柏子仁提取液对小鼠生发作用研究

于 阳 崔新刚 崔海洋 张兴超 孙雅欣

牡丹江医学院，黑龙江 牡丹江 157011

人类健康的标志是头发，但近几年脱发人群越来越多，而且越来越年轻化。病理性脱发是头皮正常，头发过度脱落，无其他特殊症状，病情长时间反复发作的现象[1]。脱发严重影响人外观形象，造成心理负担，甚至妨碍人群的正常社交、学习和工作，目前现代医学尚未探明发病原因，西医对脱发的治疗一般是刺激毛囊，免疫抑制剂和长期激素治疗，治疗药物依赖性强，停药或减量后复发几率高，且费用高昂，经济负担大[2]。

中医药治疗脱发由来已久，在《黄帝内经》《本草纲目》《神农本草经》等众多医书中都有记载。《黄帝内经》中有“发为血之余，肾其华在发”。中医认为头发的生长荣枯，主要与人的精血有关，精血与心肝肾关系密切，心主血脉，肝藏血，肾藏精，精为先天之本，可转化为血，发为血之余，精血充足，头发自然乌黑浓密，精血虚衰，头发也会日渐干枯脱落[3]。人的心情不畅，压力过大，精血失养也易导致脱发。《本草纲目》中记载柏子仁“养心气，润肾燥，安魂定魄，益智宁神；烧沥，泽头发”。柏子仁味甘而补，辛而能润，既养心肾，兼益脾肾。《神农本草经》也把柏子仁(柏实)列为上品。但中药在治疗脱发中多采用复方方剂，对于单一中药治疗脱发效果难以明确。本研究以脱发小鼠模型为研究对象，探讨柏子仁的生发作用，为中药临床使用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 基本特性 柏子仁是常用的中药材，为柏科植物侧柏的干燥成熟种仁，《神农本草经》列为上品，呈椭圆形或卵形，一般表面黄白色，也有淡黄棕色，长4～7 mm，直径1.5～3 mm[4-5]。外包膜质内种皮，有深褐色的小点，顶端略尖。质软，富油。味淡气微香,性平,归心、肾、大肠经。可养心安神，润肠通便，止汗。用于阴血不足，虚烦失眠，心悸怔忡，肠燥便秘，阴虚盗汗。

化学成分:柏子仁化学成分众多，含脂肪油约14%，含柏木醇、谷甾醇、双萜类、少量挥发油、维生素A、皂苷和蛋白质等。研究[6]表明柏子仁的多种药理作用都与化学成分密不可分,其在诸多方面都有较好的疗效，临床应用非常广泛。徐新刚等[7]采用气相色谱-质谱联用( GC-MS)方法对柏子仁油进行定性鉴定和定量分析，鉴定出了柏子仁油中的几种脂肪酸:其中饱和脂肪酸主要是2.62%硬脂酸，6.58%十六烷酸;不饱和脂肪酸占脂肪酸的87.51%，主要为54.17%亚麻酸，2.62%二十碳三烯酸，22.97%亚油酸，7.75%花生四烯酸。经测定柏子仁生品中总皂苷0.142%，柏子仁中含有的萜类化合物主要为二萜，并以半日花烷型二萜为主，不同产地柏子仁中多糖含量为 4.19%～7.01%。

1.2 实验动物及造模 选用昆明小鼠50只，体重在18～22 g，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。剂量组分别为：高剂量组、中剂量组、低剂量组、阳性对照组和阴性对照组。把每只小鼠背部毛发剪短，脱毛面积约2 cm×3 cm，再用脱毛剂(15%Na2S)涂于小鼠后背，约1～2 min 后，用温水清洗，反复1～2次，至小鼠后背光滑[8]。

1.3 实验药品及配置 柏子仁购于安国药源商贸有限公司，水为蒸馏水。柏子仁提取液制备：取柏子仁100 g加八倍水浸泡1 h后，加热煮沸2 h，过滤，将滤渣加7倍水，加热煮沸2 h过滤，合并二次滤液加热浓缩至0.860 g/mL，备用。取米诺地尔用纯水配置成0.15 mg/mL的溶液备用。

1.4 给药方法 将柏子仁提取液，分别稀释为0.860 g/mL，0.215 g/mL，0.053 g/mL的高、中、低3个剂量浓度。以蒸馏水为阴性对照组，以米诺地尔为阳性对照组，每组小鼠按0.4 mL/20 g剂量灌胃给药，每日1次，连续24 d。每6天对小鼠背部脱毛区毛发生长评价1次。并每天记录小鼠皮肤颜色变化(由粉变白时间，维持白色时间)，并在第24天脱颈处死小鼠，将背部脱毛区毛皮剪下，用14 mm打孔器于每鼠的脱毛区相同位置取一圆形皮片，把皮片上所有毛发用手术刀刮下，称重[9]。在每鼠脱毛区相同位置取最长毛发10根，用游标卡尺测量其长度，以10根毛的均长代表每只鼠的毛均长，并计算出各组小鼠毛发的均长值[10]。

2 结果

2.1 柏子仁提取液对小鼠脱毛区毛发生长作用的影响 第0天各剂量组评分均为0分，无差别，表明各组在实验过程的评分具有可比性。第6天除中剂量组外，其余各剂量组评分均为0分，表明中剂量组评分要优于其余各组。第12天时低剂量组和阴性对照组的评分仍为0分，远低于其他三组；高剂量组评分分别与阳性对照组和中剂量组比较均略低，差异均有统计学意义(P<0.05)；阳性对照组评分与中剂量组比较相似，差异无统计学意义(P>0.05)。第18天各剂量组评分相互比较均有差异，且差异均具有统计学意义；阴性对照组评分低于低剂量组，低于高剂量组，低于阳性对照组，低于中剂量组。第24天阴性对照组评分均低于其余各组，且差异具有统计学意义；阳性对照组评分与中剂量组比较相仿，差异无统计学意义(P>0.05)；且二者分别与低剂量组和高剂量组比较，差异均具有统计学意义(P<0.05)；高剂量组评分与低剂量组比较相似，差异无统计学意义(P>0.05)。详见表1。各剂量组评分随时间变化。如图1所示。

表1 柏子仁提取液对小鼠脱毛区毛发生长作用情况

图1 各剂量组脱毛区体毛生长评分与时间关系

评分标准：无毛生长为0分；浅毛长满脱毛区为1分；新生毛长度及密度约为未脱毛区的一半为2分；新生毛长与未脱毛区无差别为3分；出现不规则毛生长的小鼠按面积比率计算。

2.2 柏子仁提取液对小鼠脱毛区皮肤颜色变化的影响 各剂量组的皮肤由粉变白的时间比较：高剂量组与中剂量组比较相似，差异无统计学意义(P>0.05)；且均少于低剂量组、阴性对照组和阳性对照组，差异均具有统计学意义(P<0.05)；低剂量组、阴性对照组和阳性对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)，其分别是低剂量组时间少于阳性对照组，少于阴性对照组。各剂量组的皮肤维持白色时间比较均有差异，且差异均具有统计学意义(P<0.05)，其分别是阴性对照组时间少于阳性对照组，少于低剂量组，少于高剂量组，少于中剂量组。

表2 柏子仁提取液对小鼠脱毛区皮肤颜色变化的影响

2.3 柏子仁提取液对小鼠脱毛区再生体毛的毛长及重量影响 柏子仁提取液对小鼠脱毛区再生体毛照片对照图如图2所示。无论是毛长还是毛重在各剂量组的比较中：阴性对照组与低剂量组比较相似，差异均无统计学意义(P>0.05)；且二者均低于阳性对照组、高剂量组和中剂量组，差异均具有统计学意义(P<0.05)；阳性对照组、高剂量组和中剂量组相互比较相似，差异均无统计学意义(P>0.05)。详见表3。

图2 柏子仁提取液对小鼠脱毛区再生体毛照片对照图

表3 柏子仁提取液对小鼠脱毛区再生体毛的毛长及毛重影响

3 讨论

3.1 柏子仁提取液保留了柏子仁生发功效 柏子仁含有油脂、皂苷、氨基酸、萜类等多种化学成分，但经研究[11]表明认为柏子仁发挥主要作用的化学成分为皂苷，皂苷易溶于水，柏子仁中大约含有57.04%的油脂，其中只含有微量的挥发油，所以本实验使用的提取方法不会破坏柏子仁中的主要成分，最大程度的保留了柏子仁的生发功效。

3.2 柏子仁提取液对于脱发确有疗效 精血虚、肝肾不足、心神不宁是脱发形成的原因。“发为血之余”，肝藏血,肾藏精，精血虚,肝肾不足﹐心情不佳，压力过大导致心血失养，多种综合不利因素导致头发失去滋养而脱发[12]。从中医角度治疗脱发以养血活血，补益肝肾，养心安神常常有好的疗效。柏子仁味甘而补，辛而能润，既养心肾，兼益脾肾，柏子仁提取液具有滋补肝肾、乌须生发的功效﹐能滋补肝肾、养血生津、乌须生发。从而能加快毛发生长以达到治疗脱发的目的。

小鼠在整个实验过程中，高中低剂量组体重均增加，精神状态良好，全部存活，中剂量组小鼠脱毛区的生长评分、颜色改变、毛长及毛重与阴性对照组相比均增加，与阳性对照组相比均相似(参见表1、表2和表3结果)。说明柏子仁实验用量的安全性高，治疗脱发疗效确切，为明确柏子仁单一药物对脱发治疗的作用奠定了实验基础。

3.3 不同剂量柏子仁提取液生发效果存在差异 药理实验结果表明,不同浓度的柏子仁提取液对小鼠脱毛区毛发的再生情况具有明显的差异。低剂量组的小鼠脱毛区毛长和毛重、开始时的生长评分与阴性对照组相似，实验后期的生长评分及脱毛区颜色改变与阴性对照组比较略有差别；这些指标又同时明显差于阳性对照组。这说明柏子仁提取液确实有生发效果，但由于剂量较低而效果不明显，这与其他学者在相关研究较为相似[2]。

中剂量组的毛发生长评分、脱毛区颜色改变、毛长和毛重与阳性对照组比较相似或略好，同时又明显优于阴性对照组和低剂量组。尤其是毛发生长评分随时间变化表现得更为明显，参见图1。表明随着给药剂量不断增加，药物发生作用愈加明显，对于生发效果不同剂量差异体现的愈加显著，这也与王玉斐等[10]研究结果较为相似。

高剂量组的毛发生长评分、脱毛区颜色改变、毛长和毛重与阳性对照组比较相似或略有不同；但与中剂量组比较时，相似或略差；同时又优于阴性对照组和低剂量组。其首先表明与低剂量组和阴性对照组比较，随着给药剂量不断增加，药物发生作用明显，生发效果有所提升。其次表明与中剂量组比较时，随着给药剂量增加，生发效果并没有得到改善，高剂量使小鼠减慢毛发生长速度，延后进入毛发生长期，缩短生长周期，抑制毛发再生。体现出柏子仁提取液不但具有显著的生发效果，还具有一定毒性，即在一定条件下能够略抑制生发。中浓度都能有效促进小鼠体表毛囊的再生或增多﹐但高浓度剂量组小鼠再生毛发生长较对照组缓慢,说明高浓度会影响小鼠体表毛囊正常的生理功能，可能由于高浓度剂量对肝肾有毒性，而头发的生长荣枯，主要与人的精血有关，精血与心肝肾关系密切，所以高剂量组体现出中毒的抑制作用。因各个剂量组的生发效果，可参见图2。

综上，不同剂量的柏子仁提取液对于生发效果有着一定的差异：剂量过低，达不到生发的效果；而剂量过高又会产生一定的抑制作用，使得生发效果略有降低，这与王常明等[13]研究其他中药的生发结果相仿。因此，对于柏子仁在临床用药时，剂量要得到足够重视。