BC-6000PLUS血液分析仪体液模式检出限分析

龙一飞， 孟少伟， 刘健平， 张宏远， 林冬玲

（广州中医药大学第二附属医院 广东省中医院检验科，广东 广州 510006）

脑脊液、浆膜腔积液、关节腔积液等是临床较常见的体液标本，这些标本的常规检测，尤其是白细胞计数和红细胞计数，有非常重要的临床价值。目前，很多全自动血液分析仪已实现搭载体液标本的细胞计数和分类检测模式，不但提高了检测速度和准确度、精密度，而且易于标准化，临床应用越来越广泛。

深圳迈瑞公司BC-6000PLUS全自动血液分析仪（简称BC-6000PLUS）带有体液检测模式，但厂商未提供体液细胞计数的检测下限，无法确保低值体液标本（尤其是脑脊液）检测结果的稳定性与准确性。我国卫生行业标准WS/T 662—2020《临床体液检验技术》[1]（简称WS/T 662—2020）附录A中明确要求每个实验室都应建立所用体液模式检测系统的有核细胞计数和红细胞计数的检测下限。据此，本研究以我国卫生行业标准WS/T 514—2017《临床检验方法检出能力的确立与验证》[2]（简称WS/T 514—2017）文件内容为指导，建立并评价BC-6000PLUS体液模式WBC-BF和RBC-BF细胞计数的空白限（limit of blank，LoB）和检出限（limit of detection，LoD）[3]，以更好地指导临床检测工作。

1 材料和方法

1.1 标本制备

1.1.1 空白样本 以BC-6000PLUS配套稀释液（DC稀释液）为空白样本。

1.1.2 系列低浓度样本 根据WBC-BF与RBCBF的LoB值，各配制6个WBC-BF与RBC-BF低浓度水平样本（根据WS/T 514—2017要求，系列低浓度样本配制浓度最好为LoB～4倍LoB）。本研究系列低浓度样本配制采用临床新鲜脑脊液标本，其WBC-BF与RBC-BF检测浓度分别约0.01×109/L和0.01×1012/L，用0.9%氯化钠溶液进行梯度稀释，配制成10%、20%、40%、60%、80%、100%浓度比例稀释样本，稀释后WBCBF系列理论浓度分别为0.001×109/L、0.002×109/L、0.004×109/L、0.006×109/L、0.008×109/L、0.010×109/L；RBC-BF系列理论浓度分别为0.001×1012/L、0.002×1012/L、0.004×1012/L、0.006×1012/L、0.008×1012/L、0.010×1012/L。

1.2 方法

参考WS/T 514—2017要求，通过统计学方法建立WBC-BF与RBC-BF LoB值和LoD值。所有实验操作程序均严格按照仪器说明书和科室标准操作规程文件要求进行。

1.2.1 LoB值 采用BC-6000PLUS配套DC稀释液作为空白样本，每天在BC-6000PLUS体液模式下重复检测10次，连续6 d，得到60个统计数据。

1.2.2 LoD值 根据LoB值浓度范围，人工配制一系列低浓度水平体液样本。鉴于体液样本稳定性较差，不易保存，配制的6个WBC-BF与RBC-BF低浓度水平样本在1 d内的不同时间段重复检测10次，WBC-BF与RBC-BF项目各得到60个统计数据。

1.3 统计学方法

采用SPSS 20.0软件进行统计分析。若数据呈方差齐性，则采用参数统计方法计算；若实验数据呈非方差齐性，则采用非参数统计方法计算。

2 结果

2.1 LoB值

BC-6000PLUS体液模式WBC-BF和RBCBF所有空白检测值均为0。检测结果符合正态分布，按公式LoB=μB+1.645σB计算LoB值，式中μB和σB为空白检测结果均值和标准差。BC-6000PLUS体液模式WBC-BF LoB值为0×109/L，RBC-BF LoB值为0×1012/L。

2.2 LoD值

数据呈非正态分布，采用非参数分析方法建立WBC-BF和RBC-BF LoD值，按公式LoD=LoB+Dsβ计算LoD值，式中Dsβ为检测结果中位数（M）与第5百分位数间距，结果见表1、表2。

表1 系列低浓度WBC-BF样本检测结果 ×109/L

表2 系列低浓度RBC-BF样本检测结果 ×1012/L

2.2.1 WBC-BF LoD值 在60个低浓度水平样本数据分布中，中位数（M）=60×0.5+0.5=第30.5秩号数值=0.005×109/L，第5百分位数=60×0.05+0.5=第3.5秩号数值=0.001×109/L，Dsβ=0.005×109/L-0.001×109/L=0.004×109/L。WBC-BF LoD=LoB+Dsβ=0×109/L+0.004×109/L=0.004×109/L。

2.2.2 RBC-BF LoD值 在60个低浓度水平样本数据分布中，中位数（M）=60×0.5+0.5=第30.5秩号数值=0.006×1012/L，第5百分位数=60×0.05+0.5=第3.5秩号数值=0.002×1012/L，Dsβ=0.006×1012/L-0.002×1012/L=0.004×1012/L。RBC-BF LoD=LoB+Dsβ=0×1012/L+0.004×1012/L=0.004×1012/L。

3 讨论

目前，传统人工镜检方法已不能满足临床需要，脑脊液、浆膜腔积液、关节腔积液等体液标本自动化检测将日益普及[4-5]。《CNAS-CL02医学实验室质量和能力认可准则》[7]，即ISO15189：2012要求医学实验室需对所选检验程序进行性能验证或确认，证实其达到制造商判定标准，才可用于患者标本检测。因此，全自动血液分析仪体液检测模式性能验证非常重要，包括细胞计数的检出下限。

2020年10月1日，由国家卫生健康委员会颁布的卫生行业标准WS/T 662—2020已正式实施。该标准附录A明确规定每个实验室应建立所用检测系统有核细胞计数和红细胞计数的检测下限，且检测下限不能低于仪器最低检出限（LoD）。因为当低值体液标本细胞数量低于检测下限值时，仪器检测结果的准确性无法得到保证，此时仍需人工镜检计数复核确认，尤其是脑脊液标本。所以体液细胞计数的检出下限是最为关键的性能验证参数之一，仪器制造商如提供仪器的有核细胞计数和红细胞计数的检测下限，此时实验室仅需按计划实施检测下限值的验证，验证通过则可直接采用仪器制造商声明的检测下限值，但制造商并未提供BC-6000PLUS体液模式计数LoB值和LoD值性能说明，因此，本实验室需依据相关指南或标准文件要求[1-2，6-7]自建。

根据定义，LoB是空白样品能被观察到的最大测量值；LoD是样品中检出最低分析物浓度[8]。本研究结果表明，BC-6000PLUS WBC-BF、RBCBF的LoB值分别为0×109/L、0×1012/L，LoD值分别为0.004×109/L、0.004×1012/L。当标本白细胞计数为0.004×109/L或红细胞计数为0.004×1012/L时，95%概率能与空白样本进行区分。根据WS/T 662—2020关于“检测下限不能低于仪器的最低检出限”的要求，本实验室设定BC-6000 PLUS的WBC-BF检测下限值为0.004×109/L；RBC-BF检测下限值为0.004×1012/L。当WBC-BF与RBC-BF检测结果低于检测下限时，表明仪器无法保证检测结果准确，需用人工镜检计数“金标准”方法来复检。

综上所述，本研究依据WS/T 514—2017标准要求，建立并评价了BC-6000PLUS体液模式的LoB和LoD。因WBC-BF与RBC-BF细胞计数检出下限值较低，能满足脑脊液等临床体液标本自动化检测的需求。