饲料中添加植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌对半滑舌鳎生长、存活率、免疫反应和抗氧化能力的影响

张传涛，赵炳然，孙祥山，黄经献，曹金凤

(中国水产科学研究院下营增殖实验站，山东 昌邑261300)

半滑舌鳎是我国特有的海水鱼养殖品种，野生群体主要分布在黄渤海域。半滑舌鳎具有很高的营养价值和经济价值，是我国沿海地区重要的养殖对象，目前已经实现工厂化养殖，前景广阔。随着工厂化养殖的不断发展，高密度养殖导致养殖环境恶化，病害频繁发生，严重制约了半滑舌鳎产业的发展。大量使用抗生素来预防和治疗半滑舌鳎疾病不仅导致养殖成本增加，而且还会导致环境污染和食品安全问题。合理有效地使用益生菌成为水产养殖绿色发展的重要保障。在水产养殖上，益生菌的使用可以通过向饲料或者养殖水体中进行添加。益生菌能够抑制鱼肠道中的有害微生物，调节水产动物体内的微生态平衡，从而起到防治疾病和增进健康的作用。植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌作为水产养殖最常用的两种益生菌，已经得到了广泛应用，并取得了很好的养殖效果。本文对饲料中添加植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌饲喂半滑舌鳎进行研究，对提高半滑舌鳎生长性能、存活率、免疫力和抗氧化能力有重要的意义。

益生菌作为天然无污染的新一代净水和防病产品，仍有很大的发展前景。益生菌可以最大限度地提升水产养殖产量和综合生产能力(韩卓然等，2016)。因此，在半滑舌鳎饲料中添加益生菌，能提高养殖经济效益。本试验是在半滑舌鳎基础饲料中添加益生菌，旨在探讨其对半滑舌鳎生长性能、存活率、免疫反应和抗氧化能力的影响，为益生菌在半滑舌鳎苗种生产中的推广应用提供依据。

本试验利用半滑舌鳎幼鱼为研究材料，在基础饲料中添加植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌来提高半滑舌鳎生长性能和健康状况。在工厂化养殖条件下进行了8周的饲养试验，研究了两种益生菌在生长参数、免疫指标和抗氧化能力等方面的作用。该研究为合理使用益生菌提供基础资料，有利于提高半滑舌鳎的质量和产量。

一、材料与方法

1.试验饲料准备

将植物乳杆菌(粉末，约5.0×107CFU/克)和枯草芽孢杆菌(粉末，约2.0×1011CFU/克)产品分别添加到基础日粮中。基础饲料主要成分为鱼粉、虾粉、鱼油、豆粕、淀粉、维生素混合物和矿物质混合物。然后通过商业化生产将所有原料制成不同大小的颗粒饲料。试验组饲料基础日粮中分别添加植物乳杆菌(1.0×1010CFU/克饲料)和枯草芽孢杆菌(1.0×108CFU/克饲料)，对照组饲喂基础日粮，不添加益生菌。饲料生产商提供的基础日粮干物质水平为：粗蛋白质≥45.0%，粗脂肪≥10.0%，粗纤维≤3.0%，粗灰分≤16.0%，钙≤4.0%，赖氨酸≥2.5%，总磷1.5%～3.0%。

2.试验动物与饲养管理

将2 160尾半滑舌鳎幼鱼(约4月龄)随机分为3组，每组720尾，放养在3个3米3玻璃钢水缸中(每缸240尾)。在养殖期间，水温控制在22～24℃，盐度为28～32，日换水率300%～400%，日投饵两次(08:00和18:00)，投食以喂饱为准，流水养殖，投喂1小时后清污。

3.生长性能和存活率

放养前，每组每缸随机捞取30尾鱼测量体重，作为初体重。在试验结束时停食24小时，每组每缸随机捞取30尾鱼分别测量体重，作为终末体重，并统计每个缸的存活鱼数量。

4.样本采集

在饲养试验结束时，每缸中随机选取3尾鱼，从尾静脉抽取约1毫升全血样本(n＝27)，然后用无菌离心管(1.5毫升)收集。血液样品在室温下凝集1小时，离心分离，在-80℃下保存备用。然后在无菌条件下立即将鱼解剖，取新鲜肝脏、胃和肠组织样本(n＝27)，在-80℃下保存备用。分析样本前，将样本解冻，称取1克组织并添加9克磷酸盐缓冲液进行匀浆，然后离心10分钟，仔细分离上清液以进行后续分析。

5.免疫指标和抗氧化能力测定

采用血清测定其中溶菌酶(LZM)、免疫球蛋白M(IgM)、补体蛋白3(C3)和补体蛋白4(C4)的含量；采用肝脏匀浆上清液测定其抗氧化能力指标，包括过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)的活力、总抗氧化物(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量。所有参数和指标使用鱼用ELISA试剂盒(南京建成生物技术有限公司)进行测定。

6.统计分析

统计分析前，采用Shapiro-Wilk检验和Leave检验分别分析各组间存活率(经过了平方根反正弦转化)和所有数据的正态性和方差的均匀性。采用单因素方差分析(ANOVA)确定各参数指标的显著性差异，其中显著性水平设为P＜0.05。采用SPSS 25软件进行统计学分析，结果表示为“平均值±标准误”。

二、结果

1.生长性能参数与存活率

各组的半滑舌鳎初始平均体重、终末平均体重和存活率见表1。由表1可见，饲料中添加植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌后，半滑舌鳎的末体重均显著高于对照组(P＜0.05)，并且饲料中添加枯草芽孢杆菌组的末体重显著高于植物乳杆菌组(P＜0.05)，说明植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌能够促进半滑舌鳎生长，并且枯草芽孢杆菌的效果更好。饲料中添加植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌后，半滑舌鳎的存活率均显著提高(P＜0.05)，植物乳杆菌组存活率最高，并且显著高于枯草芽孢杆菌组(P＜0.05)，说明饲料中添加植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌都能够提高半滑舌鳎的养殖成活率，植物乳杆菌的效果更明显。

表1 各组半滑舌鳎初始平均体重、终末平均体重和存活率

2.免疫学指标

血清中LZM的活力以及IgM、C3和C4的浓度见表2。整体上与对照组相比，饲料中添加植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌能够显著提高半滑舌鳎血清中LZM活力和IgM、C3和C4的浓度(P＜0.05)。其中添加植物乳杆菌的效果更明显，植物乳杆菌组的4种免疫指标除了C4浓度，其他3种免疫指标均显著高于枯草芽孢杆菌组(P＜0.05)。上述结果表明，饲料中添加植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌能够提高血清的免疫水平，植物乳杆菌的效果优于枯草芽孢杆菌。

表2 半滑舌鳎免疫指标

3.肝脏抗氧化能力

饲料中添加植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌后半滑舌鳎肝脏抗氧化指标见表3。与对照组相比，饲料中添加植物乳杆菌后，肝脏中SOD和CAT的活力显著升高(P＜0.05)，并且MDA的含量显著降低(P＜0.05)，但是T-AOC的活力只有略微升高(P＞0.05)；饲料中添加枯草芽孢杆菌后，肝脏中SOD、CAT和T-AOC的活力均显著升高(P＜0.05)，MDA的含量显著降低(P＜0.05)。植物乳杆菌组和枯草芽孢杆菌组相比，4种抗氧化指标上互有优势，枯草芽孢杆菌组的SOD和T-AOC活力显著高于植物乳杆菌组(P＜0.05)，植物乳杆菌组的CAT活力略高于枯草芽孢杆菌组(P＞0.05)，植物乳杆菌组肝脏中MDA含量略低于枯草芽孢杆菌组(P＞0.05)。结果表明，这两种益生菌对半滑舌鳎肝脏抗氧化能力具有很大的影响，整体上饲料中添加植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌后半滑舌鳎肝脏的抗氧化能力大大提高。

表3 半滑舌鳎肝脏抗氧化指标

三、小结与讨论

益生菌作为饲料添加剂在养殖鱼的疾病控制和促进生长方面具有很大的潜力，并且目前已经在水产养殖上得到了广泛应用。但是，在半滑舌鳎养殖方面，关于益生菌的报道很少。因此，为查明植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌对半滑舌鳎的影响，本文将这两种益生菌分别添加到饲料中，并对其生长性能、存活率、免疫指标和抗氧化指标进行监测。

在本试验中，饲料中分别添加植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌后，半滑舌鳎的生长性能和存活率显著提升。研究结果显示，植物乳杆菌在促进半滑舌鳎存活率方面更有优势，因为添加植物乳杆菌组的存活率显著高于添加枯草芽孢杆菌组，这一结论也可以从植物乳杆菌能够显著提高半滑舌鳎免疫指标方面得到印证，因为投喂植物乳杆菌组的多种免疫指标显著高于枯草芽孢杆菌组。而枯草芽孢杆菌在提高生长速度方面相比植物乳杆菌具有更大的优势，因为投喂枯草芽孢杆菌组的半滑舌鳎末体重显著高于植物乳杆菌组。这两种益生菌都能显著提高半滑舌鳎肝脏抗氧化能力。本文的研究结果表明，植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌能够显著提高半滑舌鳎的健康水平并促进其快速生长。

综上所述，饲料中分别添加植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌可以提高半滑舌鳎的生长性能和健康水平，这些有益作用主要归因于免疫指标和抗氧化能力的提高。在饲料中分别添加植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌可以提高半滑舌鳎的生长性能、抗病力(高存活率)、血清免疫指标和肝脏抗氧化能力。因此，在半滑舌鳎养殖中，建议将植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌复合使用。