实验室检测数据在动物疫病防控中的应用

李晓丽/河北省承德市动物疫病预防控制中心 067000

近年来，随着养殖业的迅速发展，动物疫病呈现出新的特点，动物疫病种类多发，多种动物疫病混合感染的情况愈发严重，隐性感染、非典型症状和混合感染无处不在，大大增加了动物的发病率和死亡率，给动物疫病的防控和净化工作带来了巨大的挑战。仅靠传统的流行病学调查、临床症状和病理剖检变化往往难以准确诊断动物疫病，如不能及时确诊疫病、准确制定防控措施，可能会导致动物大量发病甚至死亡，造成巨大的经济损失。因此，实验室检测的重要性也更加突显，兽医实验室检测结果是兽医行政和执法的重要技术支撑，是动物疫病防控的重要组成部分，在确诊疫病、检测监测、流行病学调查、疫苗免疫效果评估和检测母源抗体水平及动物疫病净化等方面具有重要意义。

1 兽医实验室开展的主要检测

根据《各级兽医实验室建设标准》及兽医实验室开展的实验活动范围规定，BSL-2 兽医实验室主要进行血清学检测和病原学检测。

1.1 血清学检测血清学检测的基本原理是利用抗原与相应抗体在体外特异性结合的特性，对样品中的抗原或抗体进行定性或定量的检测。在机体免疫应答过程中，主要分为细胞免疫和体液免疫，兽医实验室血清学检测中，以体液免疫反应中的特异性抗体的检测应用最为广泛。常用的方法除传统的沉淀反应、凝集试验和补体结合试验外，标记免疫测定，如酶联免疫测定、荧光免疫测定等方法已成为主要的免疫测定技术。近年来，一些快速测定法如胶体金方法已被基层广泛应用。目前，BSL-2 兽医实验室血清学检测方法最常用的是ELISA（酶联免疫吸附试验）方法，该方法具有操作简单、时间短、特异性强、敏感性高和机器判读结果、减少人为误差等优点。主要用于评估疫苗免疫效果和作为对未免疫动物感染的判定依据。

ELISA 既可以用于测定抗体，也可以用于测定抗原，用于兽医实验室检测用的ELISA 主要分三种类型：双抗体夹心ELISA、间接ELISA 和竞争ELISA。

1.2 病原学检测病原学检测一是采用分离培养、鉴定或直接染色镜检等方法直接检测病原微生物如细菌、寄生虫等，这种方法操作复杂，危险性较高，在BSL-2 兽医实验室做的相对较少。二是采用 PCR（聚合酶链式反应）方法，检测样品中病原微生物的核酸，从而间接反应病原微生物是否存在，这种检测病原微生物核酸的方法更加便利、快捷，能够在较短的时间得到检测结果，应用更为广泛。

PCR 技术的基本原理类似于DNA 的天然复制过程，由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成，具有特异性强、灵敏度高、对标本纯度要求低、简便、快捷等优点，越来越多的应用于动物疫病的诊断。目前实验室应用最多的是PCR 和荧光PCR 技术，PCR 技术可以检测病毒、细菌和寄生虫等各种病原微生物，对样品中的核酸进行定量和定性分析，可用于突发动物疫情的处置和确诊动物疫病和流行病学调查等工作。

2 实验室检测数据对疫病防控的重要应用

实验室检测数据主要为动物疫病防控提供技术支撑，主要应用于以下方面：

2.1 确诊疫病、处置突发疫情生产实践中，由于亚临床感染、阴性感染、非典型症状和混合感染等情况的存在，许多动物疫病已不能仅靠临床症状和病理变化来进行准确诊断，尤其是非洲猪瘟、高致病性禽流感等重大动物疫病的诊断更需要实验室检测来确诊。以《非洲猪瘟疫情应急处置指南（第四版）》为例，疑似疫情和确诊疫情均需进行实验室检测，因为只有疫情确诊后，才能按照程序采取划定疫点、疫区和受威胁区、封锁、扑杀、无害化处理等一系列后续措施。

同样，在处置突发疫情时也需要进行实验室检测，只有根据实验室检测结果，才能准确判断疫情等级，采取科学的防控措施，在撤销封锁、终末消毒等任何环节都需要实验室检测数据作为支撑。

2.2 检测、监测和流行病学调查通过开展检测、监测和流行病学调查，能够掌握一定区域的主要动物疫病发生、流行趋势，及时把握疫情动态，准确评估动物疫情，对疫情进行准确预警，制订科学的防控措施，提升整体防控水平。

2.3 评估疫苗免疫效果和检测母源抗体动物免疫尤其是使用活疫苗免疫时，免疫效果与其体内的母源抗体水平有很大关系，母源抗体水平高，会干扰疫苗的免疫作用，只有当母源抗体下降到一定水平后，使用疫苗才能充分的发挥其免疫作用，因此要制定科学合理的免疫程序，就必须进行大量的实验室检测，以确定母源抗体水平，从而为制定科学的免疫程序提供参考。

同样，动物接种疫苗后产生的抗体水平与相关疫病的防控效果具有相关性。正常情况下，动物机体免疫抗体水平越高，动物群体免疫抗体合格率越高，对相应疫病的防控效果就越好。实验室检测能够对动物免疫抗体水平进行监测，进而评估动物群体的免疫效果，可以此为依据评判疫苗质量、接种剂量、疫苗保存与运输方式、免疫途径及免疫程序的合理性。

2.4 动物疫病净化新修订的《中华人民共和国动物防疫法》中，动物防疫的方针由原来的“预防为主”调整为“预防为主，预防与控制、净化、消灭相结合”，将动物疫病净化提升到了一个新的高度。动物疫病净化，是指在特定区域或场所对某种或某些重点动物疫病实施有计划的消灭过程，达到该范围内个体不发病和无感染状态。动物疫病净化主要采用“监测、检疫、扑杀、消毒、无害化处理”等一系列的综合性防控措施，构建“规范化、制度化、设施化、和无害化”的防疫和生产体系，最主要的就是通过实验室检测定期对感染特定病原微生物的动物个体进行准确识别，采取相应措施，以达到清除特定病原微生物、净化疫病目的。

3 影响实验室检测结果的因素

实验室质量管理的方针是科学、及时、准确，准确即要求“检测报告以准确无误为标准，确保检测结果的准确性”，影响实验室检测结果准确性的因素主要有以下几个方面：

3.1 人员现阶段，我国大部分实验室特别是基层兽医实验室还未达到试验全过程机器化，主要还是采用人工检测的方式，人员的素质和水平很大程度上决定了实验室水平的高低优劣。专业技术人员的文化水平、专业技术能力、工作熟练程度、对待工作的态度以及解决问题的能力等，都是影响检测结果准确性的重要因素。

3.2 仪器设备仪器设备的灵敏度和稳定性直接影响检测结果的准确性，特别是精密仪器，需要定期检定校准和维护，否则会降低仪器设备的准确度和精密度，缩短其使用年限。

3.3 样品待检样品采集的是否规范及其质量对检测结果的准确性影响也是非常大的，不同种类的待检样品和不同检测项目的样品的采集和制备是不同的，应按具体要求制样。如进行血清学抗体检测，如果待检血清发生腐败、溶血，那么很可能导致样品抗体检测不合格，如果用于检测病原的棉拭子样品不放保存液，就不能真正反映疫病的实际感染状况。

3.4 检测方法和检测试剂根据检测目的，选择合适的检测方法和敏感性、精确性相适应的检测试剂，能够保证实验结果的准确性。检测方法应优先选择国家标准方法作为检测依据，检测试剂应优先选择有兽医批准文号的试剂，同时，根据平时工作经验，选择稳定性、敏感性和精确度均较高的试剂。

3.5 检测环境在做血清学检测中，抗原抗体反应是一个复杂的生物学反应过程，受很多因素的影响，温度、湿度是重要的影响因素，特别是温度的高低会影响抗原抗体反应的结合和解离，直接影响结果的正确性，因此兽医实验室应按规定安装空调装置，保障检测环境符合检测方法的要求。

检测结果的准确性是评价和提高兽医实验室管理水平的重要手段，应加强兽医实验室管理，制定标准化的管理体系文件，确保有效运行，确保检测结果更加科学、准确，使实验室检测数据在动物疫病防控工作中发挥更加重要的作用。

4 结语

加强兽医实验室管理，保证检测结果的科学准确，才能够更好的将检测结果服务于动物疫病防控工作。