异叶茴芹提取物对Ⅱ型糖尿病小鼠血糖及相关因子的影响

杨光旭，胡媛媛，刘玉琴，刘永飞，王志新

（衡阳师范学院生命科学与环境学院，湖南 衡阳 421008）

异叶茴芹（Pimpinella diversifoliaDC.）是伞形科茴芹属多年生草本植物，全草可入药，有活血散瘀、消肿止痛、祛风解毒之效，传统上常用于治疗偏头痛、蛇虫咬伤等疾病。其含有糖类、皂苷、酚类、香豆素以及油性挥发物质，具有抗菌、平喘及一定的抗炎、凝血、止血作用。目前有关异叶茴芹药用功效的开发利用研究较为少见［1］，本研究以模型小鼠为对象，针对异叶茴芹提取物对Ⅱ型糖尿病的影响和作用展开了研究。

1 材料与方法

1.1 材料

TD5A-WS 离心机、RE-6000 旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；FB224 电子天平，上海舜宇恒平科学仪器有限公司；三诺血糖仪，三诺生物传感股份有限公司；芦丁对照品，Sigma 公司；四氧嘧啶，Sigma公司；盐酸二甲双胍，Sigma 公司；全自动生化仪、尿素氮（BUN）、总胆固醇（CHOL）、血糖（GLU）甘油三酯（TRIG）检测试剂盒，爱德仕；超声清洗机，精密清洗机械有限公司。

异叶茴芹采自浙江省温州市永嘉县枫林镇高塘村；SPF 级昆明种雌性小鼠，长沙市天勤生物技术有限公司，许可证号SCXK 2014－0011，体重20～25 g。

1.2 方法

1.2.1 异叶茴芹总黄酮提取方法及含量测定 参考文献［2-7］方法提取异叶茴芹总黄酮，异叶茴芹粉碎后过300 目筛，料液比1∶30，60%乙醇浸泡5 h 后，超声处理40 min 取上清液，4 000 r/min 离心10 min取上清液，滤渣再用60%乙醇溶解超声处理40 min后再4 000 r/min 离心10 min，合并上清液，通过减压旋转蒸发仪除去乙醇，制得异叶茴芹总黄酮浓缩液。

参考文献［2，3］，称取芦丁标准品做标准曲线，用硝酸铝显色法测得该方法提取率达16.98%。

1.2.2 型糖尿病小鼠模型的建立 参考文献［8］方法，KM 种小鼠适应性饲养1 周后，其中10 只（雌雄各5 只）继续饲养，为对照 组（NC 组）；其余小鼠为建模组（MC 组）。建模组喂食高脂饲料，1 周后，禁食不禁水12 h，腹腔注射四氧嘧啶（ALX）150 mg/kg，饲喂7 d 后剪尾测血糖，再次腹腔注射150 mg/kg ALX，饲喂7 d 后，禁食12 h，剪尾取血测定血糖值，若测定结果大于11.1 mmol/L，则建模成功，若建模成功，给予普通饲料。

1.2.3 动物试验设计 参考文献［9］方法，以建立Ⅱ型糖尿病小鼠模型方法为基础，将清洁级KM 种小鼠在适宜条件下适应性饲喂7 d 后，随机取小鼠10只分为空白对照组，将建模成功的小鼠随机分为阳性对照组、异叶茴芹总黄酮低剂量、中剂量、高剂量组。高、中、低组分别灌胃异叶茴芹总黄酮160、80、40 mg/（kg·d），阳性对照组灌胃盐酸二甲双胍40 mg/（kg·d），空白对照组每日灌胃等量生理盐水，持续3 周。

1.2.4 检测方法

1）体重、空腹血糖。灌胃前、灌胃第10 天、灌胃结束后1 d，分别记录各组小鼠体重和空腹血糖值［10-13］。

2）脏器指数。灌胃结束1 d 后，脱颈处死小鼠，摘取肝脏、肾脏和脾脏，过生理盐水洗净，用滤纸吸干水分，称重后用容器保存置于-80 ℃冰箱备用。脏器指数=脏器质量/体质量×100%［14］。

3）血清指标检测。试验结束1 d 后，各组小鼠摘眼球取血，分离出血清，测定血清中BUN、CHOL、GLU、TRIG 水平［15-18］。

1.2.5 统计学处理 采用SPSS 23.0 对数据进行分析，试验数据以平均值±标准差（x±s）表示，2 组间的差异采用t检验，多组间比较用单因素分析。以组间配对样本t检验分析比较显著性差异。

2 结果与分析

2.1 高血糖小鼠模型的建立

由表1、表2 可见，与空白对照组相比，模型组动态血糖水平显著升高，有统计学意义（P＜0.05），说明模型建立成功。

表1 建立Ⅱ型糖尿病模型小鼠体重状况

表2 建立Ⅱ型糖尿病模型小鼠血糖情况

2.2 异叶茴芹总黄酮对糖尿病小鼠模型的降血糖作用

由表3 可见，与灌胃前相比，阳性对照组动态血糖水平自第2 周起显著降低，有统计学意义（P＜0.05）；异叶茴芹总黄酮各剂量组血糖水平在第3 周灌胃结束后显著降低，有统计学意义（P＜0.05）。

2.3 对血清中BUN、CHOL、GLU、TRIG 的影响

由表4、图1 可知，与空白对照组相比，阳性组的BUN、CHOL、GLU、TRIG 指标显著上升；与阳性组相比，异叶茴芹总黄酮各剂量组与阳性组在BUN、CHOL、GLU、TRIG 4 个血清指标差异不大。

图1 各血清指标变化

表4 相关性分析

2.4 对小鼠脏器指数的影响

由图2、表5 可知，与空白对照组相比，阳性组的脾脏指数、肾脏指数、肝脏指数差别不大；与阳性组相比，异叶茴芹总黄酮各剂量组在脾脏指数、肾脏指数、肝脏指数3 个方面差异不大。

表5 脏器指数相关性分析

图2 脏器指数变化

3 讨论

四氧嘧啶是一种胰岛β细胞毒性剂，可选择性地损伤多种动物的胰岛细胞，β细胞受损导致血清胰岛素水平降低，空腹血糖升高，可引起Ⅱ型糖尿病［13］。Ⅱ型糖尿病是一种高血脂、高血糖的损伤肝脏、肾脏、脾脏、眼等重要器官的疾病。随着生活水平的提高，加之人们不均衡、不规律、不健康的饮食生活习惯，导致了糖尿病人群不断升高［18］，本研究采用注射四氧嘧啶建模成功的KM 种小鼠为模型，探究异叶茴芹对糖尿病的影响及部分相关器官的保护情况。

空腹血糖（GLU）是指在空腹（至少8～10 h 未进任何食物，饮水除外）后，采血所检测的血糖值，为糖尿病最常用的检测指标，反映胰岛β 细胞功能，一般表示基础胰岛素的分泌功能。通过比较各组灌胃前、灌胃第10 天、灌胃结束后3 次采血的结果，发现异叶茴芹总黄酮具有显著的降血糖作用，在一定范围内，随着总黄酮浓度的升高而降得越多。异叶茴芹降血糖可能的机制有调节糖代谢相关酶的活性、保护胰岛β 细胞再生、促进脂肪组织对葡萄糖的摄取、降低糖吸收和糖异生，具体机制尚未清楚，有待进一步研究。

脾脏、肾脏、肝脏水平与血糖变化密切相关，从某种意义上来说，脾脏、肾脏和肝脏的脏器指数变化反映了糖尿病的变化，研究发现灌胃异叶茴芹总黄酮可使糖尿病小鼠的脏器指数与灌胃盐酸二甲双胍的糖尿病小鼠及空白对照小鼠的脏器指数持平，这说明异叶茴芹总黄酮可对糖尿病小鼠的脏器起到一定的保护作用，其机理尚未明确。

尿素氮（BUN）、总胆固醇（CHOL）、甘油三酯（TRIG）是重要地反映糖尿病小鼠血糖血脂指标，异叶茴芹总黄酮一定程度上也维持了三者的平衡，对糖尿病小鼠的恢复起到了促进作用。在雌雄糖尿病小鼠中，异叶茴芹总黄酮的作用效果是不同的，雄性小鼠的降血糖效果明显好于雌性小鼠，其作用方式是否与性器官或者性激素有关，尚待研究。

糖尿病可引起小鼠的肾脏病变，异叶茴芹总黄酮在降糖、降脂过程中，通过增加肝肾组织的抗氧化活性，减少氧化应激损伤，消除炎症和组织坏死来修复KM 小鼠受损肝脏和肾脏的组织结构，恢复其生生理功能。

异叶茴芹总黄酮可以改善ALX 诱导的KM 种小鼠的体重、血糖、血清指数。其中，血糖降低程度为阳性组＞高浓度组＞中浓度组＞低浓度组；在血清指数中，高中低3 组与阳性组的差异不大，说明异叶茴芹在此方面作用与阳性药物一致。