13种呼吸道病原体核酸检测在儿童呼吸道感染中的应用效果研究

李伟生，谢敏静

(珠海市人民医院高栏港医院，广东 珠海 519050)

下呼吸道感染是儿科患者的常见病，高居5岁以下儿童死亡原因的第二位[1]。采用呼吸道感染患儿的病原检测能识别呼吸道感染病原的流行现状和分布特征，为临床诊断和精准治疗提供科学依据。与传统病原学、核酸分离培养检测相比，基于液相芯片技术的核酸检测具有效率高、通量大的优势[2]。本研究对我院收治的312例下呼吸道感染患儿采用液相芯片技术进行13种呼吸道病原体核酸检测，以期为呼吸道感染的临床诊断提供科学参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年11月—2020年10月珠海市人民医院高栏港医院收治的312例下呼吸道感染患儿为研究对象，男176例，女136例。

纳入标准：(1)符合下呼吸道感染诊断标准；(2)临床检查体内炎性指标升高，胸片显示肺部病变；(3)患儿家属知情同意。

排除标准：(1)非感染原因致胸片显示肺部病变；(2)肝肾功能不全；(3)合并其他严重器质性病变。

1.2 检测方法

入院当日采集患儿咽拭子，置于2 mL保存液中4℃保存，于24 h内送实验室检测。用核酸提取试剂提取患儿的DNA和RNA，提取完成后，将待检核酸与13项呼吸道病原体核酸检测试剂盒(RNA/DNA)扩增试剂混合后进行PCR扩增，操作按照扩增试剂盒说明书进行。进行DNA 检测的病原体为：SP、CMV、博卡病毒(hBoV)、MC、Hi、ADV、MP、BP；进行RNA检测的病原体为：RSV、鼻病毒(HRV)、副流感病毒(HIV)、INF-A、乙型流感病毒(INF-B)。将已扩增样本进行杂交检测，开启Luminex Magpix液相芯片检测平台，在核酸杂交试剂加入扩增产物，通过PCR仪行杂交显色反应。显色结束后，将样品放入孔板加热模块，运行待检测批次并完成检测。

1.3 观察指标

将患儿按年龄划分标准分为<1岁组、1～3岁组、3～5岁组和≥5岁组，比较13种呼吸道病原体的检出情况、混合感染及不同年龄组间病原体的检出情况。混合感染率=病原体检出2种及以上病原体阳性例数/该病原体检出阳性总数[3]。

1.4 统计学方法

采用SPSS 23.0软件进行数据分析，计数资料用例数(%)表示，行χ2或秩和检验；P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 13种呼吸道病原体检出情况

在312例患儿中，有215例患儿至少有一种呼吸道病原体检测阳性，阳性检出率为68.91%，其中检出单一病原体阳性患儿134例，占42.94%，检出两种及两种以上病原体阳性患儿81例，占25.96%。检出率最高的3种病原体为SP、CMV和RSV。13种呼吸道病原体检出中，混合感染率排名前5位的病原体为MP、BP、Hi、INF-A和MC，见表1。

表1 13种呼吸道病原体检出情况 例

2.2 不同年龄组的病原体检出情况

不同年龄组的SP、CMV、RSV、INF-A、ADV阳性检出率差异显著(P<0.05)，具有统计学意义。低年龄段患儿常见的病原体为CMV、RSV，SP的检出率随患儿年龄的增长而升高。高年龄段患儿常见的病原体为INF-A、ADV。不同年龄组间(<1岁组、1～3岁组、3～5岁组、≥5岁组)其他病原体的阳性检出率差异不显著(P>0.05)，见表2。

表2 不同年龄组病的病原体检出情况 例(%)

3 讨论

建立一种能同时检测多种呼吸道病原体的快速有效的检测技术对儿童呼吸道感染的临床诊断具有十分重要的临床价值。本次检测结果显示，215例患儿中至少有一种呼吸道病原体检测阳性，阳性检出率为68.91%，说明基于液相芯片技术的核酸检测具有较高的阳性检测率。SP、CMV和RSV是检出率最高的3种病原体，提示细菌和病毒是本地区呼吸道感染患儿的主要病原体，临床诊断应在参照血常规、X线检查的基础上重视病原学实验室检测结果，科学合理使用抗生素[4]。检出两种及两种以上病原体阳性患儿81例，占25.96%，提示呼吸道感染患儿存在多重呼吸道病原体混合感染的情况。混合感染率排名前5位的病原体为MP、BP、Hi、INF-A和MC，可能是因为原发病原体感染后损坏了呼吸道黏膜的防护屏障，其他病原体入侵更容易，或者是患儿感染后体质变差，自身抵抗力下降。

不同年龄组间SP、CMV、RSV、INF-A、ADV的阳性检出率存在显著差异。低年龄段患儿常见的病原体为CMV、RSV，可能与低年龄患儿自身免疫力相对较低有关[5]。SP的检出率随年龄增长而升高，高年龄段患儿常见的病原体为INF-A、ADV，可能受机体呼吸道正常菌群建立过程的影响。

基于液相芯片技术的核酸检测效率高、通量大，13种呼吸道病原体核酸检测能快速有效地满足呼吸道病原体检测的需要，具有检测简单、敏感度高等优点，可用于辅助诊断儿童呼吸道感染的相关疾病。在临床诊断时要注意不同年龄组间病原体的差异和多重病原体感染。