珍珠龙胆石斑鱼中MS-222 残留量的气相色谱-质谱检测方法的建立

黄伊彤，黄 和，尤 扬，陈彩燕，李钰娟，黄锦娴

（广东海洋大学 食品科技学院，广东湛江 524088）

lanceolatus）作为一种高蛋白、低脂肪、富含不饱和脂肪酸的优质水产品，成为消费者欢迎的水产品之一[1]。在石斑鱼保活运输过程中，适量麻醉剂可以起到抑制石斑鱼神经系统敏感性的作用[2]，等待运输结束后将石斑鱼放在清水中，石斑鱼体内麻醉剂排出体外后便可复苏[3]。

在我国，研究MS-222 麻醉剂对石斑鱼麻醉机理的报道较多，但我国仍未制定MS-222 麻醉剂标准检测方法。因此，本实验在已有的研究基础上，以石斑鱼为实验材料，进一步优化QuEChERS 前处理方法和气相色谱、质谱条件，建立一种可靠、快速、易操作的MS-222 麻醉剂检测方法。希望该方法能为我国监督管理部门检测石斑鱼中MS-222 残留量提供技术支持，以保障石斑鱼质量安全和消费者的食用安全。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

3-乙氧酰基苯胺甲磺酸盐标准品（上海麦克林生化科技有限公司）；甲醇、乙腈和乙酸乙酯均为色谱纯（Honeywell，美国）；乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）、石墨化炭黑（GCB）和十八烷基键合硅胶（HC-C18）（上海安谱实验科技股份有限公司）；氯化钠（天津市科密欧化学试剂有限公司）；无水硫酸镁（广东光华科技股份有限公司）。

超纯水机（Merck，德国）；漩涡混匀机（EYELA，日本）；气相色谱-质谱联用仪（GCMS，QP 2010 Ultra，SHIMADZU，日本）；高速冷冻台式离心机（Thermo Fisher，美国）；全自动平行浓缩仪和全自动氮气发生器（睿科仪器有限公司，中国）。

1.2 样品前处理

称 取2.00 g 样品，加入2 mL 蒸馏水，手动摇匀，加入一颗均质子，涡旋1 min，加入10 mL 乙腈提取溶液，涡旋3 min，超声萃取 10 min，加入1.50 g 的NaCl，手动摇匀，加入2.00 g无水硫酸镁，手动摇匀，4 000 r·min-1离心10 min，将离心后的上清液转移到15 mL 离心管中，加入20 mg GCB+100 mg C18+100 mg PSA+300 mg 无水硫酸镁，手动摇匀，4 000 r·min-1离心7 min，取上清液于15 mL试管，45 ℃氮吹浓缩至样液近干，加入2 mL 纯乙酸乙酯复溶，然后用0.22 μm 有机滤膜过滤，上机测定。

1.3 实验条件

（1）色谱条件。色谱 柱DB-5MS（30 m× 0.25 mm×0.25 μm）；升温程序：起始温度为100 ℃，保持0.5 min，以10 ℃·min-1升温至200 ℃，最后以25℃·min-1升温至270 ℃，维持4 min。进样口温度：280 ℃，不分流进样；进样体积：1 μL；流速： 1.0 mL·min-1；载气：高纯氦气（纯度≥99.999%）。

（2）质谱条件。离子源为EI 源；离子源温度：270 ℃，传输线温度：260 ℃；溶剂延迟时间： 3 min；选择离子监测（SIM）模式分析。MS-222 的定量离子分别为92m/z、120m/z、137m/z、165m/z，各离子丰度比（%）为81 ∶100 ∶37 ∶72，以120m/z作为定量离子。

2 结果与分析

2.1 提取溶剂的选择

为了提取样品中的结合态残留物，同时除去多余的杂质，选择乙腈、甲醇、甲醇∶乙腈（V∶V=1 ∶1）、甲醇∶乙腈（V∶V=1 ∶2）、乙酸乙酯作为提取溶剂进行研究。向2 g 样品添加0.10 mg·kg-1的MS-222，混匀。结果显示，乙腈作为提取溶剂时，上清液和水相分层较明显，样液澄清，提取出来的杂质少，样液浓缩时间短，提取率高。甲醇作为提取溶剂时，有机层和水层分层不明显，导致后续除杂难度增大，样液浓缩耗时长，提取率低；甲醇∶乙腈（V∶V=1 ∶1）、甲醇∶乙腈（V∶V=1 ∶2）两种混合溶剂作为提取溶剂时，提取液中杂质多，提取率低；乙酸乙酯作为提取溶剂时，提取液颜色偏黄，样品容易结成一团，导致大部分目标物质被包埋，提取率低。因此，选择乙腈作为提取溶剂。此外，在提取过程中，为提高目标物质提取率，本实验加入了氯化钠，增强乙腈的浸润作用，使样品基质之间产生剧烈摩擦，然后加入无水硫酸镁可除去部分水以减轻后续净化过程的压力[4-5]。

2.2 净化剂的选择

鉴于样品基质构成复杂，为获得最佳的净化效果，选择了3 种分散固相萃取净化剂组合进行提取液净化效果研究，分别是①200 mg无水硫酸镁+50 mg PSA+50 mg C18+10 mg GCB、②200 mg 无水硫酸镁+50 mg PSA+50 mg C18+20 mg GCB 和③300 mg 无水硫酸镁+100 mg PSA+100 mg C18+20 mg GCB。向 2 g 样品添加0.10 mg·kg-1浓度的MS-222，混匀，测定。结果显示，①组的回收率最低，只有46.28%，②组的回收率最高，有82.12%，③组和②组的回收率接近，有80.85%。虽然②组的回收率最高，但是由图1 可知，②组所得色谱图中MS-222 目标峰前的杂峰比③组多，干扰较大。因此，在回收率相近的情况下，选择③组作为净化条件，净化效果 更好。

图1 3 种分散固相萃取净化剂组合净化效果色谱图

2.3 复溶液的选择

选择了乙酸乙酯、 乙酸乙酯∶甲醇（V∶V=1 ∶1）、乙酸乙酯∶甲醇（V∶V=16 ∶9）作为复溶液进行研究。向2 g 样品添加0.10 mg·kg-1的MS-222，混匀，测定。结果表明（图2），乙酸乙酯作为复溶液时MS-222 回收率高，为89.29%，而且色谱图中目标峰前的杂峰少；其次是乙酸乙酯∶甲醇（V∶V=1 ∶1），MS-222 回收率为70.99%；乙酸乙酯∶甲醇（V∶V=16 ∶9）的回收率最低，为64.57%。甲醇极性大，容易溶解其他杂质，因此含甲醇的复溶液所得的色谱图杂峰多。

图2 3 种复溶液复溶MS-222 所得色谱图

2.4 方法线性关系及定量限

本实验设计6 个MS-222 标准溶液浓度，分别为0.010 μg·mL-1、0.020 μg·mL-1、0.050 μg·mL-1、 0.100 μg·mL-1、0.200 μg·mL-1和0.500 μg·mL-1， 使用纯乙酸乙酯作为溶剂来配制MS-222 标准溶液。按照上述仪器条件进行GC-MS 检测，根据所得的检测结果用Excel 绘制出MS-222 的标准曲线，见图3。检测结果表明，MS-222 在0.010 ～0.50 μg·mL-1具有良好的线性关系，所得到的标准曲线方程为y= 102 362.3x-276.3，相关系数为0.999 9，方法定量限为0.010 mg·kg-1。

图3 MS-222 标准曲线

2.5 样品加标回收率试验

以石斑鱼肌肉、肝脏作为样品，选取0.050 mg·kg-1、0.100 mg·kg-1、0.500 mg·kg-1作为MS-222 标准溶液水平添加浓度，每个水平添加浓度平行测定6 次，按照1.2 前处理方法和1.3 仪器条件进行GC-MS 检测。结果表明（表1），以肌肉为样品，添加浓度为0.050 ～ 0.500 mg·kg-1， 平均回收率 为82.10% ～91.47%，RSD 为2.81% ～4.63%；以肝脏为样品，添 加浓 度 为0.050 ～0.500 mg·kg-1，平均回收率 为81.24%～92.13%，RSD 为0.78%～5.70%。由此可得，本研究建立的方法检测石斑鱼中MS-222 麻醉剂残留量的准确度和精密度良好。

表1 样品加标回收率与精密度表

3 结论

本文以石斑鱼为实验材料， 通过优化QuEChERS 前处理方法和气相色谱，建立了石斑鱼中MS-222 残留量的气相色谱-质谱检测方法。石斑鱼样品经乙腈超声提取，用QuEChERS 方法对提取液进行净化，氮吹浓缩，使用乙酸乙酯复溶目标物，用0.22 μm 有机滤膜过滤，GC-MS 测定。在添加浓度为0.050 ～0.500 mg·kg-1时，平均回收率为81.24%～92.13%，相对标准偏差为0.78%～5.70%。本方法简单、高效、准确度高，适用于石斑鱼中MS-222 麻醉剂残留量检测。