紫外分光光度法测定依折麦布片含量的效果分析

陈良宇，和顺芳，沈报春，张 伟

（1 昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室 云南 昆明 650500）

（2 云南龙津康佑生物医药有限公司 云南 昆明 650503）

（3 昆明龙津药业股份有限公司 云南 昆明 650503）

依折麦布片是由美国默克（Merck）公司和先灵葆雅（Schering-Plough）公司共同研制的选择性抑制胆固醇吸收的药物[1]，是第1 个被FDA 批准上市的胆固醇吸收抑制剂[2]。其机制主要是选择性地抑制人体内小肠黏膜上传输蛋白NPC1L1 的活性，有效减少肠内胆固醇的吸收，降低血浆中胆固醇水平和肝脏内胆固醇的储存量[3]。此药在临床上用于治疗原发性高胆固醇血症，家族性纯合子高胆固醇血症（HoFH），纯合子谷甾醇血症[4]，混合性高脂血症和冠心病等。《美国药典》第41 版[5]中依折麦布片的含量测定均采用高效液相色谱法，该方法专属性强，准确度高，但使用高效液相色谱法检测时操作繁琐，耗费时间长，成本高。因此本文将尝试采用紫外分光光度法对依折麦布片的含量进行测定，以期开发出一种准确、快速、经济的检测方法。

1.仪器与试药试剂

Evolution 350 紫外可见分光光度计（美国Thermofisher Scientific 公司），UV-2700 紫外可见分光光度计（日本岛津公司），Ultimate 3000 高效液相色谱仪（美国Thermofisher Scientific 公司），Secura225D-1CN 半微量电子天平（德国赛多利斯公司），SK8300GT 超声波清洗机（上海科导超声仪器有限公司）。

依折麦布对照品（USP 标准品，批号R075K0）；依折麦布片（云南龙津康佑生物医药有限公司提供，规格10 mg，批号20201118、01210303、01210304）；乙腈（色谱纯，安徽时联特种溶剂股份有限公司，批号6308BW07）；冰醋酸（分析纯，四川西陇科技股份有限公司，批号20201127）；水是实验室的自制纯化水。聚四氟乙稀微孔滤膜（天津圣信唯科技有限公司提供）。

2.方法和结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液 精密称取依折麦布的对照品适量，用稀释剂（乙腈﹕水﹕冰醋酸=60﹕40﹕0.1）溶解，制成浓度为20 μg/mL 的溶液。

2.1.2 供试品溶液 取依折麦布片10 片，置500 mL量瓶中，加稀释剂适量，超声30 min，稀释剂定容至刻度，摇匀，过滤；精密量取续滤液5 mL，置50 mL 量瓶中，稀释剂定容至刻度，摇匀即得。

2.1.3 测定方法 照紫外-可见分光光度法（《中国药典》2020 年版四部通则0401[6]）在选定的测定波长处依次测定空白溶剂、空白辅料溶液、对照品溶液及供试品溶液。

2.2 专属性

取依折麦布片（批号：20201118）5 片，于50 mL 量瓶中分别进行酸、碱、氧化、高温和光照强制破坏。另按处方比例制备空白辅料溶液[7]，取空白溶剂及上述溶液在190～400 nm范围内进行紫外光谱扫描，从图1来看，在248 nm 波长处，空白溶剂和空白辅料不影响主要成分检测；酸、碱、氧化、高温和光照强制破坏后，样品在248 nm 波长处无吸收干扰，因此本试验选择248 nm 作为依折麦布片的检测波长。

图1 依折麦布检测波长的选择

2.3 线性关系考察

以浓度为20 μg/mL 的对照品溶液作为100%浓度的线性溶液，分别配制25%、50%、75%、100%、125% 和150%浓度的线性溶液，照紫外-可见分光光度法（《中国药典》2020 年版四部通则0401[6]）测定其吸光度，得到吸光度与浓度的回归方程为：A=0.0384C+0.0049，其中r=0.9999（n=6）见图2。结果表明依折麦布在浓度范围为5～30 μg/mL 内的线性关系良好。

图2 依折麦布片含量测定标准曲线图

2.4 稳定性试验

按“2.1.2”项配制1 份供试品溶液，室温放置，分别在0、1、2、4、8 h 测定吸光度，实验结果表明，吸光度RSD为0.64%，供试品溶液中主成分在室温下8 h内稳定。

2.5 精密度试验

2.5.1 重复性 取同一批次的样品（批号：2001118）6 份，每份10 片进行精密称量，根据“2.1.2”项配置供试品溶液，测定吸光度并计算含量，实验结果表明，依折麦布的平均含量（n=6）为101.05%，RSD 为0.52%，表明该方法的重复性良好。

2.5.2 中间精密度 按“2.1.2”项重复配制6 份供试品溶液，在不同时间使用不同仪器测定吸光度，实验结果表明，依折麦布的平均含量（n=6）101.02%，RSD为0.26%。重复性试验与中间精密度共12 份数据的平均含量（n=12）为101.03%，RSD 为0.35%，表明该方法的精密度能达到含量分析要求。

2.6 回收率试验

精密称定依折麦布对照品适量，制备成1 mg/mL 的对照品储备液。分别精密量取对照品储备液1.6、2.0、2.4 mL 置100 mL 量瓶中，各加入空白辅料约18 mg，制备成80%、100%、120%的回收率溶液，每个浓度平行制备3 份，分别测定各溶液的吸光度并计算回收率及RSD，平均回收率101.06%，RSD 为0.33%。结果表明，该方法具有良好的回收率，见表1。

表1 回收率试验结果

2.7 样品测定

取3 批依折麦布片，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，每批制备3 份，测定吸收度并计算含量，另参照《美国药典》第41 版[5]中依折麦布片含量测定方法按高效液相色谱法（《中国药典》2020 年版0512[8]）测定相同3 批依折麦布片的含量。结果表明，各批含量之间没有显著差异。此外，本法测定含量与HPLC 法结果无显著差异，具有可靠性，见表2。

表2 3 批依折麦布片中依折麦布含量测定结果（%）

3.讨论

本文建立紫外分光光度法测定依折麦布片含量的方法。根据扫描光谱可知依折麦布最大吸收波长在232 nm处，但空白辅料在该波长处有少量干扰，故选择248 nm作为检测波长；而浓度为20 μg/mL 的溶液在248 nm 波长处的吸光度在0.7 左右，符合朗伯-比尔定律的适用范围；本方法检测快速，成本低，可较好满足仿制药集采经济性的要求。

本文根据依折麦布具有强紫外吸收的特性，采取紫外分光光度法测定依折麦布片的含量，从线性关系、准确度试验、精密度试验、稳定性试验及样品测定中得到试验结果可知，该方法准确、快速、经济，可以作为制剂质量控制的快速检测方法来使用。