505.6 g/L 2,4-滴·毒莠定三乙醇胺盐可溶液剂高效液相色谱分析方法

朱安琪，许宏彩，庞怀林

(1.上海泰禾化工有限公司，上海201615；2.南通泰禾化工股份有限公司，南通 226407)

2,4-滴是一种具有良好选择性和内吸传导性的苯氧羧酸类激素型除草剂，可促进植物体内核酸和蛋白质的生物合成，使细胞过度分裂和伸长，组织因过度生长呈畸形，从而阻碍物质运输，导致植物死亡[1]。目前，2,4-滴的开发已超过70年，但它一直是各种作物和非耕地杂草防除的重要工具[2]。毒莠定是一种内吸性吡啶类除草剂，具有毒性低、选择性高、用量少、在植物体和土壤中的残留量小、残留周期短等特点，是防除抗2,4-滴的杂草和灌木的有效药剂[3]。基于两化合物类别及其作用机制不同，开展2,4-滴与毒莠定的混剂及其应用研究，具有重要的生态学意义和环保意义，不仅可以扩大除草谱，提高除草效果，而且还可降低用药量，延缓杂草抗性的产生[4]。

目前，关于505.6 g/L 2,4-滴·毒莠定三乙醇胺盐可溶液剂的质量分析方法尚未见报道。本文采用高效液相色谱法建立了同条件下测定2种有效成分的定性定量分析方法。该方法分离效果好、操作简单快速，适用于505.6 g/L 2,4-滴·毒莠定三乙醇胺盐可溶液剂中2,4-滴和毒莠定产品的质量控制。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

岛津 LC-CBM-20Alite高效液相色谱仪具SPD-M20A二极管阵列检测器和Labsolution色谱工作站(日本岛津公司)；ML204型电子天平(瑞士梅特勒托利多集团)；2200T型超声波清洗仪(上海安谱科学仪器有限公司)；Direct 8型纯水超纯水一体机(德国默克集团)；直径0.45 µm的有机相滤膜(上海安谱实验科技股份有限公司)。

甲醇，色谱纯(上海安谱实验科技股份有限公司)；磷酸，分析纯(国药集团)；2,4-滴标样，已知质量分数 99.4% (沈阳化工研究院有限公司)；毒莠定标样，已知质量分数99.0% (沈阳化工研究院有限公司)；505.6 g/L 2,4-滴•毒莠定三乙醇胺盐可溶液剂试样(南通泰禾化工股份有限公司提供)。

1.2 色谱条件

色谱柱：岛津Shim-pack GIST C18色谱柱 (250 mm×4.6 mm i.d.不锈钢柱，内装5 µm填充物)；流动相：甲醇-0.1%磷酸水溶液(体积比60∶40)，经滤膜过滤并脱气；流速：1.0 mL/min；检测波长：225 nm；柱温：(30 ±2) ℃；进样体积：5 µL。在上述色谱操作条件下，毒莠定和2,4-滴的保留时间分别约为3.6 min和11.7 min。毒莠定标样、2,4-滴标样和试样的高效液相色谱图如图1所示。

1.3 溶液的配制

1.3.1 2,4-滴和毒莠定标样溶液的配制

称取约0.05 g (精确至0.000 1 g)2,4-滴标样和约0.014 g (精确至0.000 01 g) 毒莠定标样置于100 mL容量瓶中，用约50 mL甲醇溶解并超声，待溶液冷却至室温后用甲醇稀释至刻度，摇匀备用。

1.3.2 试样溶液的制备

称取约0.25 g (精确至0.000 1 g) 505.6 g/L 2,4-滴·毒莠定三乙醇胺盐可溶液剂置于100 mL容量瓶中，用流动相溶解并超声15 min，待溶液冷却至室温后用流动相稀释至刻度，摇匀备用。

1.4 测定

在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，待相邻2针的峰面积相对变化小于1.0%，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

1.5 计算

将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中毒莠定/2,4-滴峰面积分别进行平均。试样中毒莠定/2,4-滴的质量分数按式(1)计算：

式中：X为试样中毒莠定/2,4-滴的质量分数，以%表示；为试样溶液中毒莠定/2,4-滴峰面积的平均值；m1为标样的质量的数值，单位为克(g)；P为标样中毒莠定/2,4-滴的质量分数，以%表示；为标样溶液中毒莠定/2,4-滴峰面积的平均值；m2为试样的质量的数值，单位为克(g)。

试样中505.6 g/L 2,4-滴·毒莠定三乙醇胺盐可溶液剂的质量浓度X1按式(2)计算：

式中：X1为试样的质量浓度，单位为克/升(g/L)；X2为毒莠定和2,4-滴的质量分数之和，以%表示；ρ为20 ℃时试样的密度的数值，单位为克/毫升(g/mL)，按NY/T 1860.17—2010中5.2进行测定。

2 结果和分析

2.1 色谱条件的选择

本方法流动相选择依据 2,4-滴水剂[5]和毒莠定CIPAC的检测方法，选择了甲醇-磷酸溶液体系，在流动相比例上，经过不同比例的筛选，最终选定流动相及比例为甲醇∶0.1%磷酸溶液=60∶40(体积比)。

检测波长的选择，毒莠定在224.5 nm附近有较强吸收峰，而2,4-滴在203 nm附近也有最高吸收峰，227 nm附近有次高吸收峰(图2)，且进行了225 nm和行标[5]285 nm条件下线性和精密度回收率的对比，2个波长下结果基本无差异。因此，为兼顾两者均有较好的吸收，同时杂质响应值小，流动相无吸收，将检测波长选为225 nm。

图2 毒莠定和2,4-滴UV光谱图

2.2 分析方法特异性

本试验采用 HPLC-DAD峰纯度分析法来鉴别毒莠定和2,4-滴。毒莠定和2,4-滴标样的最小峰纯度相似度为1.000 000，最小峰纯度阈值为1.000 000，最小峰纯度指数为 0，说明标样色谱峰中不含有杂质峰；505.6 g/L 2,4-滴•毒莠定三乙醇胺盐可溶液剂中毒莠定和2,4-滴HPLC-DAD峰纯度中最小峰纯度相似度为1.000 000，最小峰纯度阈值为1.000 000，最小峰纯度指数为0，说明样品色谱峰中不含有杂质峰。标样与试样的色谱峰保留时间差在 1.0%以内，如图1所示。标样和试样的峰纯度图如图3所示。

图3 标样和试样的峰纯度图

2.3 分析方法的线性相关性测定

在一定质量范围内，准确配制6个质量浓度递增的毒莠定和 2,4-滴混合线性相关溶液。按照本方法所规定的操作条件，待仪器稳定后，按顺序测定每个溶液中毒莠定和2,4-滴的峰面积，取2次测定的平均结果。以毒莠定/2,4-滴质量浓度(mg/L)为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，结果见图4。可见，毒莠定的线性方程为y=31 676.812 8x+63 929.750 0，相关系数R2=1.000 0；2,4-滴的线性方程为y=9 761.109 9x+111 942.692 8，相关系数R2=0.999 9。

图4 毒莠定和2,4-滴峰面积与质量浓度关系图

2.4 分析方法的精密度试验

对同一505.6 g/L 2,4-滴•毒莠定三乙醇胺盐可溶液剂，在上述色谱操作条件下进行分析，平行测定 6次，试验结果详见表 1。可见，毒莠定的标准偏差和变异系数分别为0.004和0.08%，2,4-滴的标准偏差和变异系数分别为0.020和0.08%，说明该方法精密度良好。

表1 505.6 g/L 2,4-滴·毒莠定三乙醇胺盐可溶液剂的精密度试验结果

2.5 分析方法的准确度试验

称取约0.125 g(精确至0.000 1 g) 505.6 g/L 2,4-滴•毒莠定三乙醇胺盐可溶液剂置于100 mL容量瓶中，再分别加入2,4-滴标样0.025 g (精确至0.000 01 g)和毒莠定标样约0.007 g (精确至0.000 01 g)，用流动相溶解并超声15 min，待溶液冷却至室温后，用流动相稀释至刻度，摇匀备用。按上述方法，制备 6份505.6 g/L 2,4-滴•毒莠定三乙醇胺盐可溶液剂准确度试验溶液。

在前述色谱操作条件下分别进行分析，测得毒莠定的回收率为 99.43%~99.66%，平均回收率为99.6%，2,4-滴的回收率为99.24%~99.96%，平均回收率为99.6% (表2)，说明该方法准确度良好。

表2 505.6g/L 2,4-滴·毒莠定三乙醇胺盐可溶液剂中毒莠定和2,4-滴的准确度试验结果

2.6 非分析物干扰试验

在评价时，需要包含非分析物的干扰，防止有效成分中存在其他干扰物导致分析方法出现误差。

制剂空白为不含有效成分的样品空白，其高效液相色谱图如图5所示，与图1对比可见，制剂空白中不含有效成分的干扰物质。

图5 制剂空白的高效液相色谱图

3 结 论

本文建立了采用高效液相色谱法快速测定505.6 g/L 2,4-滴·毒莠定三乙醇胺盐可溶液剂中有效成分毒莠定/2,4-滴的方法。采用 C18不锈钢色谱柱(250 mm×4.6 mm i.d.×5 µm)和二级管阵列检测器，以甲醇-0.1%磷酸水溶液(体积比60∶40)为流动相，测得有效成分的精密度和准确度高、线性关系良好。该方法具有操作简便、检测过程稳定、结果准确、分离效果好等特点，可用于 505.6 g/L 2,4-滴·毒莠定三乙醇胺盐可溶液剂产品的检测。