溃疡性结肠炎患者血清CDX2 mRNA、miR-22水平变化及其与病情活动程度的关系

董秀红，殷禄昌，于玉环，魏蒙萌，刘勇莲，张鸿

1 潍坊医学院附属医院消化内科，山东潍坊261000；2 山东第一医科大学附属省立医院健康管理中心

溃疡性结肠炎（UC）是一种慢性非特异性肠道炎症性疾病，病变部位主要涉及直肠、结肠黏膜和黏膜下层，常表现为腹泻、腹痛、脓血便，可伴随其他全身症状，具体病因尚不明确［1］。UC 多为活动期与缓解期交替，易反复发作，严重影响患者身心健康。Mayo 评分虽能较好地评价UC 患者的病情严重程度，但在实际临床应用中仍有部分患者的病情与Mayo 评分并不相符。因此，临床亟需寻找能有效评估UC 患者病情的辅助指标。尾型同源盒转录因子2（CDX2）是一种肠道特异性核转录因子，与肠黏膜的发育和功能维持密切相关，其在结直肠癌组织中的表达明显下调，并与结直肠癌患者预后不良有关［2-3］。微小RNA（miRNAs）是一种内源性非编码的小 RNA 分子，通过与目标基因 mRNA 的 3′-非翻译区特异性结合，在转录水平上抑制其表达，参与人类多种疾病的发生发展［4-5］。研究显示，miR-22 可参与调节肠道屏障完整性和肠道通透性，通过介导炎症反应参与 UC 的发生发展［6］。但是目前 CDX2、miR-22 与UC 患者病情程度的关系尚不明了，为了进一步探讨CDX2、miR-22 与UC 患者病情活动程度的关系，我们进行了如下研究。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取 2017 年 1 月—2019 年 1 月潍坊医学院附属医院收治的UC 患者102例（观察组），均符合中华医学会消化病学分会炎症性肠病学组制定《中国炎症性肠病组织病理诊断共识意见》［7］中的UC 诊断标准。排除标准：①合并恶性肿瘤；②合并心肝肾等重要脏器功能障碍；③合并听力、意识、认知功能障碍等不能配合完成本研究者；④妊娠期、哺乳期女性；⑤合并肠梗阻、穿孔等结肠扩张；⑥合并感染性疾病或血液系统疾病。观察组男59例、女43例，年龄（45.16±6.74）岁，BM（I21.87±2.49）kg/m2，病变范围：直肠炎及乙状结肠炎56 例、左半结肠炎27 例、全结肠炎19 例；根据Mayo 评分分为活动期（Mayo 评分＞2 分）60 例、缓解期 42 例（Mayo 评分为0～2 分），活动期患者中轻度活动17 例（Mayo 评分3～5分）、中度活动23例（Mayo评分6～10分）、重度活动20 例（Mayo 评分11～12 分）。选择同期体检健康志愿者60 例（对照组），男37 例、女23 例，年龄（45.07 ± 5.14）岁，BMI（21.35 ± 2.84）kg/m2。两组性别、年龄、BMI 均具有可比性（P均＞0.05）。本研究通过医院伦理委员会审核，患者均签署知情同意书。

1.2 血清CDX2 mRNA、miR-22 检测方法 采用实时荧光定量PCR 法。观察组入院次日晨起抽取空腹静脉血5 mL、对照组于体检当天清晨抽取空腹静脉血 5 mL；EDTA 抗凝，2 000 r/min 离心 15 min，分离上清液于干净EP 管中，-70 ℃保存待测。采用TRIzol 试剂提取血清总RNA，检测总RNA 浓度和纯度，OD260/OD280为1.8～2.2 提示纯度较好。利用逆转录试剂盒以RNA 为模板，将其反转录为cDNA，采用PCR 扩增试剂盒进行扩增。PCR 反应体系及反应条件均参照试剂盒说明书。CDX2 mRNA 以GAPDH 为内参，miR-22 以 U6 为内参基因，引物序列由上海生工生物工程股份有限公司合成。CDX2 mRNA 上 游 引 物 5′-CGCCGCAGAACTTCGTCAG-3′，下游引物5′-CGTAGCCATTCCAGTCCTCCC-3′；GAPDH 上 游 引 物 5′-GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT，下游引物 5′-GGCTGTTGTCATACT-TCTCATGG-3′；miR-22 上游引物 5′-AAGCTGCCAGTTGAAGAACTGTA-3′，下 游 引 物 5′-AGTTGCTAAGATATGCGACAC-3′；U6 上 游 引 物 5′-CCCTCCAGAGAGCGTTATGTGA-3′，下游引物5′-GTTTCTGAAAATTACAGGGTCATTTGTG-3′。采用 2－ΔΔCt法计算CDX2 mRNA、miR-22水平。

1.3 统计学方法 采用SPSS25.0 统计软件。计量资料以表示，多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用独立样本t检验或LSD-t检验。活动期UC 患者血清CDX2 mRNA 与miR-22 水平的关系采用Pearson 相关分析法。采用多因素Logistic回归分析UC 患者病情活动的影响因素。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清CDX2 mRNA、miR-22 水平比较 观察组活动期、缓解期患者血清CDX2 mRNA 水平均低于对照组，血清miR-22 水平均高于对照组，活动期患者变化更明显（P均＜0.05）。见表1。

表1 两组血清CDX2 mRNA、miR-22水平比较（）

表1 两组血清CDX2 mRNA、miR-22水平比较（）

注：与对照组比较，*P＜0.05；与观察组缓解期患者比较，#P＜0.05。

5.26±0.82*#2.16±0.47*1.04±0.12组别观察组活动期缓解期对照组n CDX2 mRNA miR-22 60 42 60 0.47±0.08*#0.82±0.24*1.07±0.13

2.2 不同临床活动度的活动期UC 患者血清CDX2 mRNA、miR-22 水平比较 轻度、中度、重度活动的活动期UC 患者血清CDX2 mRNA 水平依次下降，血清miR-22水平依次升高（P均＜0.05）。见表2。

表2 不同临床活动度的活动期UC患者血清CDX2 mRNA、miR-22水平比较（）

表2 不同临床活动度的活动期UC患者血清CDX2 mRNA、miR-22水平比较（）

注：与轻度患者比较，*P＜0.05；与中度患者比较，#P＜0.05。

临床活动度轻度中度重度n 17 23 20 CDX2 mRNA 0.63±0.17 0.49±0.13*0.31±0.08*#miR-22 3.19±0.45 5.12±0.87*7.42±1.24*#

2.3 活动期UC患者血清CDX2 mRNA与miR-22水平的关系 活动期UC 患者血清CDX2 mRNA 与miR-22水平呈负相关关系（r=-0.537，P＜0.01）。

2.4 血清 CDX2 mRNA、miR-22 水平与 UC 患者病情活动程度的关系 缓解期UC 患者男23 例、女19例，年龄（44.92 ± 6.41）岁，BMI（21.69 ± 2.17）kg/m2，吸烟14 例（28.57%），病变位置在直肠及乙状结肠23 例（41.07%）、左半结肠12 例（44.44%）、全结肠 7 例（36.84%）；活动期UC 患者男36 例、女24 例，年龄（45.43 ± 6.80）岁，BMI（22.07 ± 2.51）kg/m2，吸烟35 例（71.43%），病变位置在直肠及乙状结肠33 例（58.93%）、左半结肠15 例（55.56%）、全结肠12 例（63.16%）；活动期UC 患者吸烟比例高于缓解期UC 患者（P＜0.05），两者其他指标比较均无统计学差异（P均＞0.05）。血清 CDX2 mRNA 水平降低（OR=1.463，95%CI：1.020～2.098）、miR-22 水平升高（OR=1.527，95%CI：1.088～2.143）是影响UC患者病情活动的独立危险因素。见表3。

表3 影响UC患者病情活动的多因素Logistic回归分析结果

3 讨论

UC的病因及发病机制目前尚无明确定论，大约7%的UC 患者在疾病发作30 年后会进展为结肠癌［8］。因此，寻找有效评估UC 病情进展的血清学指标对早期改善患者预后具有重要意义。CDX2 在肠上皮细胞的增殖和分化中发挥重要作用。研究表明，CDX2 在肿瘤性肠上皮细胞中的表达具有相对较高的灵敏度和特异度，可用作肠源性肿瘤的免疫组织化学标志物［9］。CDX2 可参与调节上皮细胞的极性作用，其表达缺失被认为与上皮—间质转化有关，在临床病理学中可作为肠道分化的生物标志物［10］。肠黏膜蛋白是肠道质膜和上皮质肌动蛋白细胞骨架的重要连接物，可维持肠道屏障完整性，CDX2 表达降低与E-钙黏蛋白缺失及紧密连接完整性丧失有关［11］。本研究结果显示，活动期UC 患者血清CDX2 mRNA 水平低于缓解期UC 患者，且均明显低于健康对照人群；且随着活动期UC 患者病情活动程度的增加，患者血清CDX2 mRNA 水平呈明显下降趋势；表明血清CDX2 mRNA 水平可反映UC患者的病情活动程度，其水平异常降低与患者病情进展有关。

miR-22 是 17p13.3 染色体的 C17orf91 基因外显子，其作为肿瘤标志物提示多种癌症的发生，如肺癌、结直肠癌等［12-13］。PEI 等［14］研究发现，在炎症性肠病患者肠黏膜组织的CD4+细胞中miR-22 表达显著升高，过表达的miR-22 及Th17 细胞特异性转录因子（RORC）参与了炎症细胞因子的表达升高，可能通过靶向HDAC4 促进Th17 细胞分化，从而参与炎症性肠病进展。本研究结果显示，活动期UC 患者血清miR-22 水平高于缓解期，且均明显高于健康对照人群；且随着活动期UC 患者临床活动程度的增加，患者血清miR-22 水平呈明显升高趋势；表明血清CDX2 mRNA 水平可反映UC 患者的病情严重程度，其水平异常升高与患者病情进展有关。另有研究发现，过表达miR-22 可抑制结肠癌肿瘤细胞增殖、迁移及上皮—间质转化作用，E-钙黏蛋白表达升高，可发挥抑癌基因作用［15］。该研究结果与本研究结果趋势相反，推测可能与肿瘤异质性有关，可能miR-22 在炎症性肠病到癌变的过程中发挥了不同作用，其具体作用机制有待深入研究。

本研究多因素Logistic 回归分析结果显示，血清CDX2 mRNA 水平降低、miR-22 水平升高均是影响UC 患者病情活动的独立危险因素，可能是提示UC患者病情重度活动的潜在指标。miRDB 数据库预测网站发现，CDX2 与miR-22 存在靶向关系。本研究相关性分析结果显示，活动期UC 患者血清CDX2 mRNA、miR-22水平之间呈负相关关系，提示miR-22可能通过靶向调控CDX2 在UC 患者的病情进展中发挥作用，但仍需进一步研究验证。

综上所述，随着临床活动程度的增加，UC 患者血清CDX2 mRNA 水平逐渐降低，miR-22 水平逐渐升高，二者是导致UC 患者病情活动的危险因素，可为临床判断UC 患者病情活动程度提供有效的生物学指标。