穿心莲对斑点叉尾鮰非特异性免疫机能的影响研究

麻艳群，覃志彪，陈 晶，曲照球

(广西大学动物科学技术学院，广西 南宁 530005)

随着全国各地集约化养殖范围的不断扩大，斑点叉尾鮰病害发生情况日趋严重。因此，寻找开发天然、环保、安全有效的药物对斑点叉尾鮰的养殖具有重要的意义。穿心莲(Andrographis paniculata)含有多种生物活性成分，具有抗炎、抗菌、抗病毒等作用。目前，已有研究报道了黄芪、黄连、大黄、黄柏、杜仲、五倍子、蓖麻等传统中草药对斑点叉尾鮰生长和免疫性能的影响(王庆奎等，2011；简少卿等，2011；郭永军等，2012；陶莎，2020)，但穿心莲对斑点叉尾鮰免疫方面的研究还未见报道。本试验以斑点叉尾鮰为研究对象，探讨在饲料中添加不同水平的穿心莲粉对其免疫性能方面的影响。

一、材料与方法

1.试验材料

试验鱼购买自横县石塘镇良种场。试验期投喂的各组饲料是在基础饲料配方中分别按0、0.38%、0.75%、1.13%、1.50%、1.88%、2.25%、2.63%、3.00%的量添加穿心莲粉。基础日粮组成见表1。

表1 基础日粮组成

2.试验设计

驯养7天后选择健康、无病害、规格基本一致的斑点叉尾鮰［初始体重为(5.92±0.63)克，初始体长为(7.32±0.33)厘米］270 尾，随机分成9 组(G0、G1、G2、G3、G4、G5、G6、G7、G8 组)，每组设3 个重复，每个重复10 尾，放养于循环水式水族箱里，分别投喂对应编号的复方饲料。其中，G0组为对照组。

3.饲养管理

每天分别于9:30 和17:30 定时投喂，日均投饵率为3%。试验期间水温为24～27℃。每天观察记录各组鱼的活动及采食情况。

4.测定指标及方法

(1)样品采集。养殖试验结束后，试验鱼停饲24 小时。每组随机抽取15 尾鱼，测量体长、体重等形态参数，随后将其解剖，取肝脏和肌肉。

(2)非特异性免疫相关酶的测定。采用试剂盒(购自南京建成生物工程研究所)测定肝脏和肌肉中的溶菌酶(LSZ)含量、肌肉中的超氧化物歧化酶(SOD)活性以及肝脏中乙酰胆碱酯酶(AChE)活性，严格按照试剂盒说明书提供的操作步骤和计算公式进行测定并计算出各指标的含量。

5.数据统计与分析

试验数据采用SPSS 20.0 软件进行单因素方差分析，采用Duncan's法进行多重比较，结果以“平均值±标准差”表示，P＜0.05 表示差异显著。

二、结果与分析

1.穿心莲对斑点叉尾鮰肝脏和肌肉中LSZ含量的影响(表2)

由表2 可知，G8 组肝脏中的LSZ 含量最高，G7、G8 组肝脏中的LSZ 含量显著高于其他各组(P＜0.05)。G8 组肌肉中的LSZ 含量最高，显著高于其他各组(P＜0.05)。

表2 穿心莲对斑点叉尾鮰肝脏和肌肉中LSZ的影响 微克/毫克

2.穿心莲对斑点叉尾鮰肌肉中SOD 活性的影响(表3)

由表3可知，G2组肌肉中的SOD活性最高，显著 高 于G1、G3、G5 和G6 组(P＜0.05)，与G0、G4、G7和G8组差异不显著(P＞0.05)。

表3 穿心莲对斑点叉尾鮰肌肉中SOD活性的影响 单位/毫克

3.穿心莲对斑点叉尾鮰肝脏中AChE 活性的影响(表4)

由表4 可知，G5 组肝脏中的AChE 活性最高，其次为G3组，G3、G5组肝脏中的AChE活性显著高于G0、G1、G7和G8组(P＜0.05)。

表4 穿心莲对斑点叉尾鮰肝脏中AChE活性的影响 单位/毫克

三、讨论

溶菌酶是鱼类免疫应答中的一类酶，它除了能够通过水解细菌细胞壁黏性多肽中的乙酰氨基多糖成分，使细菌因渗透压不平衡导致破裂死亡外(汪多等，2017)，还能诱导和调节其他免疫因子的合成与分泌(向枭等，2011)。机体内溶菌酶的活性可以间接反映机体抗病毒、抗感染和免疫能力的强弱(王飒爽等，2020；谭娟等，2015)。穿心莲主要含有穿心莲内酯、生物碱、黄酮类化合物、甾醇皂苷、糖类等成分(吴海洋等，2020)，其中的二萜内酯类具有较强的抗菌活性，对枯草杆菌、大肠埃希菌、黑曲霉、青霉都有明显的抑菌效果(张晓等，2018)。陈孝煊等(2003)用含1%穿心莲的饵料投喂异育银鲫，结果发现1%穿心莲可显著提高异育银鲫体表黏液和血清中的溶菌酶活性。在本试验中，添加2.63%～3.00%穿心莲的试验组鱼肌肉和肝脏中溶菌酶活性最高，且显著高于其他各组，说明在饲料中添加2.63%～3.00%的穿心莲能有效提高斑点叉尾鮰肌肉和肝脏中的溶菌酶活性。

超氧化物歧化酶是广泛存在于生物体内的一种抗氧化酶，主要起到防止生物分子损伤、清除超氧自由基等作用，其活性可以反映机体抗氧化能力的强弱(陈福艳等，2019)，且与病原菌生物的入侵及生物的免疫水平密切相关(Holmblad T等，1999)。艾春汉等(2009)在罗非鱼饲料中添加穿心莲浸膏粉，发现试验血清中的SOD活力显著提高。但也有不同的报道，葛婧等(2016)用不同浓度的穿心莲浸膏粉饲喂半滑舌鳎7、14、21 天后，发现5、10 克/千克浓度的穿心莲可以有效提升半滑舌鳎的血清SOD活性；7、15克/千克浓度的穿心莲会使SOD活性低于对照组；相同浓度的穿心莲投喂半滑舌鳎21 天，鱼血清SOD 活性低于饲喂14 天的，说明穿心莲对半滑舌鳎血清SOD活性的影响受到穿心莲浓度、饲喂天数的共同作用。在本试验里，添加穿心莲对鱼肌肉中的SOD活性未表现出明显规律，添加0.75%穿心莲的试验组鱼肌肉中的SOD 活性最高，但与对照组差异不显著；添加0.38%、1.13%、1.88%、2.25%穿心莲的试验组其肌肉中的SOD活性低于对照组，推测造成这样结果的原因与中草药的种类及投喂时间长短有关。

乙酰胆碱酯酶是水解乙酰胆碱的特异性胆碱酯酶，能快速水解胆碱并促使神经末梢释放乙酰胆碱，可作为中枢和外周神经递质调控免疫功能，间接反映鱼体免疫应答能力的强弱(李宗宝，2018)。史晓委(2012)发现AChE能通过本身活性的改变来调节栉孔扇贝机体的免疫应答水平，对扇贝的免疫调节起重要作用。在本试验里，添加0.75%～2.25%穿心莲的试验组鱼肝脏中的AChE 活性显著高于对照组，说明适宜添加水平的穿心莲在提高斑点叉尾鮰免疫应答方面有积极作用。