HPLC测定碗托中脱氢乙酸含量的方法优化

王攀峰，薛晓伟，路亚静

（1.山西省检验检测中心(山西省标准计量技术研究院），山西太原 030032； 2.山西省科技资源与大型仪器开放共享中心，山西太原 030006)

民以食为天，食品安全问题一直备受关注，尤其是防腐剂的超标使用。脱氢乙酸及其钠盐，作为常用食品防腐剂代表，被广泛应用于各类食品中。它在食物中的起效成分为脱氢乙酸DHA，别名“脱氢醋酸”，常温为晶型粉末且难溶于水，故常以钠盐形态流通和使用[1]。但是，近年来脱氢乙酸的安全性受到了质疑，因为它可以很快地被人体吸收，然后迅速地分散在血液中，存在于各种器官中，并且抑制氧化酶，过量会危害人体健康[2]。在GB 2760—2014[3]中也对各类食品中的脱氢乙酸的添加量作了明确规定，以淀粉制品为例，脱氢乙酸及其钠盐作为食品添加剂使用时，其最大使用量以脱氢乙酸计，为1 000 mg/kg。

1 碗托中脱氢乙酸的使用现状

味道鲜美、滑润凉爽的碗托受到人们的最爱，它作为具有地方特色的即食类风味食品，在山西省具有广泛的消费群体。特别是在夏季，销售凉皮、碗托的摊点遍布街头巷尾。目前市场对于此类产品的供应以小作坊、小加工点为主，这类企业在预防微生物污染和产品储运条件上很难满足规定的要求，为了延长产品保质期，部分厂家采取了在产品中添加脱氢乙酸的方式。它的毒性很低，同时可以抑制多种细菌的繁衍，防腐效果是苯甲酸钠的2～10倍。为了提高防腐效果，很多业者存在超限量使用和盲目使用的情况。为此，检测碗托中脱氢乙酸的含量尤为重要。

检测脱氢乙酸含量的方法有紫外分光光度法、气相色谱法、高效液相色谱法及离子色谱法[4]。国标GB 5009.121—2016[5]中测定淀粉制品中脱氢乙酸含量的方法是气相色谱法，此方法过程复杂，实际用时重复性差，测量结果不准确，所以行业内常常采用高效液相色谱法[6]。国标法对淀粉制品的前处理复杂，且有拖尾现象，分离度不好，影响了检测的准确性和时效性。针对碗托的制作方法，本文对前处理过程和色谱条件进行了优化，并作了方法学验证。经过优化后的检测方法，能快速地检测出碗托中脱氢乙酸的含量，以便在食品安全监管中广泛应用。

2 材料与方法

2.1 仪器与试剂

热电U3000 高效液相色谱仪（DAD检测器）；梅特勒XS204 电子天平；梅特勒-托利多MS105DU 电子天平；HC-3018高速离心机；FLUKO均质器；KQ-500DE超声波清洗器；IKA®MS3漩涡混合器；脱氢乙酸（曼哈格，纯度100.0%），甲醇（色谱级，迪马）、乙酸铵（优级纯）；纯化水。检测器：DAD检测器；波长：293 nm；色谱柱：热电C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流速：1 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：10 μL

2.2 实验方法

称取均质后的样品2 g（精确至0.001 g）于50 mL的塑料离心管内，加入20 mL提取液（甲醇∶水=1∶1），混匀，超声提取25 min，然后以4 000 r/min离心5 min，收集上清液并用水定容到25 mL，过0.45 μm滤膜过滤后供高效液相色谱仪测定。

3 结果与分析

3.1 流动相比例

结果表明，流动相中甲醇的比例影响脱氢乙酸与杂峰的分离系数及色谱峰的拖尾程度，甲醇比例越低，分离效果越好，且能改善拖尾现象，但出峰时问相应地延长，以甲醇∶0.02 mol/L乙酸铵（5∶95）为流动相效果 最佳色谱图见图1。

图1 色谱图

3.2 线性考察

精确称取10.08 mg脱氢乙酸标准品于10 mL容量瓶中，用1 mL氢氧化钠（20 g/L）溶解，用水定容，得浓度为 1.008 mg/mL脱氢乙酸标准储备液，此液体在4 ℃冰箱中保存，有效期3个月。配制标曲溶液，过0.45 μm滤膜，进行液相色谱分析，记录色谱峰面积，并绘制标准工作曲线得线性方程y=0.535x-0.023（r=0.999 9）。

3.3 检出限确定

称取样品加入浓度为10.08 μg/mL的标液0.4 mL，按2.2方法处理上机测试，色谱峰高度大于3倍噪音，故碗托样品中脱氢乙酸检出限为0.002 g/kg。

3.4 精密度试验

称取样品中回收试验一份，连续测定6次，记录峰面积，计算RSD值为0.45%详见表1。

表1 精密度结果

3.5 回收率试验

称取碗托样品9份，第1、2、3份加入脱氢乙酸标准工作液（1.008 μg/mL）1 mL，第4、5、6份加入脱氢乙酸标准储备液（1.008 mg/mL）0.50 mL，第7、8、9份加入脱氢乙酸标准储备液（1.008 mg/mL）1.0 mL。回收率符合国家标准《实验室质量控制规范食品理化检验》（GB/T 27404—2008）附录F要求，具体见表2。

表2 回收率测定结果

3.6 碗托样品实际检测结果分析

分别从生活周边的流动性摊贩、有固定门面的餐馆和大型商超采购各类碗托各10批，并用此方法做了检测。发现流动性摊贩所售的碗托中脱氢乙酸超标使用的情况非常严重，不合格率超60%；其次是有固定门面的餐馆自制的碗托，不合格率为20%；大型商超采购的10批样品中脱氢乙酸的含量均符合规定。

4 结论

本试验根据碗托的制作方法，对前处理过程和色谱条件进行了优化，并进行方法学验证，均满足相关要求，有利于日常检验工作的开展，为后续各类食品中的脱氢乙酸检测方法的改进提供了新的思路。