高效液相色谱法快速鉴别三七粉品质

陈 博，毛希琴

（大连市食品检验检测院，辽宁 大连 116630）

三七，又名田七、金不换，具有止血散瘀、消肿定痛等功效。根据资料记载，三七常加工成粉末后服用[1]。当三七被加工成粉末则失去了原有的性状特点，易被掺伪、造假，伪劣难辨。据相关资料报道，三七粉的质量由三七种植时间、个头大小等因素决定，种植时间越长、个头越大的三七价格越高。因此，在利益驱使下，部分不良商家会在优质的三七粉中掺入种植时间短、个头较小的三七粉末，甚至掺入三七叶或三七杆来以次充好，这些掺假或伪劣三七粉单靠感官检验很难分辨，目前常见的鉴别方法有薄层色谱法、高效液相色谱法等[2,3]。

研究发现，三七的化学成分包括三七皂苷、人参皂苷、黄酮、多糖类等，其中皂苷类成分是三七的主要药理活性成分。三七中公认的活性皂苷类成分主要为人参皂苷Rg1、Rb1、Re、Rd和三七皂苷R1

[3]。若三七粉中活性皂苷类成分含量越高，则该三七粉的品质越好。利用高效液相色谱法可对三七粉中主要活性皂苷类成分进行定量分析，因此可用来鉴别三七粉的品质[4-8]。考虑到标物的成本以及缩短分离时间，本研究仅以三七皂苷R1和人参皂苷Re、Rg1、Rb14个化合物作为三七粉品质判定的指标。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Agilent 1260 Infinity II 型高效液相色谱仪；XW-80A型旋涡混合器（上海精科实业有限公司）；SK8300GT型超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；CR22GⅡ型离心机（Hitachi Koki Co.,Ltd）。

1.2 材料与试剂

实验过程所需的三七样品来源见表1。

表1 三七样品来源

三七皂苷R1对照品（批号11745-200415）、人参皂苷Rg1对照品（批号110703-200424）、人参皂苷Re对照品（批号110754-200421）、人参皂苷Rb1对照品（批号110704-200420），均购自中国药品生物制品检定所。

甲醇、乙腈、乙酸乙酯均为色谱纯试剂，水为纯化水。

1.3 样品处理

将5号样品洗净，干燥，粉碎，过150目筛。其余样品均过150目筛后使用。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:依利特SinoChrom ODS-BP（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相:以乙腈为流动相A，水为流动相B，按表2的梯度洗脱程序洗脱；流速:1.0 ml/min；检测波长:220 nm；柱温:30℃；进样量:20 μl。

表2 流动相梯度洗脱程序

2.2 对照品溶液的制备

分别精确称取三七皂苷R1和人参皂苷Rg1、Re、Rb1对照品各2.5 mg于5 ml容量瓶中，用甲醇溶解定容，得三七皂苷R1和人参皂苷Rg1、Re、Rb1浓度分别为0.5 mg/ml的混合对照品储备液。

2.3 样品溶液的制备

分别称取5种三七粉各0.4 g于具塞离心管中，每个样品按表3所示的提取溶剂从溶剂1→溶剂3依次提取，涡旋混匀，超声提取10 min，再涡旋混匀，离心，过0.45 μm微孔滤膜，即得样品溶液1-1、2-1、3-1、4-1、5-1（溶剂1提取）；1-2、2-2、3-2、4-2、5-2（溶剂2提取）；1-3、2-3、3-3、4-3、5-3（溶剂3提取）。

表3 样品溶液的提取溶剂

2.4 线性关系考察

精密吸取2 μl、5 μl、10 μl、15 μl、20 μl、25 μl混合对照品储备液分别注入高效液相色谱仪中，按2.1的色谱条件进行测定，记录各色谱峰峰面积，再以混合对照品溶液的进样量(μl)为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，计算得出线性回归方程，如表4所示。用高效液相色谱仪在2.1的色谱条件下对混合对照品储备液进行分析，可见人参皂苷Re和人参皂苷Rg1合并出峰，而三七皂苷R1和人参皂苷Rb1均能达到较好的基线分离。实验结果表明:各成分线性关系良好（表4）。

表4 混合对照品储备液线性回归方程

3 结论与讨论

为了对不同三七粉中不同极性化合物的含量进行充分比较，对所有样品采取3种极性不同的溶剂体系（表3）按顺序提取（样品用1号溶剂提取后，残渣用2号溶剂继续提取，最后用3号溶剂提取经2号溶剂提取后的残渣），再对最终的提取液进行液相色谱分析，得到的色谱分离谱图如图1、图2和图3所示。

图1 不同三七样品在50%甲醇溶液提取条件下的分离谱图

图2 不同三七样品在100%甲醇溶液提取条件下的分离谱图

图3 不同三七样品在甲醇-乙酸乙酯（1+2）混合溶液提取条件下的分离谱图

在本研究的色谱条件下，三七皂苷R1和人参皂苷Rb1均能达到较好的基线分离，但人参皂苷Re和人参皂苷Rg1合并出峰[8-11]。表明人参皂苷Re和人参皂苷Rb1是2个较难分离的化合物，将2个化合物基线分离需要较长的时间。因本论文只是快速鉴别方法，为了节约分析时间，仅对人参皂苷Re和人参皂苷Rg1进行合并计算，这并不影响对产品品质的判断。5号样品通过形状可判断为正品三七，因而可以将该样品的粉末作为优质品进行对照，比较其他4个不同来源三七粉的质量。

从3种不同极性提取液的提取条件下5个样品的色谱分离谱图来看，100%甲醇条件下皂苷类化合物已经基本提取完全，甲醇-乙酸乙酯（1+2）混合溶液中仅有少量的人参皂苷Rb1，三七皂苷R1、人参皂苷Re+Rg1已经基本没有。因此，如果以4种活性皂苷类成分作为三七粉质量鉴别的指标，用100%甲醇作为提取溶剂即可。

比较不同极性提取液的提取条件下5个样品的色谱分离谱图，可以看出，1号、2号、3号样品与5号样品相比，3号样品4种活性皂苷类成分的含量最高，说明质量最优。1号、2号样品的品质也不错。但是4号样品中几乎没有活性皂苷类成分，基本可以判定为伪品。

实验证明，可以用100%甲醇作为提取条件提取三七粉，并通过高效液相色谱法对提取液中三七皂苷R1和人参皂苷Re、Rg1、Rb14个化合物定量分析的结果作为三七粉品质判定的指标。