维生素D3对产蛋期种鹅蛋品质、血液生化指标及蛋壳超微结构的影响

邢 月，王宝维*，葛文华，凡文磊，孔 敏，张名爱，王焕森，刘晨龙，汪 超，王巧莉

（1.青岛农业大学优质水禽研究所，国家水禽产业技术体系营养与饲料研究室，山东青岛 266109；2.重庆市畜牧科学院，重庆 402460，3.青岛普兴生物科技有限公司，青岛 266113）

维生素D是种禽必需的脂溶性维生素之一，具有促进肠道钙磷吸收作用，进而影响蛋壳形成、骨骼钙化等。维生素D添加水平对蛋禽生产性能、血清钙磷水平、蛋壳品质等非常重要，过高和过低都会产生不良影响。田晓晓研究表明，添加维生素D可显著提高鹅血清钙、胫骨钙含量、胫骨强度。王宝维等研究表明，添加维生素D组1～4周龄青农灰鹅的血清钙含量较不添加组显著提高。高英卫发现，缺乏维生素D会直接影响蛋鸡钙吸收能力，使产蛋率下降、软壳和破壳蛋增多。康乐等研究表明，产蛋后期蛋鸡添加维生素D可提高蛋壳强度、蛋壳厚度。前期研究发现，维生素D对种鹅的生产繁殖、生殖激素水平都有显著影响。本试验以产蛋期五龙鹅为研究对象，进一步探究不同水平维生素D对种鹅蛋品质、血液生化指标及二者相关性、蛋壳超微结构的影响，以期确定种鹅饲粮中维生素D的适宜添加水平。

1 材料与方法

1.1 试验设计及饲粮 选择体况相近的34周龄五龙鹅种鹅180只，随机分为6组（0、100、200、300、400、500 IU/kg组），每组6个重复，每重复1只公鹅和4只母鹅。试验预试期1周，正试期10周。试验鹅由青岛农业大学优质水禽研究所育种基地提供，试验用维生素D（有效成分500 000 IU/g）为浙江博朗药业有限公司产品。试验用基础饲粮参照NRC（1994）家禽营养需要量中推荐的种鹅饲粮营养水平设计配方。种鹅的饲粮组成和营养成分见表1。

表1 基础饲粮组成及营养成分（风干基础）

1.2 饲养管理 试验种鹅采用开放式地面平养，全期自由采食和饮水。试验前对鹅舍进行充分冲洗和严格消毒，试验期内每周消毒2次。

1.3 蛋品质测定 试验结束前1周每天收集种蛋，各组每重复共收集10枚种蛋，每组60枚，共360枚，用于测定蛋重、蛋形指数、蛋壳颜色、蛋白高度、蛋黄颜色、蛋壳强度、蛋壳厚度、哈市单位、蛋黄比率等蛋品质指标。蛋品质指标测定与计算方法按照《家禽生产性能名词术语和度量统计方法》（NY/T823-2004）进行。

1.4 血清生化指标测定 饲养试验结束时，各组每重复抽取体重相近的鹅2只，每组12只，共72只，翅静脉采血10 mL，3 000 r/min离心制得血清样品，分装，-40℃冷冻保存。白蛋白和碱性磷酸酶活性含量采用比色法测定，总蛋白含量采用考马斯亮蓝法测定，钙含量采用甲基百里香酚蓝比色法测定，磷含量采用磷钼酸法测定。以上试剂盒均为南京建成生物工程研究所产品。

1.5 蛋壳超微结构的观察 蛋品质测定后蛋壳保留，用去离子水洗净，置于阴凉处自然风干。制备蛋壳样品，采用扫描电子显微镜[JEOL 7500F，JEOL（SEM）Oxford（EDS），日本电子株式会社]观察拍照。

1.6 统计分析 采用SPSS 22.0软件的单因素方差分析的Duncan′s多重比较和对比方法，分析饲粮不同维生素D添加水平的影响及各项指标间的差异及线性与二次的值。其中，＜0.05表示差异显著，＜0.01表示差异极显著。数据以均值和标准误差表示。采用SPSS 22.0软件的相关性分析中的双变量法，对繁殖性能和血清生殖激素进行相关性分析，＜0.05和＜0.01分别为相关性显著和极显著水平。

2 结果

2.1 维生素D水平对产蛋期种鹅血清生化指标的影响由表2可知，300、400 IU/kg组血清钙含量高于0 IU/kg组（＜0.05），0、500 IU/kg组血清磷含量低于200、300、400 IU/kg组（＜0.01）；400 IU/kg 维生素D组血清钙、磷含量均最高。饲粮中添加不同水平维生素D对总蛋白、白蛋白及碱性磷酸酶含量影响不显著。

表2 维生素D3水平对产蛋期种鹅血清生化指标的影响

2.2 维生素D水平对种蛋品质的影响 由表3可知，各组间蛋壳颜色、蛋白高度、蛋黄颜色、哈氏单位及蛋黄比率差异不显著。400、500 IU/kg组蛋重高于0、100 IU/kg组（＜0.05）；200、300、400 IU/kg组蛋形指数大于0、100 IU/kg组（＜0.01）；0 IU/kg组蛋壳强度低于其他各组（＜0.01）；0、100 IU/kg组蛋壳厚度低 于400和500 IU/kg组（＜0.01）、200和300 IU/kg组（＜0.05）。

表3 维生素D3水平对种蛋品质的影响

2.3 蛋品质与血清钙磷含量相关性分析 由表4可知，随饲粮维生素D添加水平的变化，蛋重、蛋壳强度与血清钙、磷含量显著正相关，蛋形指数、蛋壳厚度与血清钙、磷含量的相关性不显著。血清钙含量与蛋重、蛋壳强度显著正相关；血清磷含量与蛋壳强度显著正相关。

表4 维生素D3水平对产蛋期种鹅蛋品质与血清钙磷含量相关性的影响

2.4 维生素D水平对种蛋蛋壳超微结构的影响 如图1可见，蛋壳结构包括4层，由外至内分别为表面角质层、垂直晶体层、栅栏层及乳突层，内部为壳膜包裹的胚胎结构。如表5可知，0 IU/kg组垂直晶体层厚度低于其他各组（＜0.01）；300、400、500 IU/kg组乳突层厚度大于0和100 IU/kg组（＜0.01）、200 IU/kg组（＜0.05）；400、500 IU/kg组蛋壳总厚度大于0和100 IU/kg组（＜0.01）、200和300 IU/kg组（＜0.05）。结果表明，随饲粮维生素D添加水平增加，种鹅蛋壳的垂直晶体层和乳突层厚度显著增加，而表面角质层和栅栏层虽无显著性变化，但是蛋壳总厚度增加。

表5 维生素D3水平对产蛋期种鹅蛋壳各层结构厚度的影响

图1 各组蛋壳断面超微结构（150×）

3 讨 论

3.1 维生素D水平对产蛋期种鹅血液生化指标的影响在血液生化研究方面，王爽研究指出，在维生素D低于3 000 IU/kg时，随着维生素D水平的增加，生长前期北京鸭的血液钙含量呈明显上升趋势，磷含量逐渐下降，在250 IU/kg 维生素D水平时，碱性磷酸酶含量可以达到最高。解俊美研究表明，随维生素D添加水平的增加，蛋雏鸭血清总蛋白、白蛋白含量呈先增高后降低的趋势。田晓晓等研究指出，饲粮添加维生素D可显著提高血清钙含量，对磷、碱性磷酸酶含量无显著影响。结合本试验结果，维生素D水平对血清钙磷的吸收代谢存在一定影响，可能因环境、物种及生长发育等不同，其结果表现不同。

3.2 维生素D水平对鹅种蛋品质的影响 Kakhki等发现，饲粮添加25-羟基维生素D可使不同钙水平的蛋鸡保持蛋壳质量稳定。张继良等研究也指出，蛋鸡饲粮添加活性维生素D及锌、锰复合物可显著提高蛋壳质量。刘禹辰等研究表明，产蛋后期的蛋鸡补充含有维生素D的液态维生素，可促进钙的吸收，破壳率、砂壳蛋、软壳蛋减少，蛋壳品质得到改善。康乐等研究指出，与未添加维生素D组相比，添加维生素D组蛋壳重、蛋壳厚度和蛋壳强度都有显著增强。杨涛研究表明，随着维生素D水平的提高，蛋鸡软壳蛋、破蛋情况得到明显减弱。王爽等研究指出，产蛋初期蛋鸭饲粮添加维生素D并未对蛋壳质量产生影响，这与本研究结果不相符，可能与试验期短、机体钙磷储备及物种不同有关。Navickis等研究指出，饲粮中添加适量的维生素D可提高蛋壳钙含量和蛋壳厚度。刘旭研究指出，当维生素D添加水平为3 600 IU/kg时，乌骨鸡蛋哈氏单位和蛋黄比率较高。党晓鹏等研究指出，随着尼克粉蛋鸡饲粮中维生素D含量增加，蛋壳强度和蛋壳厚度有先增强后降低的趋势。产蛋期种鹅饲粮中维生素D水平与蛋鸡、蛋鸭饲粮维生素D水平是否存在较大差异，是否与采用开放式舍和密闭舍家禽接受阳光程度不同有关，还有待于进一步研究。

3.3 维生素D水平对产蛋期种鹅血清钙磷含量与种蛋品质相关性的影响 钙磷是蛋壳的主要组成成分。大量研究证明，机体所摄入、吸收和利用的钙量对蛋品质有重要影响，当钙含量不足时，蛋壳中钙沉积量减少，蛋品质下降。高喜良研究发现，低钙饲粮会降低鸡蛋品质。Navickis等研究发现，饲粮中添加适量维生素D可使蛋壳厚度增加，改善蛋品质。黄福标等的研究表明，饲粮适宜钙水平可改善蛋壳品质。本试验中，蛋品质与血清钙、磷含量呈正相关，与前人研究结果一致。

3.4 维生素D水平对产蛋期种鹅蛋壳超微结构的影响蛋壳是重要的保护结构，也是外界环境与蛋壳内部环境进行物质交流的重要屏障。研究维生素D添加量变化对蛋壳超微结构的影响，对于改善蛋壳品质具有重要意义。崔琳等研究表明，栅栏层决定蛋壳质量。也有人认为，乳突层是钙化开始部位，能够直接影响其他各层的形成，对蛋壳质量有决定意义。王佩伦研究表明，高强度鸡蛋壳中乳突层中乳突颗粒排列规则、连接紧密，乳突层对于形成蛋壳和蛋壳延展性等有重要作用。本试验结果表明，随饲粮维生素D添加水平的变化，产蛋期种鹅蛋壳扫描电镜下各层超微结构均有增厚，其中乳突层厚度变化最为显著。

3.5 产蛋期种鹅饲粮中维生素D的适宜添加量 本试验条件下，血清钙磷含量及蛋壳强度、蛋壳厚度存在显著的二次关系，为对维生素D添加量进行更加准确地探究，对其做二次曲线拟合。

对0～500 IU/kg组钙含量、磷含量、蛋壳强度、蛋壳厚度（Y）分别与维生素D添加水平（X）进行二次曲线拟合，建立回归方程：

（钙含量）=4.307+0.018-3.518E（=0.811，＜0.001）

（磷含量）=7.778+0.018-2.397E（=0.914，＜0.001）

（蛋壳强度）=4.745+0.003-3.700E（=0.696，＜0.001）

（蛋壳厚度）=0.461+0.000362-4.299E（=0.906，＜0.001）

由二次拟合曲线可得，维生素D添加水平在357.43 IU/kg时，血清钙含量可取得最大值；添加水平为375.47 IU/kg时，血清磷含量可取得最大值；维生素D添加水平在405.405 IU/kg时，蛋壳强度可取得最大值，但此时＜0.700，曲线拟合度低，故舍去；维生素D添加水平为421.03 IU/kg时，蛋壳厚度可取得最大值。综上，维生素D添加量为350～450 IU/kg时，种鹅可获得较好的蛋品质。

4 结 论

本试验结果表明，适宜维生素D水平可提高产蛋期种鹅血清钙、磷含量；蛋壳强度和蛋壳厚度随着维生素D添加量升高有增加趋势；血清钙磷含量与蛋重和蛋壳强度呈正相关；维生素D对种鹅蛋壳结构中的乳突层的影响最为显著，进而影响蛋壳质量。在开放式种鹅舍饲养条件下，饲粮中维生素D的建议添加水平为350～450 IU/kg。