IgG抗体亚类与新生儿溶血病发病的相关性分析

李琳琳，吴莉萍，韩 静，朱向宝，丁 伟

(安徽医科大学附属宿州医院1.输血科；2.检验科；3.新生儿科，安徽 宿州 234000)

新生儿溶血病(hemolytic disease of newborn，HDN)是产妇与胎儿血型不合而引起的一类同族免疫性疾病，患儿表现出高胆红素症、溶血性贫血等特殊症状，还可引起早产、新生儿死亡、智力低下等并发症发生[1]。流行病学显示我国HDN病因96%与母婴ABO血型不合有关，其中尤以母亲O型血型最为常见[2]。因此，加强监护及早期诊断是降低产后发病、保证优生优育的关键。目前，临床认为产妇血清IgG抗A(B)抗体水平≥1∶64是新生儿发生HDN的高危因素[3]。但随着研究的不断深入，部分报道指出，产妇血清IgG抗体效价与HDN无明显相关性，受到个体抗原对抗体的亲和力、胎儿耐受力等因素影响，不能单纯依靠血清IgG抗体效价判断其发病情况[4]。基于此，本研究选择产妇血清IgG抗体亚类，比较患儿母亲及健康产妇的不同抗体亚类水平，以证实产前产妇血清IgG抗体亚类与HDN发病间的联系，为临床诊断提供可靠依据。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2018年1月至2019年12月于安徽医科大学附属宿州医院接受产检及分娩的121例夫妇ABO血型不合的O型血产妇为观察组。纳入标准：①孕妇血清IgG抗A(B)抗体水平≥1:64；②自愿签署知情同意书；③临床各项检查资料完整；④年龄25～40岁；⑤足月妊娠；⑥夫妇双方已经过ABO血型检查，孕妇为O型血，丈夫为A、B或AB型血者；⑦初次妊娠产妇。排除标准：①新生儿出生后采集其抗凝血送检时间超过2h；②孕周<34周；③合并心脏病、高血压、肺结核等产前疾病；④胎位不正及多胎妊娠；⑤胎盘前置、过期妊娠。另外随机选取70例正常妊娠并按规定产检的健康孕妇作为健康对照组。本研究已获得医院伦理委员会批准。观察组年龄25～36岁，平均年龄(30.52±2.54)岁；孕前体质量指数(body mass index，BMI)为20～24kg/m2，平均BMI(22.50±0.84)kg/m2；孕周38～42周，平均孕周(40.12±1.03)周；丈夫ABO血型构成：A型61例，B型45例，O型15例。健康对照组年龄26～37岁，平均年龄(30.21±2.14)岁；孕前BMI为20～24kg/m2，平均BMI(22.67±0.91)kg/m2；孕周38～42周，平均孕周(39.86±1.47)周；丈夫ABO血型构成：A型36例，B型21例，O型13例。两组对象性别、年龄等比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2研究方法

1.2.1分组方法

根据其产前IgG抗A(B)抗体水平，分为25例高值组(≥1∶256)、41例中值组(1∶128～<1∶256)及55例低值组(1∶64～<1∶128)3组不同效价亚组。

1.2.2指标检测方法

产前采集产妇与其丈夫的空腹静脉血各3mL，待胎儿娩出后采集其脐静脉血2mL，常规处理后保存待测。通过全自动血型分析仪Microlab STARlet IVD(长春博讯生物技术有限责任公司)，ABO/RhD血型定型检测试剂卡(国械注准20153400076，6孔/卡，12卡/盒)采用微柱凝胶法进行血型分析。将产妇血清与0.2mol/L的2-巯基乙醇液等体积混合，于37℃下孵育30min。取试管将处理后的血清用生理盐水倍比稀释，后采用微柱凝胶法检测其血清IgG抗A(B)效价，若肉眼可观察到红细胞沉积，则为阴性，若红细胞分布在微柱四周，则为阳性，IgG抗A(B)效价≥1∶64则提示IgG抗A/B表达为阳性。

1.3诊断标准

参考《全国临床检验操作规程》(第3版)中相关操作规范，取产妇分娩时新生儿的脐带血检查血型并做溶血3项试验，包括母婴ABO或Rh血型不合，新生儿存在高胆红素血症或贫血等相关症状，静脉血红蛋白值≤130g/L，直接抗人球蛋白、红细胞抗体放散及游离试验3项试验中红细胞抗体放散试验阳性或任意2项为阳性，排除不规则抗体，则可确诊。

1.4观察指标

比较观察组不同抗体效价组组间HDN发生率，评估产妇IgG抗体效价水平与HDN发病率之间的相关性，并记录HDN患儿母亲、HDN患儿、健康对照组母亲及健康新生儿之间的IgG抗体亚类(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)水平，分析产妇IgG抗体亚类水平对其新生儿HDN发病的诊断效能。

1.5统计学方法

2结果

2.1不同IgG抗体效价亚组HDN发生率比较

121例夫妇ABO血型不合的O型血血清IgG抗A(B)抗体水平≥1∶64产妇的新生儿HDN总发生率为32.23%(39/121)，不同IgG抗体效价亚组HDN发生率差异有统计学意义，且随着IgG抗体效价的升高其发生率上升(χ2=24.578，P<0.05)，见表1。

表1 不同IgG抗体效价亚组HDN发生率比较[n(%)]Table 1 Comparison of incidence rate of HDN

2.2产妇IgG抗体效价水平与HDN发生率的相关性分析

经Spearman相关分析，产妇IgG抗体效价水平与HDN发生率之间具有正相关性，差异有统计学意义(r=0.748，P<0.05)。

2.3患儿及其母亲与健康对照组之间的IgG抗体亚型水平比较

HDN患儿母亲、HDN患儿及健康对照组之间的IgG1、IgG2、IgG3、IgG4水平比较差异均有统计学意义(F值分别为55.768、81.825、141.141、31.089，P<0.05)，进一步比较显示，HDN患儿母亲IgG2水平显著高于HDN患儿，健康对照组母亲IgG2水平显著高于健康新生儿，且HDN患儿母亲血清IgG1、IgG3、IgG4水平显著高于健康对照组母亲，HDN患儿IgG1、IgG3、IgG4水平显著高于健康新生儿(P<0.05)，见表2。

表2 患儿及其母亲与健康对照组之间的IgG抗体亚型水平比较Table 2 Comparison of levels of IgG antibody subclasses between children and

2.4产妇血清IgG抗体亚型水平对新生儿HDN发病的诊断效能评估

ROC曲线显示，单独检测产妇血清IgG抗体亚型IgG1、IgG3、IgG4水平均可作为诊断新生儿HDN的效能指标(Z值分别为11.950、12.431、6.195，P<0.05)，产妇血清IgG1水平对新生儿HDN的诊断敏感性为85.71%，特异性为82.05%,AUC为0.890；产妇血清IgG3水平对新生儿HDN的诊断敏感性为100.00%，特异性为87.18%，AUC为0.927；产妇血清IgG4水平对新生儿HDN的诊断敏感性为97.14%，特异性为66.67%，AUC为0.816，见表3及图1。

表3 产妇血清IgG抗体亚型水平对新生儿HDN发病的诊断效能Table 3 Diagnostic efficiency of maternal serum IgG antibody subclasses levels on occurrence of neonatal HDN

3讨论

3.1 IgG抗体亚类与新生儿HND发病的研究现状

现代医学认为HND发病主要与母婴血型不合有关，母亲体内的血清IgG抗体可通过胎盘进入胎儿体内，导致其红细胞被同种抗体包被，而此类抗体属于父源性抗原，在母亲分娩前后发生溶血，进而出现贫血、高胆红素症等相关症状[5]。研究发现HDN相关的血型抗体主要为抗A、抗B等，临床ABO血型不合的概率可达20%～25%[6]。理论上而言，当母亲是O型血时，胎儿为A、B、AB型血，或者母亲为B型血，而胎儿为A型血都可导致HDN发病，但实际而言，临床HDN患儿的母亲90%以上为O型血[7]。

3.2夫妇ABO血型不合的O型血产妇新生儿HDN发病率

本研究选取夫妇ABO血型不合的O型血产妇为研究对象，结果显示，121例产妇的新生儿HDN总发病率为32%，较以往研究中第一胎产妇新生儿HDN发病率40%～50%稍低[8]。而有学者研究显示，随着妊娠次数的增加，产妇血清IgG抗A(B)抗体阳性率越高，而HDN发病风险更大[9]。本研究未排除妊娠次数对结果的影响，纳入产妇均为初次妊娠产妇，且样本纳入标准及人类白细胞抗原基因多样性等存在一定差异。

3.3新生儿HDN的临床诊断

目前，临床诊断HDN主要通过新生儿溶血3项试验及相关症状等综合判定，其中溶血3项中直接抗球蛋白试验可检测出新生儿红细胞是否出现抗体及其数量，在一定程度上可反映出孕期胎儿在母体中的致敏性，而游离抗体试验可测定新生儿血清中不规则抗体状态，抗体释放试验则可判断其红细胞对IgG抗体的敏感度，具有一定诊断意义[10]。随着研究的不断深入，诸多报道显示，产妇产前IgG抗体效价与HDN发病具有一定联系，妊娠期间动态监测其血清抗体水平可有利于早期预测HDN的发生，从而做出相应的防御措施[11]。

3.4 IgG抗体亚类与新生儿HND发病的相关性

本研究结果显示，随着IgG抗体效价的升高其发病率明显上升，且具有正相关性，与以往报道结果一致[12]。原因可能为产妇的血清IgG抗体效价越高，其经过胎盘进入胎儿血液循环的含量越高，与其红细胞表面抗原结合后造成的破坏性影响则更大，新生儿出现溶血、贫血等症状越严重。因此针对妊娠20周左右的夫妇ABO血型不合的产妇应尽早注重IgG抗体效价检查，并在孕28、32周各做一次抗体筛查，若其效价超过1∶64甚至1∶128则需要口服黄疸茵陈冲剂等进行处理。

3.5产前IgG抗体效价对HDN发病的诊断效能

随着研究的不断深入，部分学者提出产前IgG抗体效价对HDN发病的诊断效能较低，实际临床工作中产妇IgG效价<1:64者其新生儿依然可能发病，而抗体效价超过1:256的产妇其新生儿HDN发病还可能延迟，与母亲孕期接触过高效价的IgG抗体、胎儿红细胞A(B)抗原强、高抗体亚类水平等因素有关[13]。临床关于IgG抗体亚类与新生儿HDN发病的关系具有一定的研究报道，但对其诊断效能尚无定论。因此，本研究根据产妇孕期及HDN患儿IgG抗体亚类水平，探究其早期预测效能，结果显示，HDN患儿母亲血清IgG1、IgG3、IgG4水平明显高于健康对照组母亲，单独检测产妇血清IgG抗体亚型IgG1、IgG3、IgG4水平均可作为诊断新生儿HDN的效能指标，曲线下面积分别为0.890、0.927、0.816。分析可能是因为新生儿血清抗体均来自母体，而以上抗体亚类与红细胞结合后激活补体继而加速溶血。与以往IgG1诊断检出率最高存在一定出入，可能与试剂敏感性、检测人员水平不同等有关。

综上所述，夫妇ABO血型不合的O型血产妇其血清IgG抗体效价越高，新生儿HDN发病率越高，且IgG抗体亚型IgG1、IgG3、IgG4水平均可作为诊断新生儿HDN的效能指标，具有一定临床意义。