潘婷婷,刘西梅
(商洛学院 生物医药与食品工程学院/陕西秦岭特色生物资源产业技术研究院,陕西商洛 726000)
我国饮酒历史悠久,但过度饮酒对人体健康和社会发展均会造成严重威胁,解酒护肝产品遂成为研究的热点[1-4]。葛根为豆科植物葛根藤或野葛的干燥块根,主要活性成分为葛根总黄酮和葛根素,研究表明葛根提取物能加速酒精代谢、降低肝毒性,葛根素不仅可发挥解酒作用,还能对抗乙醇中毒诱发的各种并发症[5-9]。枳椇为鼠李科枳椇属植物,解酒、保肝作用物质基础为黄酮类和肉质果梗多糖,能够促进乙醇代谢,降低血液中乙醇的含量[10-11]。本研究借鉴传统解酒方剂,以葛根、葛花、枳椇子为发挥解酒效果的主要功效成份,配以栀子、酸枣仁、枸杞、金银花、冰糖制备复方醒酒茶,并对其解酒效果进行评价。
葛根、葛花、枳椇子、金银花、栀子、酸枣仁、冰糖、枸杞均购于陕西中天中药材科技有限公司;无水乙醇购自天津市科密欧化学试剂有限公司。
SPF级昆明系小鼠,雌雄各半,体重18~20 g,自由饮水,饲养环境温度为(23±2)℃,湿度为40%~60%,明暗交替周期为12 h。
1.3.1 复方醒酒茶的组方优化
每组配方用水500 mL,按配方1~15(见表1)加入相应量葛根、葛花、枳椇子、金银花、栀子、酸枣仁、冰糖、枸杞,中火煮3 min。茶水倒入茶杯中放至室温,观察茶饮的色泽、闻茶饮的香气、品尝茶饮的味道。
1.3.2 复方醒酒茶的感官评价
分别从外观(3分)、汤色(2分)、气味(2分)及滋味(3分)四个方面,总分10分,进行感官评价,优化配方。
1.3.3 茶饮储藏试验的方法
袋装最优配方的茶饮用100℃,500 mL饮用水冲泡,盖上杯盖,室温静置存放72 h,观察茶饮外观变化。
储藏试验:将试验新研制好的葛根醒酒茶,用塑料包装袋进行包装,然后在室温、通风的条件下存储6个月,观察外观的变化。
1.3.4 复方醒酒茶解酒效果评价的方法
1)小鼠最佳醉酒剂量的确定
取9只小鼠,随机分为3组,分别以0.24 mL/10 g,0.32 mL/10 g,0.40 mL/10 g的剂量灌胃56%乙醇,观察并记录小鼠灌胃至醉酒的时间和行为反应。各个醉酒阶段判断依据:清醒(活动正常),微醉(兴奋、行动缓慢),醉酒(全身抖动),昏睡(安静、沉睡),死亡,获得最佳醉酒剂量[12-13]。
2)小鼠醉酒潜伏期及睡眠维持时间的测定
按最优配方制备茶饮,做3次重复,分别记为1号,2号,3号。取20只小鼠,雌雄各半,随机分为4组,即对照组、1号试验组、2号试验组、3号试验组。试验前禁食12 h。各试验组茶饮按照0.25 mL/10 g剂量灌胃,对照组给等体积的蒸馏水。30 min后,各组按照0.32 mL/10 g剂量灌胃56%乙醇,记录行为特征。以小鼠翻正反射消失作为睡眠指标,记录小鼠翻正反射消失的时间及恢复的时间,计算出醉酒潜伏期(从给乙醇至翻正反射消失的时间)及睡眠维持时间(从翻正反射消失到恢复的时间)[13-14]。
3)小鼠急性中毒试验
取30只小鼠,雌雄各半,随机分为6组。试验组分别以不同剂量的茶饮进行灌胃,对照组以0.2 mL/10 g剂量灌胃等体积生理盐水。30 min后各试验组将56%乙醇以0.2 mL/10 g剂量进行灌胃,对照组灌胃等体积的蒸馏水,记录24 h内小鼠存活情况。
1.3.5 数据处理
采用SPSS17.0统计软件,按平均数±标准差处理数据,组间进行单因素方差分析。其中:与对照组相比,P>0.05,表示无显著差异;P<0.05为差异具有统计学意义;P<0.01,表示差异极显著。
按表1中配方1~15冲调茶饮,以感官评价为指标,对茶饮的外观、汤色、气味及滋味进行综合评分,结果见表1。由表1可知,按配方9所制备的茶饮外形美观,颜色黄嫩明亮,气味纯正清香,味道醇厚,感官评价分数最高,总分为10分。因此,复方醒酒茶最佳配方组成葛根、葛花、枳椇子、栀子、酸枣仁、枸杞、金银花、冰糖的含量分别为 30,3,20,7,6,5,2,25 g。
表1 葛根醒酒茶配方的优化
茶饮存放24 h,颜色仍然鲜亮,没有浑浊、沉淀及乳凝物,72 h没有异味,不会散袋。
茶饮储藏6个月,袋封完好,内容物不粘连、没有虫蛀、霉变及异味,口感未打折。
2.3.1 小鼠最佳醉酒剂量的确定
由表2可知,随着灌胃剂量的增加,小鼠的醉酒率和死亡率均明显升高;其中0.32 mL/10 g和0.40 mL/10 g,小鼠醉酒率均达到100%,小鼠醉酒昏睡,翻正反射消失,而当灌胃剂量为0.40 mL/10 g时,有1只小鼠死亡,因此,小鼠最佳醉酒剂量确定为0.32 mL/10 g。
表2 小鼠最佳醉酒剂量的确定
2.3.2 复方醒酒茶对小鼠醉酒潜伏期及睡眠维持时间的影响
由表3可知,对照组小鼠醉酒潜伏期为23.2±4.7 min,睡眠维持时间为 176.6±7.7 min。与对照组相比,各试验组均能显著(P<0.01)延长醉酒潜伏期(从给乙醇至翻正反射消失的时间),同时各试验组均能显著(P<0.01)缩短小鼠睡眠维持时间(从翻正反射消失到恢复的时间),由此可知复方醒酒茶饮具有较为明显的防醉醒酒作用。
表3 复方醒酒茶对小鼠醉酒潜伏期及睡眠维持时间的影响
2.3.3 复方醒酒茶对乙醇致小鼠急性毒性的解救
试验过程中,对照组小鼠行为活动正常,饮食量和饮水量正常。给药组小鼠在给药初期行为活动正常,在给65%乙醇灌胃后一段时间内小鼠慢慢地出现兴奋,行动缓慢,身体抖动,直到安静,翻正反射消失,进入昏睡的状态。结果见表4,试验组小鼠的存活率随着灌胃茶饮剂量的增加而逐渐升高,当剂量≥0.35 mL/10 g时,各组小鼠存活率不再升高,0.35 mL/10 g为醒酒茶发挥最佳药效的剂量,小鼠存活率达80%。
表4 复方醒酒茶对乙醇致小鼠急性中毒的解救
果蔬类如李子、香蕉、芒果、苹果等,粮油类如大豆、苦荞等,畜产类如益生菌、牛奶、蛋清等均具有解酒作用,此外姜黄、茴香、普洱茶珍等也能起到一定防醉醒酒的效果[1,15-17]。具有解酒作用的中草药单味药如葛根、茱萸、鸡内金等,复方制剂如葛花解醒汤、解酒饮、益肝草凉茶、养肝解酒方、复方护肝解酒晶等[1,18]。具有解酒作用的功能成分主要有多糖、多肽、总黄酮类、多酚等[19-22]。
葛根、枳椇子能协同降低急性酒精中毒大鼠血中乙醇含量,促进乙醛的生成并降低血中乙醛的浓度,加速乙醇在人体内的代谢,具有明显的解酒作用[23]。以枳椇子、葛根、党参、陈皮、枸杞子、葛花、山楂、甘草、女贞子为原料配方的解酒饮,能降低CCl4诱导的小鼠急性肝损伤,降低肝匀浆升高的MDA水平,同时升高肝匀浆中的SOD和GSH酶活性,提高肝脏抗氧化能力,保护氧化应激对肝细胞损伤的病理修复,从而保护肝功能[24]。葛根、葛花均可以显著降低大鼠血清尿素氮和血清甘油三酯水平,在治疗酒精性肝肾损伤方面可以协同使用[6]。由葛根、丹参、枳椇子、白术、白芍、玉米低聚肽等组成的养肝解酒方能够显著延长小鼠的醉酒潜伏期,显著缩短睡眠维持时间,显著降低模型小鼠血清中ALT和AST的水平,并明显改善肝脏的病理学损伤[13]。本研究借鉴传统解酒方剂,充分发挥葛根、葛花、枳椇子的协同解酒作用,同时配以栀子、酸枣仁、枸杞、金银花、冰糖制备复方醒酒茶。本研究发现,最佳复方醒酒茶配方组成为葛根30 g、葛花3 g、枳椇子20 g、栀子7 g、酸枣仁 6 g、枸杞 5 g、金银花 2 g、冰糖25 g。且按此配方制备得到的茶饮颜色黄嫩明亮,气味纯正清香,味道醇厚。本研究制备的茶饮能显著延长小鼠醉酒潜伏期,缩短小鼠睡眠维持时间,具有较为明显的防醉醒酒作用,同时还能提高乙醇致小鼠急性中毒的存活率。