迅速涡旋，涡旋2 min，再加入无水硫酸钠5 g，经摇床振荡20 min，4 000 r/min 离心5 min，取上清液。残渣中加入酸化乙腈20 mL， 重复上述操作一次，合并上清液。

（2）净化与浓缩。将上清液置于分液漏斗中，加入乙腈饱和的正己烷25 mL，振荡1 min，充分静置，取下层乙腈层移入鸡心瓶，40 ℃旋转蒸发至干。用流动相2.0 mL溶解残渣，经0.45 μm微孔膜过滤，滤液经高效液相色谱仪测定。

1.3.3 标准工作曲线的绘制

分别精密吸取标准品盐酸沙拉沙星、环丙沙星、恩诺沙星于10 mL容量瓶中，用流动性逐级稀释成浓度为5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL和300 ng/mL的标准系列工作溶液。

2 结果与分析

2.1 色谱条件的优化

农业部783号公告-2-2006中采用的流动相四丁基溴化铵保存期短且需冷藏保存，本次试验采用农业部1025号公告-14-2008中的乙腈∶磷酸溶液为流动相，流动相易保存、易配制，且3种氟喹诺酮类化合物的分离效果好、峰形好、响应值高，色谱图见图1。

图1 3种氟喹诺酮类化合物标准品在50 ng/mL下的色谱图

2.2 提取条件的优化

无水硫酸钠是常用的除水剂，农业部783号公告-2-2006中加入30 g的无水硫酸钠虽然能起到很好的除水作用，但大量的无水硫酸钠会包裹在被测样品表面，使得乙腈提取液无法有效提取样品中的待测物。本试验过程中比较了无水硫酸钠不同用量的影响，分别加入3 g、5 g、10 g无水硫酸钠，试验结果表明无水硫酸钠用量为5 g时，3种氟喹诺酮类化合物的回收率达到最高。

2.3 标准曲线和检出限

以标准工作溶液浓度为横坐标、各化合物色谱峰面积为纵坐标绘制曲线，得到3种化合物的标准曲线；以3倍信噪比时对应的浓度得到化合物的检 出限。

从表1可见，3种化合物的线性相关系数均大于0.999，表明在5～300 ng/mL浓度范围内3种化合物均呈现良好的线性关系；3种化合物的仪器检出限为0.004～0.010 μg/kg。

2.4 精密度试验

将浓度为50 ng/mL的盐酸沙拉沙星、环丙沙星、恩诺沙星混合标准溶液分别连续进样8次，记录其峰面积，精密度用峰面积变化的RSD表示。如表2所示，盐酸沙拉沙星、环丙沙星、恩诺沙星的RSD分别为0.27%、0.29%、0.30%，均小于2%，表明精密度良好。

2.5 加标试验

按试验方法对空白鱼肉、猪肉样品进行加标回收试验，3种氟喹诺酮类药物的加标量分别为4 μg/kg、40 μg/kg、80 μg/kg，计算回收率和测定值的相对标准偏差，结果见表3。鱼肉和猪肉中3种氟喹诺酮类药物的回收率是62.80%～94.45%，回收率均能达到标准要求，相对偏差为0.29%～5.30%，精密度 较好。

表3 不同浓度下3种氟喹诺酮类药物的添加回收率

3 结论

本试验以农业部783号公告-2-2006为基准，对检测鱼肉、猪肉中氟喹诺酮类化合物残留量的检测方法进行优化，结果表明鱼肉和猪肉中3种氟喹诺酮类药物的回收率均能达到标准要求，能够为检测动物源性食品中的氟喹诺酮类药物的残留量提供参考。