牛恶性卡他热的诊断方法及研究进展

刘芳月/湖南省郴州市永兴县便江街道农业综合服务中心 423300

恶性卡他热是一种在牛科和鹿科许多动物物种中具有明显临床表现和经常致病的疾病，病原为恶性卡他热病毒。恶性卡他热在世界许多国家被认为是造成主要家养反刍动物重大经济损失的原因，并且对多种反刍动物混合饲养中的易感动物造成严重的威胁。由于发病机制及其流行病学的复杂性，在临床上兽医在诊断恶性卡他热病毒单独感染或多种病原混合感染疾病方面面临重大挑战。然而，最近开发的分子诊断检测改进了恶性卡他热病毒的检测和区分，并提高了实验室检测在确认不同物种的恶性卡他热感染方面的准确性。了解新开发的恶性卡他热病毒诊断分析以及在每种流行病学情况下的适当应用对于适当利用这些分子诊断方法检测恶性卡他病毒是必要的。恶性卡他热的诊断方法是本综述的重点论述方面。

1 恶性卡他热的临床症状及流行病学

当从宿主之间传播足够病毒量的恶性卡他热病毒时，恶性卡他热会发生在多种易感宿主中，例如牛、野牛、鹿和猪。疾病通常具有急性发作并涉及一系列症状，可能包括角膜混浊、大量眼部和鼻腔分泌物、腹泻、淋巴结肿大、发烧和厌食。但基本病理特征的病变可能由于物种存在一些差异，但大体病变几乎是一致的，包括广泛的淋巴组织增生,血管和上皮坏死。一旦出现恶性卡他热的临床症状，传播的病毒量不会影响病变严重程度。临床表现和病理特征在恶性卡他热的诊断过程中都具有重要的诊断价值。通过PCR 检测外周血白细胞和组织中的恶性卡他热病毒DNA，尤其是高水平的病毒DNA，可以支持恶性卡他热病毒引起的疾病的诊断。

在一些研究中发现，不同病毒类型对反刍动物的易感性差异很大。与牛相比，野牛对恶性卡他热病毒的敏感性更敏感，约为牛的1000 倍。尽管一旦出现临床症状，恶性卡他热在野牛、牛和某些鹿科物种中通常是致命的，但也可能出现亚临床感染的情况。

恶性卡他热可能发生在存在易感宿主且附近有临床易感动物的地方。恶性卡他热病毒传播的从储存宿主到临床上易感宿主的流行病学调查结果显示，病毒通过其宿主的鼻腔分泌物或眼分泌物释放到环境中。临床上易感的物种通过吸入获得病毒，摄入受污染的食品或水中的含有病毒的分泌物也被认为是一种传播途径。密切接触和低温潮湿的环境可增强通过带病毒分泌物的有效传播，并可长距离传播。恶性卡他热不会通过自然方式从一个临床易感宿主传播到另一个，因为受影响的动物通常的结局为死亡。不同动物物种宿主感染的恶性卡他热病毒毒株可存在不同，并在某些情况下可能会发生双重感染。贮藏宿主中的感染通常是亚临床的，如在绵羊和山羊中很少报道出现恶性卡他热症状。

2 恶性卡他热的诊断方法

2.1 恶性卡他热的血清学检测方法已经开发了几种血清学检测方法来检测针对 MCFV 的抗体，这些检测包括病毒中和(VN)、免疫印迹、酶联免疫吸附检测(ELISA)/竞争抑制 ELISA(cELISA)、免疫荧光检测(IFA)/免疫过氧化物酶检测(IPT)和补体结合检测。这些测试可分为三类：基于中和抗体、多克隆抗体和单克隆抗体的检测。病毒中和试验具有高度的特异性，可以很好地检测出不同动物物种的不同恶性卡他热病毒型。基于多克隆抗体的检测,包括 ELISA、IFA 和 IPT 等,可检测针对恶性卡他热病毒多个表位的抗体。通常，这些测试具有良好的敏感性，但由于与其他疱疹病毒(如牛疱疹病毒1 和4)的交叉反应，特异性降低。为了提高特异性，使用针对迄今为止检测的所有恶性卡他热病毒中保守的表位的抗体(15-A)开发了用于检测恶性卡他热病毒抗体的 cELISA。由于使用了单克隆抗体并与检测酶直接结合，恶性卡他热病毒的cELISA 具有很高的特异性和灵敏度。此外，cELISA 在多物种样品检测方面具有较高优势，并且无需为每个被测试物种使用物种特异性酶标记物。cELISA 大量样品检测中占具有重要地位。

血清学测试还适合在野外调查无症状动物，检测阳性结果表明动物感染恶性卡他热病毒。几乎所有恶性卡他热病毒的宿主都可在被感染后持续产生抗体，这种抗体可以通过任何血清学测试检测到。4 月龄以下未感染羔羊可能因存在母源抗体而血清学检测结果呈抗体阳性，因此，不应使用血清学检测来确定低日龄动物的感染状态。然而,小于12 个月大的小动物，尤其是畜群较小的群体中的低日龄动物，可能会由于接触感染动物传播的低病毒量的恶性卡他热病毒而抗体检测结果呈阴性。血清学对于确定成年宿主的感染状态是可靠的。在牛、野牛和鹿等临床易感物种中检测到恶性卡他热病毒抗体，也表明动物已感染。然而,由于这些物种中有很大一部分可以以亚临床形式感染该病毒，只有与提示恶性卡他热的组织病理学病变和临床症状相互符合的情况下，抗体的存在才确定为动物感染恶性卡他热病毒。

2.2 恶性卡他热的分子生物学检测方法PCR 已成为恶性卡他热分子诊断的重要工具。PCR 检测已广泛应用于兽医诊断实验室;然而,将其用作检测病毒DNA 以在诊断中确认临床恶性卡他热的常规方法可能存在问题，如因为扩增污染的可能性很高，从而导致诊断实验室中的假阳性结果。用于实时定量PCR 的特异性引物探针组可显示出临床样品的病毒量。多重PCR 是一种种快速、可靠和鉴别临床样本中恶性卡他热病毒的方法。

这些新开发的检测方法在分子水平上显着改进了恶性卡他热的诊断方法，临床上兽医的关键问题是:应该使用哪种检测方法?在恶性卡他热的诊断中，首先考虑当地的流行病学信息很重要。在大多数情况下，应清楚该疾病是否与宿主有关，并且可以使用针对预期病毒的特定检测。然而，当样本来自动物园或混合饲养农场时，在这些地方，各种宿主可能与临床易感物种接触过，应考虑多重PCR 或针对不同个体病毒的多种PCR。一般来说，所有样本可以分为两大类:临床病例和亚临床病例。易感宿主中，例如牛、野牛和鹿，均存在临床和亚临床型病例感染恶性卡他热病毒的报道。在来自混合物种的临床样本中，建议使用多重PCR 来确认哪种病毒是致病病毒。在无病的临床易感宿主中确认感染通常是一个无关紧要的问题，因为导致牛和野牛恶性卡他热亚临床感染形式并不常见，而且病毒从受感染动物传播到其群体的可能性很小。几乎所有的宿主,如绵羊、山羊和角马，都感染了恶性卡他热病毒，感染状态通常可以通过血清学确认。在某些情况下，需要使用 PCR 来证明动物不携带有恶性卡他热病毒。例如，为了饲养无恶性卡他热病毒的绵羊应尽早将未感染的羔羊与阳性羊分离开，对羔羊的初步筛选需要进行病毒PCR检测。无论动物携带哪种类型的恶性卡他热病毒，所有受感染的宿主都被视为病毒传播的来源。即使所有现有的PCR 均呈阴性,但在具有强烈的恶性卡他热临床和病理学特征的病例中仍可能存在未鉴定过的恶性卡他热病毒。虽然扩增产物需要通过测序验证，但泛特异性靶向疱疹病毒DNA 聚合酶基因的PCR 检测是鉴定新型恶性卡他热病毒的重要工具，并将继续用于恶性卡他热的诊断领域。

3 结语

现在有几种新开发的分子诊断检测方法可用于恶性卡他热的诊断，但由于发病机制及其在不同物种(包括临床易感宿主和宿主宿主)中的流行病学的复杂性，临床上兽医面临的挑战是选择正确的检测方法来确认该病或动物感染。恶性卡他热病毒的天然宿主范围广泛，一般可分为两类:一般宿主(如绵羊、山羊和角马)和临床易感宿主(如牛、野牛和鹿)。几乎所有的宿主宿主都被感染，血清学检测对于确定感染状态是有用和有效的，但这不包括带有母体抗体的低日龄动物的检测。使用PCR 检测和区分宿主宿主中的恶性卡他热病毒通常仅用于非常特定的目的，例如,需要巢式PCR 来确定羔羊是否不携带恶性卡特热病毒以便建立不含恶性卡他热病毒的羊群。血清学和PCR 对在疑似患有恶性卡他热的宿主中确认疾病几乎没有价值。临床疾病和亚临床感染均发生在临床易感宿主中。巢式PCR 和实时定量PCR 均适用于检测具有临床恶性卡他热的动物的白细胞和组织中的病毒DNA。建议将实时qPCR 用于常规检测，因为该方法具有较高的灵敏度、高特异性和降低交叉污染的脆弱性。推荐血清学检测,特别是 cELISA，用于筛查临床易感宿主的感染状态，因为在亚临床感染期间白细胞中病毒DNA 水平低，这可能导致PCR 检测出现大量假阴性。随着分子技术的进步和对疾病的进一步了解，在不久的将来可能会开发出具有更好敏感性、特异性和便利性的新一代恶性卡他热检测方法。