圈养东北虎细小病毒感染的诊断与治疗

孙春玲，王一鸣，齐晓新，李颢哲，冯 磊，王 海，郭晶晶，隋京京，李华涛

(1. 青岛森林野生动物世界公园有限公司，山东 青岛 266500 ； 2. 青岛农业大学动物医学院，山东 青岛 266109)

东北虎(Pantheratigrisaltaica)是现存世界上最大的猫科动物之一，已被列入世界自然保护联盟(Intermation Unionfor Conservation of Nature, IUCN)濒危物种红色名录[1]。东北虎在维持健康自然的生态系统中占据不可替代的重要地位，近些年来，环境资源减少，疫源疾病盛行，使其数量不断下降，东北虎的保护性研究显得尤为重要[2-4]。

猫细小病毒(Feline parvovirus,FPV)又称猫泛白细胞减少症病毒、猫传染性肠炎病毒或猫瘟热病毒，该病毒引起的传染病临床表现多以突发高热、顽固性呕吐、腹泻、脱水、循环障碍及白细胞急剧减少为主要特征[5-6]。本病毒除感染家猫外，还能感染其他猫科动物(如虎、豹)、鼬科动物(貂)及浣熊科动物(小浣熊)，其感染范围广，致病性强，对野生动物的保护构成极大的威胁[7-8]。

2019年12月，本园出现1例东北虎感染猫细小病毒并急性死亡的病例，随后，相继发现多例东北虎感染猫细小病毒。介绍该病例的临床表现与诊治情况，以及其他东北虎感染猫细小病毒的治愈方法如下，以期为我国圈养东北虎疫病防控与诊疗提供参考。

1 发病情况

2019 年12月14日，本园1只9月龄东北虎突然出现精神沉郁、鼻镜干燥、食欲废绝、呕吐、腹泻等症状。患虎呕吐物初期为未消化完全的肉块，后期为黄绿色黏液；粪便初期为黄色黏液状，后期呈粉红色水样甚至血样，气味腥臭。患虎迅速消瘦、被毛凌乱、四肢末梢冰冷、趴卧不动，于发病后第4天死亡。2019年12月16日，同馆舍6只(30 m2)9～12月龄东北虎相继发病，虎群馆舍通风良好，日常饲养以鸡肉、牛肉为主，活跃度高，未进行免疫接种。患虎发病后均有食欲废绝、精神萎靡、呕吐、腹泻等症状，经诊断治疗后，患虎大群恢复正常，单只虎从发病到治愈最长不超过2周。

2 诊断

2.1 临床检查 最早发病的1只患虎高热不退，体温高达40 ℃，其余患虎随治疗进程出现反复发热现象。患虎出现口腔可视黏膜苍白，眼窝下陷，皮肤拉起回弹缓慢，腹式呼吸，心脏听诊有心内性杂音，肺部湿啰音明显，腹部触诊有痛感。

2.2 实验室检查

2.2.1 血液学检查 死亡东北虎发病第3 天进行了血常规、血生化和血气的检测。血常规检测采用迈瑞BC-2800检测，同时人工镜检复核。生化采用富士NX500iVC检测。血气采用雅培i-STAT1检测。结果显示，血常规检查中白细胞总数下降严重，淋巴细胞、中性粒细胞有不同程度下降，见表1。血生化检查中谷丙转氨酶、总胆红素升高；肌酐、尿素氮、无机磷升高，见表2。血气检查中低钠、低钾、低氯，见表3。其余病虎于发病第2天进行血常规、血生化检查，血常规检查中白细胞总数和淋巴细胞下降，血生化检查中谷丙转氨酶、总胆红素升高。

表1 死亡东北虎血常规指标检查结果Table 1 Results of blood routine indexes of dead Panthera tigrisaltaica

表2 死亡东北虎血生化指标检测结果Table 2 Results of blood biochemical indexes of Panthera tigrisaltaica

表3 死亡东北虎血气指标检测结果Table 3 Results of blood gas indexes of dead Panthera tigrisaltaica

2.2.2 胶体金快速诊断 使用韩国安捷猫泛白细胞减少症快速诊断试纸，从直肠采取患病东北虎粪便，加入配套稀释液中，混匀静置后吸取上清液加入试纸条加样孔中1～2滴，10 min后FPV检测结果显示，发病幼虎和病死幼虎均呈阳性。

2.2.3 病原PCR检测 参考文献[9]报道的引物序列和反应条件，对病死幼虎剖检肠内容物和发病幼虎粪便病料进行聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)扩增检测。结果显示，使用细小病毒通用引物扩增的t1、t2样本均在750 bp左右扩增出1条特异条带，与预期片段大小相符。使用猫细小病毒特异性引物的m2样本在750 bp左右扩增出1条非常微弱的条带，与预期片段大小相符。其他引物未扩增出特异条带。表明死亡幼虎和发病幼虎的肠道中含FPV核酸，见图1。对阳性PCR结果测序，序列与GenBank中的FPV序列进行比对分析。结果显示，该序列与GenBank中登陆的FPVK49VP2碱基序列相似度为99.86%。

图1 感染幼虎的PCR扩增结果Fig.1 PCR amplification results of infected cubsM：DL-2 000 DNA marker； m：猫细小病毒特异性引物； t：细小病毒通用引物； 1：发病幼虎粪便； 2：病死幼虎肠内容物M:DL-2 000 DNA marker; m:Cat parvovirus specific primers; t:Universal primers for parvovirus; 1:Feces of sick cubs; 2 Intestinal contents of dead cubs

2.2.4 特殊检查 采用X线检查方法对患病东北虎仰卧位、侧卧位的胸腹部进行检查，结果显示，患虎气道扩张(图2a)，支气管丛扩张，肺纹理增粗(图2b)，肺野透明度降低(图2c)；心包有少许积液、心脏前缘抬起(图2d)；胃肠道积气明显(图2e)。

图2 感染幼虎X线检查结果Fig.2 X-ray examination results of infected cubsA：胸腔； B：腹腔； a：气道扩张； b：肺纹理增粗； c：肺野透明度降低； d：心包积液； e：肠道积气A:Thoracic cavity; B:Enterocoelia; a:Expansion of tracheal tubes; b:Lung texture thickening; c:Decreased opacity of lung field; d:Pericardial effusion;e:Intestinal pneumatosis

3 病理剖检

3.1 组织器官剖检 患病东北虎于发病第4天死亡，死亡后第一时间进行尸体剖检，结果显示，该东北虎心包积液，心腔呈扩张状态，心肌增厚(图3a)，切面湿润，富含血液；肺脏大面积出血淤血、水肿(图3b)，质地稍变硬，切面湿润；肝脏肿大，边缘钝圆(图3c)，暗红色和土黄色相间；胃肠积气，胃、十二指肠、空肠、回肠、直肠均有不同程度出血(图3d)；肾脏肿大，被膜紧张，颜色呈土黄色，切开皮质髓质均有散在出血点(图3e)；脾脏体积增大，边缘钝圆，呈黑红色(图3f)。

图3 死亡东北虎组织器官剖检结果Fig.3 Results of pathological autopsy of dead Panthera tigrisaltaicaA：心脏； B：肺脏； C：肝脏； D：肠道； E：肾脏； F：脾脏； a：心肌增厚； b：出血淤血； c：肿大边缘钝圆； d：出血； e：散在出血点； f：体积增大A:Heart; B:Lung; C:Liver; D:Intestine; E:Kidney; F:Spleen; a:Thickening of the heart muscle; b:Bleeding and congestion; c:Margin of enlargement was obtuse and rounded; d:Bleeding; e:Diffuse bleeding; f:Volume increase

3.2 病理组织学检查 H.E.染色后显微镜下观察组织病理学变化，见心肌炎性细胞浸润(图4a)，肌束间隙增大(图4b)；肾小球萎缩(图4c)，肾小管结构紊乱，炎性细胞浸润(图4d)；脾脏充血淤血(图4e)；肺脏损伤严重，肺泡出血淤血(图4f)；部分肺泡破裂结构损伤，中性粒细胞大量浸润(图4g)；肝脏细胞间隙增宽，部分出现充血淤血(图4h、4k)；小肠黏膜绒毛结构紊乱，断裂脱落(图4m)。

图4 死亡东北虎病理组织切片结果(40×)Fig.4 Organ tissue section examination of dead Panthera tigrisaltaica(40×)A：心脏； B：肾脏； C：脾脏； D：肺脏； E：肝脏； F：小肠； a、d和g：炎性细胞浸润； b：肌束间隙增大； c：肾小球萎缩； e、f、h和k：出血淤血； m：肠绒毛脱落A:Heart; B:Kidney; C:Spleen; D:Lung; E:Liver; F:Small intestine; a,d and g:Inflammatory cell infiltration; b:Muscle bundle space was enlarged; c:Glomeruloatrophy; e,f,h and k:Bleeding and congestion; m:Shedding of intestinal villi

4 治疗

根据临床症状、剖检结果和实验室诊断确诊为群发性的东北虎猫细小病毒感染。制定综合治疗方案，采取抗病毒，增强机体免疫力，防止继发感染，强心补液，调节机体水盐代谢和酸碱平衡，对症治疗呕吐、腹泻和出血等胃肠道症状。治疗处方如下。

皮下注射重组猫干扰素ω，30×104IU/(kg·bw)，1次/d，连用3～5 d；肌内注射诺兰素(主要成分为黄芪甲苷)0.1 mL/(kg·bw)，1次/d，连用5～7 d。肌内注射诺威宁(硫酸头孢喹肟注射液)0.08 mL/(kg·bw)，1次/d；醋酸泼尼松龙，每只虎每日肌内注射30 mg，根据病程长短，适当调节用药天数。遇到高烧不退，感染严重的患虎，联合用药阿米卡星，10 mg/(kg·bw)肌内注射。呕吐腹泻严重的患虎，根据机体脱水程度，适当进行体液补充，一般补液量为50～80 mL/(kg·bw·d)。5%葡萄糖+三磷酸腺苷二钠[每只虎20 mg/(kg·bw·d)]+辅酶A(每只虎每日200单位)+肌苷注射液[400 mg/(kg·bw·d)]，补充能量，提高机体细胞代谢能力，辅助治疗白细胞减少症。根据生化、血气指标，进行钠离子、钾离子、钙离子、氯离子的补充调整，促使电解质平衡。若机体发生代谢性酸中毒，适量输入碳酸氢钠进行调节。患虎呕吐时，肌内注射止吐宁(复方格拉司琼注射液)，0.1 mL/(kg·bw)，1次/d。患虎腹泻便血时，肌内注射酚磺乙胺，每只虎400 mg/(kg·bw)，2次/d，止血；静脉滴注奥美拉唑钠，每只虎40 mg/(kg·bw·d)，1次/d，修复胃肠道黏膜；肌内注射钴胺素，每只虎1 mL/(kg·bw·d)，1次/d，预防及治疗贫血；灌服蒙脱石散收敛，同时使用布拉迪酵母菌调整胃肠道菌群。

第1只发病虎初期高烧，食欲废绝，渐进性出现呕吐块状物及黄色稀便症状，临床采用肌内注射退烧药和抗生素治疗，但治疗效果不明显。发病第3天对该虎进行血液学检查、胶体金及PCR诊断，确诊为猫细小病毒感染，于发病第4天救治无效死亡。与此同时，同馆舍多只东北虎发病，第一时间对其余虎进行临床及实验室检查，确诊为猫细小病毒感染后，以抗病毒，增强免疫，抗菌，防止继发感染为主，配合对症治疗，加强护理，最终其余患虎呕吐、腹泻等临床症状消失，饮食欲恢复，精神逐渐活跃，全部治愈。

5 护理

在治疗过程中，除了实时监测患虎体征及合理用药外，还应加强日常护理。首先，增加至每日2次消毒灭菌，幼虎舍用戊二醛喷洒地面及墙壁，配合火焰消毒灭菌。本次疾病发生在冬季，采用浴霸灯增加馆舍温度，铺木板、被褥用于隔离患虎与地面，综合提升保温措施。患虎食欲恢复前期，肉需剁碎混合鸡蛋饲喂，少食多餐，尽量减小其胃肠负担。

6 讨论

近些年，引起东北虎发病死亡的病毒性传染病逐年增多，其中，细小病毒作为引起东北虎发病死亡的重要病毒，已经严重威胁到东北虎这一濒危物种。FPV是细小病毒属中感染范围最广、致病性最强的一种病毒，由此病毒引起的猫泛白细胞减少症是一种急性、高度接触性传染病。邱薇等先后从虎体内分离获得多个FPV毒株[10]。靳小霞等收集2009—2011年共151只未经免疫FPV疫苗的虎进行FPV抗体检测，发现阳性率高达47.7%[11]，表明FPV在我国虎群中感染十分普遍。2005年9月—2006年3月，国内某虎林园大型圈养猫科动物首次暴发猫泛白细胞减少症，并导致部分东北虎的死亡，随后2年的相同季节里仍有此病发生，且感染虎的年龄越来越小，甚至己经从4日龄的幼虎体内分离出该病毒。因此，加大细小病毒引发的疫病防治的研究对东北虎繁育保护工作变得尤为重要。针对东北虎FPV的防治措施，主要观点还是围绕疫苗免疫保护方面。王海军等对2013—2014年在哈尔滨、长春及沈阳3家东北虎饲养繁育中心已经免疫的东北虎进行FPV血清学调查，FPV抗体检测阳性率均为100%，说明疫苗免疫效果较好[12]，但对已感染FPV发病的虎诊断与治疗方法鲜有报道。

通过猫瘟临床症状的初步诊断，进行了抗感染及对症治疗。第1只患虎治疗无效死亡。经过分析，幼虎死亡疑似虎源性FPV继发感染控制不良引起菌血症，加之其长时间未进食自限性消耗，最终引起多器官综合衰竭死亡。值得注意的是，本园后发的病例经过综合治疗均完全康复，由此可见，猫科动物感染细小病毒后，快速及时诊断对后期治疗有很重要的作用，能极大提高治愈率。猫瘟胶体金试纸卡是目前最快的检测方法，其灵敏度较高，容易出现假阳性，而PCR技术主要是针对病毒核酸进行检测，准确性和灵敏度都很高，有条件自检的建议通过自检确诊，需要送检测机构检测的可以在治疗的同时送检确诊。

值得注意的是，脱水作为猫瘟感染的主要症状之一，在治疗过程中要不断进行补液，以平衡和预防酸碱中毒。要及时使用抗生素，预防由于患虎抵抗力低下引起的继发感染，防止出现菌血症等严重后果。由于病毒入侵患虎消化系统及治疗期间应用的大剂量抗生素，导致患虎胃肠道有益菌群紊乱，需要服用调节肠道有益菌群的药品，并与抗生素间隔0.5 h以上分开服用。另外，干扰素ω能诱导细胞产生多种抗病毒蛋白，从而抑制病毒在体内复制[13]。黄芪甲苷能诱导机体产生干扰素，增强机体免疫机能，促进抗体形成，增强抗病能力[14]。

猫细小病毒感染作为一种危害严重的传染病，更需要饲养者做好防治措施。应加强饲养管理，平时做好预防性消毒工作，贯彻自繁自养。要拟定和定期执行预防接种和补种计划，并进行定期杀虫、灭鼠和粪便无害化处理。饲养管理过程中仔细观察幼虎的状况，发现异常尽快为其测量体温，及早发现以有利于治疗和恢复，并可以进行及时的隔离和消毒。