姜荷花工厂化育苗生产技术体系研究

郑运欢 江秀娜 曾宝珰 洪生标 汤 楷 苏镇祥 林天友 陈春来

（汕头市农业科学研究所，广东汕头 515021）

姜荷花（Curcuma alismatifolia）是姜科姜黄属多年生热带球根草本植物，对温度、湿度等生长环境要求颇高，广泛栽培于世界热带地区[1]。姜荷花苞片酷似荷花，且为姜科，故称姜荷花。其原产热带，花朵形似郁金香，因而被称为“热带郁金香”[2]。姜荷花花型独特，花序穗状，上部不育苞片为阔卵形，下部苞片为蜂窝状（一般内含4朵紫白色小花），花色鲜艳，有紫色、红色、绿色、白色、黄色等颜色[3]。姜荷花鲜切花花枝长度可达60 cm或更长，瓶插寿命可达15 d或更长，花期长（6—10月），盆栽时花序观赏期长达40 d，是优良的观花植物，花期正值夏季切花种类、产量均较少的时期，可以弥补夏季鲜切花的空白，可应用于切花、盆花、花坛、花境和花海造景等[4]。利用姜荷花幼嫩花序进行组织培养，诱导其中的幼嫩花蕾逆转为叶芽（即诱导成功），经过增殖形成丛生芽团，从而快速获得大量优质整齐的克隆种苗，缩短优良品种的繁育年限，加快育种速度。探索工厂化育苗方法，可为姜荷花优良品种快速繁育和市场推广提供更多的可行途径。

1 材料与方法

1.1 试验材料

供试姜荷花品种11个，分别为绿巧克力、繁星、黎明、蓝娜雪、白雪公主、佳丽、紫嫣、至尊、红韵、桃子、玉如意等，共有绿色、白色、紫色、红色、黄色、粉色等6个色系。选取健壮的姜荷花开花植株，剪取幼嫩花序（约15 cm长，花蕾未露出苞片）（图1），去除花蕾外部的苞片，用流动自来水冲洗20 min。

1.2 试验方法

幼嫩花序在超净工作台上用75%乙醇浸泡30 s后，浸泡在1%NaClO溶液（每100 mL消毒液中加1～2滴吐温20）中消毒杀菌，其间持续振荡或摇晃，使幼嫩花序与消毒液充分接触，然后用无菌水冲洗5～6次，将幼嫩花蕾完整分切出来，置于灭菌滤纸上吸干表面水分。

1.2.1 不同消毒灭菌时间对姜荷花幼嫩花序诱导的影响。设置3个消毒时间，分别为12、14、16 min。幼嫩花序经过消毒杀菌，黑暗培养35 d。之后调查和统计姜荷花幼嫩花序诱导情况。

1.2.2 休眠芽诱导培养。设4种花蕾诱导培养基，分别为 B2D1（1/2MS+2 mg/L 6-BA+1 mg/L 2，4-D）、B3D1（1/2MS+3 mg/L 6-BA+1 mg/L 2，4-D）、B2N1（1/2MS+2 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA）、B3N1（1/2MS+3 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA）。培养基中添加蔗糖25 g/L、琼脂5.5 g/L，培养基pH值为5.5～5.8。使用口径为6 cm的广口玻璃瓶，每瓶倒入花蕾诱导培养基30 mL，在103.4 kPa、121℃条件下高压湿热灭菌20～30 min，冷凝干燥后接入经过消毒杀菌处理的单个花蕾，在温度（27±2）℃下黑暗培养 35 d，统计污染率、死亡率和花蕾诱导率。

1.2.3 继代增殖培养。设3种继代增殖培养基（以1/2MS为基本培养基，设置6-BA 3、5、7 mg/L浓度梯度），培养基中添加蔗糖25 g/L、琼脂5.5 g/L，pH值为5.5～5.8。使用口径6 cm广口玻璃瓶，每瓶倒入继代增殖培养基30 mL，经高压湿热灭菌（条件同上）、冷凝干燥后接入已处于萌发生长状态的单个嫩芽，置于温度（27±2）℃、光照强度 2 500 lx、光照时间 8 h/d[5]的环境下培养30 d，统计嫩芽增殖率和增殖倍数。

1.2.4 生根壮苗培养。设置2种壮苗生根培养基，分别为 JG-1[水溶肥（7-6-19）3 g/L+蛋白胨 2 g/L+活性炭0.8 g/L+香蕉泥 15 g/L+土豆泥 50 g/L]、JG-2[水溶肥（7-6-19）3 g/L+水溶肥（20-20-20）0.5 g/L+蛋白胨2 g/L+活性炭0.8 g/L+土豆泥50 g/L]。将姜荷花幼嫩单芽（高约4～6 cm，有2～3叶）分别接入 JG-1、JG-2培养基中，培养基中添加蔗糖20 g/L、琼脂5.5 g/L，pH值为5.5～5.8，使用口径为6 cm广口玻璃瓶，每瓶倒入壮苗生根培养基30 mL，高压湿热灭菌、冷凝干燥后接入已有根点长出的单株幼苗，置于温度（28±2）℃、光照强度 3 200 lx、光照时间 10 h/d 的环境下培养15 d，统计生根数和生叶数。

1.2.5 炼苗和移栽。将经过壮苗生根培养的健康幼苗（带玻璃瓶）放入炼苗棚进行炼苗培养（光照强度低于7 000 lx）30 d后，选取高约7～8 cm、茎基直径约3 mm、有5条或以上根的小苗脱瓶洗净，在四环素4 000倍液或精甲杀菌悬浮剂800～1 000倍液中浸泡5 min后晾干，栽入口径为5 cm的塑料杯中，塑料杯中栽培基质为细沙∶泥炭土=1∶1。露地栽培14 d后，根系长满塑料杯，可脱去塑料杯下地栽培。

2 结果与分析

2.1 不同消毒灭菌时间对姜荷花幼嫩花序诱导的影响

由表1可知，姜荷花幼嫩花序诱导后，部分污染，部分花蕾逆转萌发，部分死亡。1%NaClO溶液消毒12 min时间较短，姜荷花幼嫩花序污染率较高；消毒灭菌14 min，花蕾诱导效果最佳；消毒灭菌16 min，时间较长，花蕾死亡率较高。可见，外植体消毒杀菌时间对花蕾诱导率有着较大的影响。

表1 不同消毒灭菌时间对姜荷花幼嫩花序诱导的影响

2.2 不同培养基对姜荷花花蕾诱导的影响

由表2可知，不同培养基上的姜荷花花蕾诱导率各不相同，B3N1培养基的姜荷花花蕾诱导率较高，可达到90%。因此，B3N1培养基较其他培养基更加适合花蕾的诱导。

2.3 不同培养基对姜荷花继代增殖的影响

幼嫩单芽接入添加不同浓度6-BA的培养基培养30 d后，增殖数量和程度各不相同（图2）。由表3可知，添加5 mg/L 6-BA培养基上的单芽增殖（以增殖的单芽个数计）数量较多，增殖率较高，增殖倍数（以单芽增殖芽数计）也较大，形态更加完整，较为合适。因此，添加5 mg/L 6-BA更加适合姜荷花幼嫩单芽的继代增殖培养。

表3 姜荷花单芽增殖情况

2.4 不同培养基对姜荷花幼苗生根生叶的影响

由表4和图3可知，JG-1培养基上的幼苗生根数和生叶数较多，形态完整，根粗壮，叶翠绿。该培养基较适合本文中多数姜荷花品种的生根壮苗培养，可为幼苗出瓶定植、成活和管理奠定基础。

表4 姜荷花幼苗生根生叶情况

3 结论与讨论

本研究比较不同消毒灭菌时间、不同诱导培养基、不同添加物对姜荷花组培扩繁的影响，筛选出较为适合姜荷花优良种苗快速繁育的培养基和添加物，最短在95 d内成功克隆出姜荷花优良品种幼苗。不同品种取自不同的栽培环境，成功克隆所需的时间不同，对试验结果有影响，本文不再详述。每株健康瓶苗于当年4月下地种植，11月可以采收鲜花2～4枝，冬季叶落后采收种球1～3个[6-8]。本研究初步探索了姜荷花工厂化快速育苗的方法，为姜荷花优良新品种的保存和快速繁育提供了可行途径。