四种婴幼儿湿疹外用方剂对小鼠急性湿疹的影响

吴白芬 尚李 尚怡 彭海燕 刘录 何芳雁 周志宏 浦仕彪

【摘 要】 目的：研究4种婴幼儿湿疹外用方剂对急性湿疹模型小鼠的影響，为临床应用提供实验依据。方法：采用2，4二硝基氟苯（DNFB）诱导小鼠迟发性超敏反应及特异性皮炎模型，给予不同浓度的4种外用方剂观察药物治疗作用。结果：模型组小鼠耳肿胀度、脾脏系数及皮肤损伤程度均明显高于正常对照组;各给药组连续局部涂药7d，均可明显抑制DNFB诱导小鼠的耳肿胀，明显降低脾脏系数，不同程度抑制胸腺系数，并对皮肤损伤组织有一定修复作用。结论：4种外用方剂均能明显抑制DNFB诱发小鼠的迟发型超敏反应，并对特异性皮炎（急性湿疹）具有一定防治作用。

【关键词】 外用方剂;婴儿湿疹;变态反应;特异性皮炎

【中图分类号】R285.6 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2022）08-0022-05

Effects of Four External Infantile Eczema Prescriptions on Acute Eczema in Mice

WU Baifen1，2 SHANG Li1 SHANG Yi1 PENG Haiyan1 LIU Lu1 HE Fangyan1 ZHOU Zhihong1 PU Shibiao1*

1.Yunnan University of Chinese Medicine Engineering Research Center of Decoction

Pieces of Traditional/ Ynnan University of Chinese Medicine，Kunming 650500，China;

2.Yunnan University of business management， Kunming 650106，China

Abstract：

Objective The effects of four external infantile eczema prescriptions on acute eczema model mice were studied to provide experimental basis for clinical application.Methods The model of delayed hypersensitivity and specific dermatitis induced by 2，4-dinitrofluorobenzene （DNFB） in mice was used to observe the therapeutic effect of four external prescriptions with different concentrations.Results The degree of ear swelling， spleen coefficient and skin damage in the model group were significantly higher than those in the normal control group. Each administration group was continuously applied locally for 7 days， which could significantly inhibit the ear swelling of mice induced by DNFB， significantly reduce the spleen coefficient， inhibit the thymus coefficient to varying degrees， and have a certain repair effect on the damaged skin tissue.Conclusion Four external prescriptions can significantly inhibit the delayed type hypersensitivity induced by DNFB in mice， and have a certain preventive effect on specific dermatitis （acute eczema）.

Key words：

External Prescription; Lnfant Eczema; Allergic Reaction;Specific Dermatitis

婴幼儿湿疹又称为特应性皮炎，是常见病、多发病，有研究[1]表明新生儿期至3岁是婴幼儿湿疹的高发期。婴儿湿疹确切病因尚不清楚，一般认为是由内、外因素共同作用而引发的变态反应性皮肤疾病，主要与遗传、感染、环境、饮食、皮肤屏障功能破坏及机体免疫功能失调等因素相关，婴儿期免疫系统发育不成熟也是重要的发病因素[2]。中医对湿疹的外治法是根据皮损的性质和发病部位的不同，选择适当的药物和剂型，进行外洗、湿敷、涂抹、喷雾、熏洗或坐浴的方法，具有疗效好、作用直接、疗程短、副反应小的优势[3]，可缓解临床症状，有效改善皮损，避免了外用激素的不良反应，并在一定程度上可控制疾病复发，故越来越受到重视。本文采用DNFB诱导小鼠迟发性超敏反应及特异性皮炎模型，考察4种云南某中医馆处方、民族民间验方及自拟外用方剂对婴幼儿湿疹的影响，以期为临床应用及进一步开发提供科学依据。

1 材料

1.1 实验动物 雄性ICR小鼠，5～8周龄，体重18～26g，成都达硕实验动物有限公司，SCXK（川）2015-030。

1.2 试剂 2，4-二硝基氟苯（DNFB，批号：F20120726，中国医药集团上海化学试剂公司）;橄榄油（批号：20160912，国药集团化学试剂有限公司）;丙酮（批号：20160626，天津市富宇精细化工有限公司）。D73C34DF-7F3F-4D48-9614-F757F9A02C05

1.3 受试药品 皮炎平（复方醋酸地塞米松乳膏，批号：1706004H，华润三九医药股份有限公司）;儿肤康搽剂（批号：170807，成都森科制药有限公司）。方剂1（1#）由显齿蛇葡萄、桑白皮及三七组成。方剂2（2#）由显齿蛇葡萄、桑白皮及全蝎组成。方剂3（3#）由白鲜皮、紫草及全蝎组成。方剂4（4#）由显齿蛇葡萄、白鲜皮、紫草、桑白皮、三七及全蝎组成。取各处方药材，分别加水煎煮三次，合并滤液浓缩至含生药浓度依次为0.84、0.80、0.80、1.04g/mL，于4～8 ℃冷藏备用。

1.4 仪器 HX602Z电子天平（慈溪市大东衡器厂）;ADVENURERTM电子天平（奥豪斯仪器（上海）有限公司）;10～100 μL移液器（Eppendorf）;8 mm打孔器、剪刀、眼科弯镊、止血钳等。

2 方法

2.1 DNFB致小鼠迟发型超敏反应[4] 选18～20g雄性小鼠，试验前背部脱毛。除随机抽取10只为正常对照外，其余造模动物均于腹部涂抹2% DNFB致敏，次日再加强1次。将模型动物随机分为11组，于2次致敏后4 h开始于背部脱毛区及双耳内外涂布给药。正常和模型对照组给予纯水（背0.5 mL、每耳50 μL），化药对照组给予皮炎平（背10mg、每耳5mg），中药对照组给予2倍稀释的儿肤康搽剂（背0.5 mL、每耳50 μL），各方剂样品高、低剂量组分别给予5倍及10倍稀释的原液（背0.5 mL、每耳50 μL）;每日2次，连续7 d。致敏第7 d，末次给药后30min，各小鼠用0.5% DNFB丙酮橄榄油溶液30 μL涂抹右耳内外两侧进行激发，左耳涂等量混合基质为对照。激发后24 h脱颈椎处死动物，剪下双耳，以直径8 mm打孔器取双耳片称重，计算肿胀度即迟发性超敏反应值，并摘取胸腺、脾脏称重，计算脾脏和胸腺系数。结果见表1。

2.2 DNFB致小鼠特异性皮炎模型[5] 选用23～26 g雄性小鼠，实验前日腹部剪毛、背部脱毛约2×3 cm2。除随机抽取 11只为空白对照组外，其余动物致敏及分组情况同上。各模型组动物于致敏后第 5、8 天在背部脱毛区涂抹0.5% DNFB混合液50 μL诱发皮炎，并于首次激发后4 h开始于背部脱毛区涂药：空白和模型对照组给予纯水0.5 mL/只，化药对照组给予皮炎平背10mg、每耳5mg，中药对照组给予2倍稀释的儿肤康搽剂背0.5mL，每耳50μL，各方剂样品高、低剂量组分别给予5倍及10倍稀释的原液背0.5mL，每耳50μL;每天给药2次，连续7 d。第8天于脱毛部位及双耳进行第8次给药，1 h后用0.5%DNFB溶液30 μL涂抹右耳激发，左耳涂抹等量溶媒为对照，6 h后右耳再涂药1次。激发后24 h，脱颈椎处死小鼠，取双耳称重，以两耳片重量之差作为肿胀度指标;剖取胸腺和脾脏称重，计算脏器系数;并取各组动物的背部皮肤进行组织病理学检查。结果见表2及图1。

2.3 数据统计 采用SPSS17统计软件，计量资料以均数加减标准差（x±s）表示，组间比较采用单因素方差分析法;方差齐采用LSD法检验，方差不齐采用Tamhane′s法检验;P<0.05表示差异有统计学意义，P<0.01表示差异有显著统计学意义。

3 结果

3.1 对DNFB致小鼠迟发型超敏反应的影响 与模型组相比，各给药组连续局部涂药7 d，均可明显抑制DNFB诱导小鼠的耳肿胀（P<0.05，P<0.01），明显降低脾脏系数（P<0.05，P<0.01），但对胸腺系数仅有降低趋势而无统计学意义。详见表1。

3.2 对DNFB致特异性皮炎小鼠的影响 与模型组相比，各给药组连续局部涂药8 d，均可显著抑制DNFB诱导小鼠的耳肿胀（P<0.05，P<0.01），明显降低脾脏系数（P<0.05，P<0.01），不同程度降低胸腺系数。详见表2。

由图1可见，对照组皮膚各层次正常，真皮层结缔组织疏松，各附属器及脂肪组织正常;模型组表皮明显增厚，表皮突明显延长，角化过度和角化不全，结缔组织变致密，皮下组织见炎细胞浸润;各给药组表皮增厚程度及炎细胞浸润有所减轻。

4 讨论

湿疹病因复杂，现代医学对于本病的具体病因并不明确，认为迟发型变态反应与此病的发病机制密切相关[6]。婴儿湿疹是特应性皮炎在婴儿期的表现，西医至今尚无理想根治手段，临床一般以抗组胺、糖皮质激素、非特异性脱敏等治疗为主，但疗效并不理想，且长期使用不良反应较多[7]。基于对西医治疗的安全性考虑，多数家长更倾向于采用中药外用制剂治疗婴幼儿湿疹，而目前临床应用的方剂大多缺乏科学评价依据和规范的临床总结，一定程度上限制了中医药优势的发挥。本文采用DNFB诱导小鼠迟发性超敏反应及特异性皮炎模型，验证了4种外用婴幼儿湿疹方剂的药效学基础，为临床推广应用提供了试验依据。

参考文献

[1]申春平，闫琦，王召阳，等. 低龄婴儿湿疹的流行病学调查与治疗随访[J].临床皮肤科杂志，2015，44（8）：469-472.

[2]刘晓雁，杨明，甄甄. 婴儿湿疹诊断和治疗[J].中国实用儿科杂志，2012，27（8）：588-590.

[3]郭樱，杨玉峰.中药外治湿疹研究进展[J].河北中医药学报，2014，29（3）：54-56.

[4]佟岩，王淑君，周晓棉，等. 杨梅素对小鼠被动皮肤过敏反应的影响[J].沈阳药科大学学报，2009，26（10）：822-825.

[5]丛欢，李磊. 白鲜皮提取物抗湿疹实验研究[J].中国医学创新， 2012（12） ： 18-19.

[6]唐忠芬.白鲜皮提取物抗过敏作用的实验研究以及在湿疹中的运用[D].成都：成都中医药大学，2006.

[7]王李敏.婴儿湿疹预防和治疗现状[J].齐齐哈尔医学院学报，2009，30（12）：1489-1491.

（收稿日期：2021-09-03 编辑：陶希睿）D73C34DF-7F3F-4D48-9614-F757F9A02C05