血清OX40L、Occludin与急性缺血性脑卒中患者病情程度及预后的相关性*

贾建普，张乐国，王丽轩，姬春雪，夏瑞雪，张俊玲

沧州市中心医院神经内科，河北沧州 061000

急性缺血性脑卒中是脑卒中的最常见类型之一，约占全部脑血管疾病的70%，其由各种原因导致的脑组织血液供应障碍，从而产生缺血缺氧性坏死，进而引起神经功能障碍的临床综合征[1]。近年来，随着人民生活方式改变和人口老龄化的加速，急性缺血性脑卒中的发病率逐年升高，且呈现出年轻化趋势。OX40配体(OX40L)是肿瘤坏死因子超家族成员之一，主要在抗原呈递细胞的表面表达，如活化的树突状细胞、巨噬细胞、内皮细胞等[2]。动脉粥样硬化、炎性反应等因素与急性缺血性脑卒中的发病密切相关。研究发现，OX40L是促进动脉粥样硬化形成的炎性因子，T淋巴细胞表面的OX40/OX40L相互作用可增加动脉粥样硬化斑块形成和血栓栓塞的发生风险[3]。闭合蛋白(Occludin)是脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白中的特异性蛋白，与血脑屏障的通透性及脑水肿形成密切相关[4]。目前，关于血清OX40L、Occludin与急性缺血性脑卒中病情变化及预后的关系报道较少。因此，本研究通过检测急性缺血性脑卒中患者的血清OX40L、Occludin表达水平，分析其与患者病情变化及预后的关系，为临床治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2016年1月至2020年1月在本院接受治疗的135例急性缺血性脑卒中作为观察组，其中男82例，女53例；年龄36～75岁，平均(61.29±10.17)岁；平均体质量指数(BMI)(24.76±2.13)kg/m2；吸烟史71例、饮酒史65例。纳入标准：(1)符合急性缺血性脑卒中的诊断标准[5]，经CT或MRI检查确诊；(2)均在发病时间24 h内入院；(3)首次发病；(4)年龄>18岁；(5)均行重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)静脉溶栓治疗；(6)患者家属均签署知情同意书。排除标准：(1)恶性肿瘤患者；(2)严重的肝肾等功能障碍患者；(3)近6个月内发生脑外伤或出血性脑卒中患者；(4)自身免疫性疾病患者；(5)妊娠及哺乳期妇女；(6)严重感染或慢性炎症患者；(7)严重精神疾病，不能配合者。另选取同期本院的体检健康者100例作为对照组，其中男50例，女50例；年龄30～78岁，平均(60.15±9.64)岁；平均BMI(23.81±1.65)kg/m2；吸烟史56例、饮酒史39例。两组受试者的年龄、性别、BMI、吸烟史和饮酒史比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究已通过本院医学伦理委员审核。

1.2方法 受试者入院24 h内或体检时空腹抽取外周静脉血3 mL，室温静置30 min，3 500 r/min离心10 min，离心半径为10 cm，分离上层血清，置于-80 ℃冰箱保存待测。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清OX40L、Occludin水平，血清OX40L试剂盒由美国R&D公司提供，血清Occludin试剂盒由上海仁捷生物科技有限公司提供。所有操作均严格参照仪器及试剂盒说明书操作。

1.3神经功能缺损程度及预后评估 患者入院后24 h内采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分[6]评估神经功能缺损程度，包括意识水平、指令配合度、眼球活动、视野缺损、面部表情瘫痪程度等11项，总分42分，评分越高提示神经功能缺损越重。并根据NIHSS评分分为轻度组32例(NIHSS评分<5分)、中度组56例(NIHSS评分5～15分)、重度组47例(NIHSS评分>15分)。出院后6个月门诊随访，根据改良Rankin量表(mRS)评估患者的预后状况，评分越高提示预后越差[7]。根据mRS评分，将患者分为预后良好组(mRS评分≤2分，93例)和预后不良组(mRS评分>2分，42例)。

2 结 果

2.1观察组与对照组血清OX40L、Occludin水平比较 观察组血清OX40L、Occludin水平明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 观察组与对照组血清OX40L、Occludin水平比较

2.2血清OX40L、Occludin与急性缺血性脑卒中患者病情严重程度的关系 急性缺血性脑卒中患者重度组血清OX40L、Occludin水平高于中度组、轻度组，中度组血清OX40L、Occludin水平高于轻度组，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。Pearson相关性分析结果显示，血清OX40L、Occludin分别与NIHSS评分呈正相关(r=0.479、0.358，均P<0.05)。

表2 血清OX40L、Occludin与急性缺血性脑卒中患者病情严重程度的关系

2.3急性缺血性脑卒中患者不同预后血清OX40L、Occludin水平比较 急性缺血性脑卒中患者预后不良组血清OX40L、Occludin水平高于预后良好组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 急性缺血性脑卒中患者不同预后血清OX40L、Occludin水平比较

2.4影响急性缺血性脑卒中患者不良预后的危险因素分析 多因素Logistic回归分析结果显示，NIHSS评分及血清OX40L、Occludin升高是影响急性缺血性脑卒中患者不良预后的独立危险因素(P<0.05)，见表4。

表4 影响急性缺血性脑卒中患者不良预后的危险因素分析

2.5血清OX40L、Occludin对急性缺血性脑卒中患者不良预后的预测价值 ROC曲线结果显示，血清OX40L、Occludin及二者联合检测预测急性缺血性脑卒中患者不良预后的AUC分别为0.834、0.800、0.912，见表5、图1。

表5 血清OX40L、Occludin对急性缺血性脑卒中患者不良预后的预测价值

图1 血清OX40L、Occludin预测急性缺血性脑卒中患者不良预后的ROC曲线分析

3 讨 论

急性缺血性脑卒中是一种常见临床急症，其发病机制复杂，病情进展速度快，若不能及时采取有效救治措施可造成偏瘫、昏迷甚至死亡，给患者家庭及社会带来沉重负担。急性缺血性脑卒中患者具有起病急、病情变化快、致残率高、死亡率高和复发率高等特点，严重威胁着人们的生命安全及生活质量。据报道，急性缺血性脑卒中患者救治后致残率高达62.4%～78.3%，死亡率为10.0%～15.0%[8]。因此，准确地评估急性缺血性脑卒中患者病情及预后状态，并及时调整治疗方案，对改善患者预后结局有重要临床意义。

OX40L是一种2型跨膜蛋白，相对分子质量为34×103，可与T淋巴细胞表面OX40相结合，提供T淋巴细胞活化的信号通路，从而促进T淋巴细胞活化，并迁移至炎症病灶处[9]。而OX40与OX40L之间的协同刺激可通过介导的生化因子(如细胞因子、趋化因子等)表达来破坏内皮细胞的功能；血管壁中活化的内皮细胞可通过诱导黏附分子的分泌上调，来促进循环系统内动脉粥样硬化的形成过程。同时，OX40/OX40L信号通路也可促进树突细胞的分化成熟，而活化的树突细胞可激活T淋巴细胞，使血管内皮细胞受到损伤，并促使炎性细胞因子产生，加重机体炎性反应[10]。WANG等[11]报道，OX40L与心脑血管疾病的动脉粥样硬化形成密切相关。研究表明，急性脑梗死患者OX40表达明显升高，OX40表达上调可使CD4效应T淋巴细胞向Treg细胞的分化受阻，导致Treg细胞数量减少和免疫调节功能受损，从而加重缺血脑组织的炎性反应[12]。MAO等[13]研究发现，血清OX40L与超敏C-反应蛋白明显相关，是脑梗死患者的炎症生物学标志，且其血清水平变化与脑梗死患者的病情严重程度和死亡率密切相关。Occludin是一种紧密连接蛋白，是血脑屏障的关键结构成分，并在促进皮肤伤口愈合、诱导肝细胞微绒毛形成和血管生成等方面发挥重要作用[14]。同时，Occludin在维持细胞屏障功能方面也起着重要作用，可参与调控肌动蛋白、维持细胞极性和调控各种信号传导途径转录[15]。在脑缺血过程中Occludin的改变或减少可导致血脑屏障通透性增加，而保护血脑屏障可降低血清Occludin水平并减少神经功能缺损[16]。既往报道发现，在缺血性脑卒中的早期，血清Occludin水平与血脑屏障损害密切相关，血清Occludin水平可能是评估缺血性脑卒中患者tPA溶栓后症状性颅内出血风险的潜在生物标志物[17]。

本研究结果显示，观察组血清OX40L、Occludin水平明显高于对照组，急性缺血性脑卒中患者重度组血清OX40L、Occludin水平高于中度组、轻度组，中度组血清OX40L、Occludin水平高于轻度组，提示OX40L、Occludin可能参与急性缺血性脑卒中的发生、发展。相关性分析结果显示，血清OX40L、Occludin分别与NIHSS评分呈正相关，提示血清OX40L、Occludin的表达情况与急性缺血性脑卒中患者的神经功能缺损程度有关。LI等[18]报道，急性缺血性脑卒中患者血清Occludin水平明显升高，并随着患者神经功能缺损加重逐渐升高，血清Occludin升高是急性缺血性脑卒中患者预后不良的独立预测因子。急性缺血性脑卒中患者预后不良组血清OX40L、Occludin水平高于预后良好组，表明血清OX40L、Occludin水平变化与急性缺血性脑卒中患者的预后转归密切相关。多因素Logistic回归分析示，NIHSS评分及血清OX40L、Occludin升高是急性缺血性脑卒中患者预后不良的重要危险因素，提示血清OX40L、Occludin水平越高，患者神经功能受损程度越重，进而应警惕患者致残或致死的发生风险，导致患者预后不良。ROC曲线结果显示，联合检测血清OX40L、Occludin预测急性缺血性脑卒中患者不良预后的AUC为0.912，均高于单项检测，提示二者联合检测对预测急性缺血性脑卒中患者的预后不良有较高评估价值，从而有助于制订合理的治疗方案，来改善预后状况，与既往报道[13,18]相似。

综上所述，急性缺血性脑卒中患者血清OX40L、Occludin水平升高，且与患者神经功能缺损程度及预后情况有关，血清OX40L、Occludin可作为急性缺血性脑卒中患者预后评估的参考指标，为其临床治疗提供指导。但是，本研究的局限之处在于样本数较少，可导致结果存在一定偏倚，今后尚需多中心、大样本数据进一步研究论证。