组蛋白甲基转移酶hSETD1A在直肠癌组织中的表达及对患者预后的判断价值

王高翔 应家祺 李秀庚

直肠癌是当前临床上常见的1种胃肠道恶性肿瘤，患者早期多数并没有明显的临床症状，但是随着病情的发展，患者会出现便秘、排血便、腹泻以及腹痛等症状，晚期患者可出现体重下降和严重贫血等，死亡率较高[1-2]。当前手术治疗为直肠癌患者根治的唯一途径。虽然当前直肠癌的诊断与治疗发展迅速，而且根治术与化疗方案也在不断更新，但是直肠癌患者的长期生存情况依然比较差，所以对直肠癌患者的病情诊断与预后判断指标具有重要临床价值。相关研究表明[3]，组蛋白甲基转移酶是一种甲级转移酶活性的酶，生物学功能广泛，而且在不同的细胞中发挥着生殖细胞发育、肿瘤演化、信号传递、染色质重塑、翻译调控、干细胞分化以及转录调控等多种生物学功能。因此本文选取我院2016年3月到2019年3月共收治的60例直肠癌患者作为研究对象，分析组蛋白甲基转移酶hSETD1A在直肠癌组织中的表达水平及对患者预后判断价值。具体报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取我院2016年3月到2019年3月收治的60例直肠癌患者作为研究对象，所有患者未接受过抗癌治疗和术前放化疗，在患者知情同意的情况下收取手术标本，包含淋巴结转移组织、配对癌旁正常组织及直肠癌组织。为了保证组蛋白甲基转移酶hSETD1A的原始状态表达，所有患者未在术前接受过化疗与相关肿瘤治疗。纳入标准：均知情并签署同意书；麻醉风险评分≥4分；无周围组织广泛浸润；经过病理学和影像学检查确诊为结直肠癌。排除标准：存在精神障碍的患者；免疫功能和凝血功能障碍的患者；出现严重腹腔黏连、严重感染和远端转移的患者；既往有过腹腔部位手术史的患者。结直肠癌患者中男性34例，女性26例；年龄62～78岁，平均年龄(66.13±4.32)岁。

1.2 试验方法

免疫组织化学原理，免疫组织化学主要是应用抗体特异性与抗原结合原理，利用化学反应标记抗体显色剂显色之后确定组织细胞之内的抗原，并对其进行定量、定性和定位研究。将所有标本置于3.7%的重型甲醛溶液中进行固定，随后常规脱水处理，石蜡包埋组织块进行连续切片，切成3 μm厚，并将石蜡切片与温水之上展平，随后将切片转移到处理过之后的玻璃片上，并在室温下稍微进行干燥，放入70 ℃恒温烤箱之中，进行60 min烘烤。免疫组织化学应用瑞士罗氏公司的全自动免疫组织化学分析仪，并依照实验步骤的说明书对标本进行免疫组织化学检测。应用的兔抗人SETD1A抗体(货号PA5-54254，工作浓度1∶200)购自美国Thermo Fisher Scientific公司，用已知阳性组织作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3 判定标准

组蛋白甲基转移酶hSETD1A主要在细胞核中表达，通过染色后，阳性标记为棕黄色颗粒或者黄色。依照切片之中阳性肿瘤细胞占所有肿瘤细胞百分比进行判定，其中阳性肿瘤占比>50%是3分，26%～50%是2分，1%～25%是1分，无肿瘤细胞阳性是0分。依照阳性强度进行评分标准为：强阳性3分，中等强度阳性2分，微弱阳性1分。阳性强度评分×阳性百分比评分=最后总评分。其中总评分为6～9分属强阳性，2～4分属中-弱阳性，0～1分属阴性[4]。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 组蛋白甲基转移酶hSETD1A在不同组织中的表达分析

与正常组织相比组蛋白甲基转移酶hSETD1A mRNA在肿瘤组织与转移组织之中表达高于正常组织(P<0.05)；结直肠肿瘤Ⅰ～Ⅱ期患者组蛋白甲基转移酶hSETD1A表达量明显低于结直肠肿瘤Ⅲ～Ⅳ期患者(P<0.05)，如图1所示。

图1 组蛋白甲基转移酶hSETD1A在不同组织中的表达分析

2.2 60例直肠癌患者的临床病理学特征

通过对60例直肠癌患者的临床病理学特征观察发现，hSETD1A阳性组与hSETD1A阴性组患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、TNM阶段、T分期对比无明显差异(P>0.05)，hSETD1A阳性组与hSETD1A阴性组患者性别和肿瘤分化对比差异显著(P<0.05)，见表1。

表1 60例直肠癌患者的临床病理学特征/例

2.3 组蛋白甲基转移酶hSETD1A与患者临床病理相关性分析

Spearman相关分析结果显示：患者性别、肿瘤分化与组蛋白甲基转移酶hSETD1A水平表达呈正相关(P<0.05)，如表2所示。

表2 组蛋白甲基转移酶hSETD1A与患者临床病理特征的相关性分析

2.4 影响直肠癌患者预后情况的多因素分析

多因素回归分析显示，后续治疗、淋巴结转移、T分期与组蛋白甲基转移酶hSETD1A可作为直肠癌患者预后独立因素(P<0.05)，如表3所示。

表3 影响直肠癌患者预后情况的多因素分析

3 讨论

hSETD1A属于组蛋白甲基转移酶TrxG家族成员，它的甲基化位点在组蛋白H3第4位赖氨酸(H3K4)，而且H3K4的三甲基化(H3K4me3)是基因转录活跃的重要标志[5-7]。因此本文针对于组蛋白甲基转移酶的研究主要对hSETD1A进行分析。SALZ等研究发现[8]，组蛋白甲基转移酶hSETD1A可以利用和β-catenin相互作用招募到Wnt信号通路靶基因的启动因子上，并对直肠癌细胞生物学行为进行调控。相关实体肿瘤研究中表明[9-10]，和癌旁组织相比较来说，乳腺癌、肠癌肿瘤组织中hSETD1A mRNA表达较高，并且其与乳腺癌患者的预后呈明显相关性。

本研究结果表明，和正常组织相比组蛋白甲基转移酶hSETD1A mRNA在肿瘤组织与转移组织之中表达高于正常组织(P<0.05)，结直肠肿瘤Ⅰ～Ⅱ期患者组蛋白甲基转移酶hSETD1A表达量明显低于结直肠肿瘤Ⅲ～Ⅳ期患者(P<0.05)，由此证明，直肠肿瘤组织中hSETD1A mRNA表达明显高于正常组织。相关研究表明[11]，在患者癌症不同阶段，无论是局部还是全身，患者的H3K4me3表达水平会出现明显变化，在一定程度上可以作为疾病复发预警。另由研究表明[12]，H3K4me3与hSETD1A两者的mRNA表达在很多肠癌细胞中明显增加，而且证实了组蛋白H3K4me3主要是hSETD1A作用的结果，与本研究结果相符；通过对60例直肠癌患者的临床病理学特征观察发现，hSETD1A阳性组与hSETD1A阴性组患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、TNM阶段、T分期对比无明显差异(P>0.05)，hSETD1A阳性组与hSETD1A阴性组患者的性别和分化水平对比差异显著(P<0.05)；Spearman相关分析结果显示：患者的性别、分化水平与组蛋白甲基转移酶hSETD1A水平表达正相关(P<0.05)由此证明，不同性别和不同分化水平的直肠癌患者中hSETD1A表达出现明显差异。相关研究表明[13-14]，不同性别的直肠癌患者的发生了次和死亡率均存在差异，且中国男性直肠癌的放了从明显高于女性患者。这种差异情况我们用技术来进行解释。SLATTERY等研究表明[15]，雌激素可能会对抗直肠癌之中微卫星不稳定型保护因子，与本研究结果相符，而且本研究还观察到hSETD1A与分化程度相关，由于数据量较小，其结果还有待更多的研究验证；多因素回归分析显示，后续治疗、淋巴结转移、T分期与组蛋白甲基转移酶hSETD1A可作为直肠癌患者预后独立因素(P<0.05)，由此证明，可应用淋巴结转移、T分期与组蛋白甲基转移酶hSETD1A对患者的预后情况进行判断。综上所述，组蛋白甲基转移酶在肿瘤组织表达中高于正常组织，而且能够作为判断直肠癌患者预后情况的独立因素。