壮医药线点灸疗法对原发性痛经大鼠的影响

梁淇棋 林 娜 樊俊宏 稂宇嘉 黄礼芳 刘志珊 韦丽乐 林艳明

右江民族医学院，广西 百色 533000

原发性痛经是妇科常见病症，临床上主要表现为经前后或行经期发生下腹坠胀、胀痛、伴有腰酸或其他不适，严重影响患者健康及生活质量[1]。原发性痛经的发病机制尚未完全阐明，现代医学[2-4]认为其发生与内分泌、遗传、代谢及免疫等因素有关。西医治疗主要以对症处理为主。壮医药线点灸作为广西特色民族疗法，在治疗痛经上有显著疗效，但其治疗机制尚缺乏现代科学的证据[2]。本实验运用壮医药线点灸疗法治疗原发性痛经大鼠模型，通过观察大鼠扭体次数及大鼠血清中PGF2α、NO、Ca2+离子水平的变化，探究壮医药线点灸疗法治疗原发性痛经的可能机制。

1 资料与方法

1.1 实验动物 采用昆明种大鼠50只雌性，鼠龄9～10周，体重(200±20)g，性成熟，未交配，由右江民族医学院动物实验中心提供。大鼠正常饲养1周后，随机分为壮医药线点灸治疗组、阿司匹林组、当归芍药散组、空白对照组、模型对照组，每组各10只。

1.2 材料 壮医药线(直径0.7 cm，广西中药医大学壮医药推广中心)；补佳乐(拜尔医药保健有限公司广州分公司)；阿司匹林肠溶片(拜尔医药保健有限公司)；缩宫素注射液(上海全宇生物科技动物药业有限公司)；蒸馏水、生理盐水；前列腺素 ELISA 试剂盒( 上海酶联生物)；NO 测试盒、蛋白测试盒、钙测试盒(南京建成生物工程研究所)；当归芍药散(右江民族医学院药剂科提供)。

1.3 动物造模及各组干预方法

1.3.1 样品制备 称取当归芍药散处方：当归20 g,川芎10 g,白术12 g,茯芩10 g,泽泻10 g,芍药20 g，加10倍量水，浸泡20 min，煎煮1 h，取煎出液，再加8倍量水煎煮40 min，合并2次煎煮液,浓缩制成浓度为1 g/mL水煎液；1 mg补佳乐片研碎溶于20 mL纤稀钠中制成0.05 mg/mL混悬液；100 mg阿司匹林肠溶片研碎溶于5 mL纤稀钠中制成20 mg/mL混悬液。

1.3.2 动物造模 除空白对照组外，所有大鼠适应性喂养1周后,采用补佳乐和缩宫素注射液联合制造大鼠原发性痛经模型。具体方法如下：壮医药线点灸组、阿司匹林组、当归芍药组和模型对照组,于中午12：00灌胃补佳乐混悬液10 mL/kg，正常对照组给予10 mL/kg生理盐水灌胃，连续给药12 d。于末次给药后1 h腹腔注射缩宫素100 U/kg，正常组注射生理盐水10 mL/kg。

1.3.3 干预方法 从造模第5天起，每天下午17：00进行1次干预，连续 7 d。壮医药线点灸组参照方宗畴等编著的《实验大鼠针灸俞穴图谱及针刺手法》取穴人中、归来、足三里、中极、肚脐(周围)、关元，一人将实验操作部位充分暴露，另一人点燃药线线端后熄灭明火，将带火星的线端对准穴位，标准为一按一灭即起为一壮，每穴予灸2壮。阿司匹林组剂量按50 kg成人体表面积折算，每只大鼠予阿司匹林肠溶片混悬液200 mg/kg即10 mL/kg灌胃，当归芍药散组同按50 kg成人体表面积折算，每只大鼠予当归芍药散水煎液10 g/kg即10 mL/kg灌胃，空白对照组和模型对照组不进行干预，只予生理盐水10 ml/kg灌胃做等容积液体进入胃内容对照。上述操作均在大鼠安静状态下，温暖的环境中进行。

1.4 观察指标

1.4.1 扭体反应 第12天灌胃给药1 h后，腹腔注射缩宫素100 U/kg(正常组注射生理盐水 10 mL/kg)，观察记录大鼠30 min内扭体次数，计算扭体抑制率。扭体反应标准：大鼠腹部收缩内凹，躯干与后肢伸展，臀部与一侧肢体内旋。抑制率=(模型组大鼠扭体次数-给药组大鼠扭体次数)/模型组大鼠扭体次数×100%。

1.4.2 子宫匀浆组织PGF2α、NO、Ca2+测定 于末次给药后1h，大鼠颈椎断头处死，迅速剖腹，取出子宫，以冰冻的生理盐水洗净拭干称重，制成5%的子宫组织匀浆，以2500 r/min低温离心10 min，取上清液冷藏保存待测。子宫组织前列腺素 F2α (PGF2α)的含量采用ELISA法检测；NO、Ca2+含量测定采用微板法。均按试剂盒说明书的实验步骤严格操作。

2 结果

2.1 各组大鼠30 min内扭体反应比较 空白对照组未出现扭体反应，模型对照组大鼠扭体次数明显增多，差异有统计学意义 (P<0.01)，提示造模成功；各治疗组与模型对照组比较，30 min内扭体次数减少，扭体抑制率上升(P<0.01)；壮医药线点灸组、当归芍物组、阿司匹林组扭体反应次数均无统计学差异 (P>0.05)；且阿司匹林组和壮医药线点灸组扭体抑制率均>80%，说明阿司匹林组和壮医药线点灸组镇痛效果佳。详见表 1。

表1 各组大鼠扭体反应比较

2.2 各组大鼠子宫匀浆组织PGF2α、NO、Ca2+值比较 与空白对照组比较，模型组大鼠子宫内膜 PGF2α含量明显升高，同时模型组NO值升高，Ca2+值降低，差异有统计学意义(P<0.01)；壮医药线点灸组、当归芍物组、阿司匹林组与模型组比较，PGF2α值、Ca2+值降低，NO值升高，差异有统计学意义(P<0.01)；各治疗组间NO值、Ca2+值均无统计学差异 (P>0.05)，提示壮医药线点灸组、当归芍物组、阿司匹林组对原发性痛经有效，且壮医药线点灸组与当归芍物组、阿司匹林组之间相比疗效相当。见表2。

表2 各组大鼠子宫匀浆组织PGF2α、NO、Ca2+值比较

3 讨论

原发性痛经属壮医“火路病”范畴，是较为普遍的妇科疾患。近年来，原发性痛经的发病率逐渐升高，寻找最有效的治疗方法极其重要，而中医药在治疗原发性痛经取得效好的效果，是值得深入挖掘研究的有效资源[5-7]。壮医药线点灸疗法是壮医最具特色的一种治疗方法，具有通络止痛、活血化瘀、散结消肿、温经行痹等作用[8-9]。本实验采用补佳乐和缩宫素注射液联合制造大鼠原发性痛经模型，根据中医经络选穴原则，选取人中、归来、足三里、中极、脐周四穴、关元等穴位，用壮医药线灼灸刺激穴位，调节气血，达到活血化瘀，温经散寒，气血调和的作用。研究表明，痛经的发生主要是由于前列腺素(PGs)分泌过多导致子宫异常收缩引起的[10]，同时与NO、Ca2+的变化密切相关，其中PGF2α属于前列腺素中的一种，可刺激子宫收缩和缺血，导致痛经[11]。Ca2+作为在细胞收缩中起重要作用的第二信使，刺激后可通过细胞内钙离子的释放和胞外的内流，子宫平滑肌细胞内Ca2+超载引起能量耗竭、细胞膜受损，此外还可以导致子宫肌挛缩[12-13]。NO是一种血管内皮舒张因子，可通过NO-环磷鸟苷(cGMP)途径调节，或直接作用于细胞膜上的钙通道，引起钙离子外流或加速细胞内游离钙的结合，从而引起平滑肌细胞舒张和血管扩张。本实验结果显示，壮医药线点灸疗法能够降低PGF2α、Ca2+值，并使NO水平升高，抑制扭体反应。其作用机制可能是通过调节PGF2α、Ca2+、NO水平，缓解子宫平滑肌痉挛引起的缺血再灌注损伤，抑制子宫痉挛从而达到解除或缓解疼痛的目的。同时壮医药线点灸组、当归芍物组、阿司匹林组之间子宫匀浆PGF2α、NO、Ca2+对比无明显差异，提示壮医药线点灸疗法与临床常用药物疗效相当。因此，壮医药线点灸疗法治疗原发性痛经具有明显的疗效，值得在临床上进一步推广。