金合欢素对大肠杆菌感染小鼠肠道的保护作用

李朝一 张慧敏 李振坤 牧书豪 李丽娟

摘要：探索金合欢素对感染大肠杆菌肠道小鼠肠道的保护作用，观察小鼠肠道HE染色情况，用药前后的体重对比、白细胞的变化，对比单一肠道感染大肠杆菌的小鼠，实验表明金合欢素对小鼠肠道黏膜有保护作用。

关键词：肠道;大肠杆菌;金合欢素

中图分类号：S816文献标识码：Bdoi：10.3969/j.issn.2096-3637.2022.02.003

Protective Effect of Acacia on Intestinal Tract of mice Infected with Eschrichia Coli

LI Zhaoyi，ZHANG Huimin，LI Zhenkun，MU Shuhao，LI Lijuan

（Jinzhong Information Institute in Taigu District，Taigu Shanxi 030801，China）

Abstract：To explore the protective effect of acacia on intestinal tract of mice infected with E. Coli，and to observe the changes of intestinal HE staining，body weight and white blood cells before and after administration of Acacia，and to compare the effect of acacia on intestinal tract of mice infected with E. coli alone，the results showed that Leucaena had protective effect on Intestinal Mucosa of mice.

Keywords：Intestinal tract，escherichia coli，acacia

0引言

采用药敏试验观察金合欢素体外抑菌作用;采用单因素随机试验设计将实验小鼠随机分为3组：空白组、金合欢素组和大肠杆菌组，预饲1周，试验期为7 d，测量试验前后体重，肉眼观察，采集肠道制作病理切片分析不同处理肠道黏膜形态结构。药敏试验表明：金合欢素有体外抑制大肠杆菌作用[1];体内试验表明：肉眼观察到空白组肠壁有明显的肌理、更有弹性、更厚的组织层，是正常的白色健康组织;金合欢素组肠壁的环状皱褶趋向光滑，呈半透明状，可见轻度腹水;大肠杆菌组管通透，有大量积水和少量血管，无弹性，易断裂，损伤较重。病理切片镜下观：空白对照组的肠绒毛排列整齐，黏膜，粘膜下层清晰可见，界面齐整[2];金合欢素组个别绒毛破碎，分离，略浮于上面，但整体可见，大部分肠绒毛还是黏着排列在一起，大肠杆菌则肠绒毛全部紊乱，分散，黏膜，粘膜下层开始漂浮，破坏严重⑶。

1材料与方法

1.1材料

取SPF级雌性ICR小鼠20只，体重18～22 g，购自山西医科大学。

1.2方法

1.2.1复苏菌

将高压灭菌后的液体培养基分装入10 mL的试管中，放入37 ℃培养箱中，震荡摇晃12 h，得到原菌液。

1.2.2倍比稀释

将原菌液倍比稀释为2¹，2²，2³，2⁴，2⁵，2⁶，2⁷，2⁸，2⁹，2¹⁰即1024倍，从2¹⁰试管中抽取5 μL涂布于固体培养基中，再次放入37 ℃培养箱中培养1晚，之后用菌落计数器数出菌落数，取平均值，得出23试管中的最大感染菌落数。同时涂布原菌液放入药敏片，确定金合欢素对大肠杆菌是否有抑菌作用。

1.2.3藥物制备

聚乙二醇（PEG）以0.05 g/100mL，用蒸馏水溶解;取金合欢素的最大溶解度60 mg/kg，用PEG溶剂分化;苦味酸标记液按苦味酸：甲醛：冰醋酸=15：5：1配置。

1.2.4正式试验

小鼠按体重随机分配，一组5只，用苦味酸标记液，按一定顺序染色背毛，做好标记。空白对照组连续灌胃PEG7 d，金合欢素组连续灌胃金合欢素6 d，造模成功，腹腔注射大肠杆菌1d。大肠杆菌组连续灌胃PEG6 d，随后1 d腹腔注射大肠杆菌。见表1。

1.3实验动物处置

处死前称取体重，与分组时的体重相比较。眼眶采血，测出白细胞指数，病理解剖，取结肠做石蜡切片。

1.4统计学方法

结果表示均采用SPSS22.0统计软件进行反差分析和检验，用t检验法进行比较，以ρ<0.05认为有统计学意义。

2结果

2.1预实验

观察到正常组活泼好动，背毛柔顺，反应迅速，感染大肠杆菌的小鼠呆立不动，背毛紊乱，眼睛睁不开，肛门粪便粘滞。打开腹腔，正常组肠道无明显异常，而模型组肠壁变薄，变透。见图1。

2.2正式试验

第一张图片为空白对照下的肠道，肠壁组织纹理清晰可见，弹性较大，组织层较厚，为白色健康正常组织;第二张图片组织层相较于第一张变薄，肠壁的环形褶皱趋于平滑，为半透明颜色，见于轻微腹水;第三张为单一腹腔注射大肠杆菌下的肠道，肠道透明，积水严重，见轻微血丝，弹性消失，容易断开，病变严重。见图2。

2.3HE染色显微镜观察

空白对照下的肠绒毛排列整齐，黏膜下层清晰可见;金合欢素治愈的第2张图片，个别绒毛破碎，而第3 张大肠杆菌则肠绒毛全部紊乱，分散，黏膜，粘膜下层开始漂浮，破坏严重。见图3。

2.4白细胞分析

小鼠正常的白细胞值为2.5～15.0，在第1组中，我们发现白细胞值在5～10，说明全部正常;第2组有80%处于正常值，20%超过正常值，说明金合欢素对大肠杆菌有一定抑菌作用;第3组100%超过范围，提示炎症症状严重。见图4。

3讨论

大肠杆菌属于肠道中本身存在的细菌，从粪便中提取容易，数量过多会导致肠道紧张性收缩和容受性舒张消失，内容物变成糊状导致压力过大，肛门括约肌承受不住压力，直接腹泻不止，脱水，Na-K失衡;数量过少则使肠道的分节运动减慢，粪便阻塞肠道，导致便秘。选用小鼠作为大肠杆菌的感染模型原因有3方面。一是哺乳动物更接近人类;二是体型小，容易饲养和控制;三是小鼠更敏感，产生级联放大发应，效果更显著。灌胃金合欢素模拟口服给药，确保剂量，使药物利用最大化，但是灌胃中不可避免对小鼠食道造成损害，可能也会导致食欲不佳，体重下降。当前对耐药性的研究中，中药是个很好的选择，性价比较高，标本兼治，通过药敏实验观察金合欢素是否对大肠杆菌有抑菌性，确保可行性。

4结束语

通过肉眼观察的状态、显微镜下的形态观察、白细胞指数变化等多方面对金合欢素的功能进行评判，金合欢素组的白细胞指标相对于单一大肠杆菌组的指标明显趋于正常，金合欢素对大肠杆菌感染小鼠肠道的保护作用效果显著。

参考文献

[1]李丽娟，乔熠杰.刺槐素对禽源性大肠杆菌的抑菌作用及耐药性消除的研究[J].畜牧兽医科学（电子版），2021（4）：23-25.

[2]杨丰帅.生长抑素联合清胰汤对肠道白色念珠菌感染小鼠的实验性研究[D].衡阳：南华大学，2014.

[3]马纳.金合欢素对视网膜氧化损伤保护作用的机制研究[D].北京：中国中医科学院，2019.