白毛七乙酸乙酯萃取部位的化学成分研究

刘 霞，李 静，李蕴哲，刘 倩，李路军，刘孜翰

(1.西安交通大学药学院，西安 710061；2.药物高通量筛选技术国家地方联合工程研究中心，武汉 430062；3.甘肃百草中药材种植有限公司，兰州 730102)

金粟兰科(Chloranthaceae)金粟兰属(Chloranthus)植物有17种，分布于亚洲的温带和热带，中国有13种和5变种，其多种种类在民间作为药用植物，主治跌打损伤和风湿关节疼痛等症[1-3]。白毛七为金粟兰科金粟兰属多穗金粟兰(ChloranthusmultistachysPei.)的干燥根及根茎，又名四块瓦、四大天王、四叶七，是重要的陕西民间七药之一，具有祛风散寒、理气活血、散瘀解毒等功效，民间主治跌打损伤、腰腿痛等症。现代药理研究表明，白毛七提取物具有抑菌、抗炎、抗肿瘤等活性[4-6]。文献报道[7-8]，白毛七的化学成分多为倍半萜、二萜类化合物。为了进一步研究白毛七的药效物质基础，本实验对白毛七的化学成分进行研究，从其乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位分离鉴定出8个化合物，其中化合物2～8为首次从该植物中分离得到。

1 仪器与试药

1.1仪器 Bruker Avance Ⅲ HD 600 MHz型核磁共振波谱仪(瑞士Bruker公司)；半制备型HPLC色谱仪(美国Waters公司)；EYELAN-1100型旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)；ZF-C型三用紫外分析仪(上海康禾光电仪器有限公司)。

1.2试药 白毛七药材，采自陕西省柞水县，植物标本由西安交通大学牛晓峰教授鉴定为ChloranthusmultistachysPei.，存放于西安交通大学药学院(标本证号20120623)；薄层色谱硅胶(GF254)和柱色谱硅胶(200～300目)，均购自青岛海洋化工厂；Sephadex LH-20(美国GE Healthcare公司)；氘代氯仿(CDCl3)、氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，均购自杭州欧尔柏维科技有限公司；石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、丙酮和正丁醇，均购自天津科密欧化学试剂有限公司。

2 方法与结果

2.1提取与分离 称取阴干粉碎的白毛七药材6.5 kg，用乙醇冷浸7 d，提取3次，提取液减压浓缩得到总浸膏1.2 kg，将总浸膏悬浮于水中，依次用石油醚(60～90 ℃)、乙酸乙酯和正丁醇萃取，减压浓缩并回收溶剂后得到石油醚部分120 g，乙酸乙酯部分150 g，正丁醇部分90 g。

取乙酸乙酯萃取部位经硅胶柱色谱(200～300目，1 500 g)分离，以石油醚-乙酸乙酯(40∶1、20∶1、15∶1、10∶1、5∶1、3∶1、1∶1)梯度洗脱，等份接样，薄层检测，合并相同流份，得到7个组分(Fr.A～Fr.G)。Fr.B部分经Sephadex LH-20柱色谱、反相 HPLC法制备纯化得到化合物1(23 mg)和化合物3(33 mg)。Fr.C部分经硅胶柱色谱分离，依次用二氯甲烷-丙酮(20∶1)、石油醚-丙酮(15∶1)洗脱，得到化合物2(4 mg)和化合物8(11 mg)。Fr.E部分经Sephadex LH-20柱色谱分离，得到Fr.E1和Fr.E2 2个部分，Fr.E1经反复硅胶柱色谱分离，得到化合物4(9 mg)和化合物5(4 mg)；Fr.E2经硅胶柱色谱分离，石油醚-丙酮(15∶1)洗脱，得到化合物6(14 mg)。Fr.F部分经硅胶柱色谱分离、反相HPLC法制备纯化得到化合物7(65 mg)。

2.2结构鉴定 化合物1淡黄色粉末状固体，分子式为C18H18O5。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δH：7.86(1H，d，J=15.6 Hz，H-α)，7.82(1H，d，J=15.6 Hz，H-β)，7.58(2H，dd，J=1.6，8.4 Hz，H-2，6)，6.94(2H，dd，J=1.6，8.4 Hz，H-3，5)，6.13(1H，d，J=2.4 Hz，H-3′)，6.98(1H，d，J=2.4 Hz，H-5′)，3.94，3.87，3.86(3OCH3，4，4′，6′-OCH3)。13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δC：192.7(C，C=O)，125.2(C-α)，142.6(C-β)，128.4(C-1)，130.2(C-2)，114.5(C-3)，161.5 (C-4)，114.5(C-5)，130.2(C-6)，106.5(C-1′)，162.5(C-2′)，93.9 (C-3′)，168.5(C-4′)，91.4(C-5′)，168.1(C-6′)，56.0，55.7，55.5(3OCH3，4，4′，6′-OCH3)。以上数据与文献[9]报道一致，故鉴定化合物1为2′-羟基-4，4′，6′-三甲氧基查尔酮。

化合物2橙黄色粉末状固体，分子式为C19H20O6。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δH：7.79(1H，d，J=15.6 Hz，H-α)，7.77(1H，d，J=15.6 Hz，H-β)，7.57(2H，d，J=8.4 Hz，H-2，6)，6.93(2H，d，J=8.4 Hz，H-3，5)，6.02(1H，s，H-5′)，14.04(1H，s，2′-OH)，3.85(3H，s，4-OCH3)，3.86(3H，s，3′-OCH3)，3.96(6H，s，4′，6′-OCH3)。13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δC：193.2(C，C=O)，125.0(C-α)，142.8(C-β)，128.2(C-1)，130.9(C-2)，114.4(C-3)，161.4(C-4)，114.4(C-5)，130.2(C-6)，106.9(C-1′)，158.2(C-2′)，130.9(C-3′)，158.5(C-4′)，87.0(C-5′)，159.4(C-6′)，55.4，56.0，56.1，60.8(4OCH3，4，3′，4′，6′-OCH3)。以上数据与文献[10]报道一致，故鉴定化合物2为2′-羟基-4，3′，4′，6′-四甲氧基查尔酮。

化合物3白色针状结晶，分子式为C16H14O4。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δH：3.80(3H，s，7-OCH3)，7.38～7.40(5H，m，H-2′，3′，4′，5′，6′)，6.08(1H，d，J=2.4 Hz，H-6)，6.05(1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，5.40(1H，dd，J=2.8，12.8 Hz，H-2)，3.08(1H，dd，J=12.8，17.2 Hz，H-3a)，2.81(1H，dd，J=2.8，17.2 Hz，H-3b)，12.02(1H，s，5-OH)。13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δC：79.3(C-2)，43.5(C-3)，195.9(C-4)，164.3(C-5)，94.4(C-6)，168.1(C-7)，95.2(C-8)，162.9(C-9)，103.3(C-10)，138.5(C-1′)，129.0(C-3′，4′，5′)，126.3(C-2′，6′)，55.8(7-OCH3)。以上数据与文献[11]报道一致，故鉴定化合物3为球松素。

化合物4白色针状结晶，分子式为C28H44O3。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δH：3.97(1H，m，H-3)，6.50(1H，d，J=8.4 Hz，H-6)，6.24(1H，d，J=8.4 Hz，H-7)，5.21(1H，dd，J=15.2，7.2 Hz，H-22)，5.13(1H，dd，J=15.2，8.4 Hz，H-23)，0.81(3H，s，H-18)，0.88(3H，s，H-19)，0.92(3H，d，J=7.2 Hz，H-21)，0.80(3H，d，J=6.8 Hz，H-26)，0.82(3H，d，J=6.8 Hz，H-27)，1.01(3H，d，J=6.0 Hz，H-28)。13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δC：34.7(C-1)，30.1(C-2)，66.5(C-3)，37.0(C-4)，82.2(C-5)，135.4(C-6)，130.8(C-7)，79.4(C-8)，51.1(C-9)，36.9 (C-10)，23.4(C-11)，39.3(C-12)，44.6(C-13)，51.7(C-14)，20.6 (C-15)，28.7(C-16)，56.2 (C-17)，12.9(C-18)，18.2(C-19)，39.8(C-20)，20.9(C-21)，135.2(C-22)，132.3(C-23)，42.8(C-24)，33.1(C-25)，19.6(C-26)，20.0(C-27)，17.6(C-28)。以上数据与文献[12]报道基本一致，故鉴定化合物4为5α，8α-环二氧-(22E，24R)麦角甾-6，22-二烯-3β-醇。

化合物5白色针状结晶，分子式为C29H48O2。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δH：0.68(3H，s，H-18)，1.00(3H，s，H-19)，0.93(3H，d，J=6.6 Hz，H-21)，0.84(3H，d，J=6.6 Hz，H-26)，0.82(3H，d，J=6.6 Hz，H-27)，0.85(3H，m，H-29)。13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δC：38.1(C-1)，39.4(C-2)，209.2(C-3)，37.0(C-4)，57.5(C-5)，211.3(C-6)，46.5(C-7)，37.4(C-8)，53.5(C-9)，41.3 (C-10)，21.7(C-11)，38.0(C-12)，43.0(C-13)，56.0(C-14)，24.0 (C-15)，28.1(C-16)，56.6 (C-17)，12.6 (C-18)，12.0(C-19)，36.1(C-20)，18.7(C-21)，33.8(C-22)，26.0(C-23)，45.8(C-24)，29.1(C-25)，19.8(C-26)，19.0(C-27)，23.1(C-28)，12.0(C-29)。以上数据与文献[13]报道基本一致，故鉴定化合物5为5α-豆甾烷-3，6-二酮。

化合物6白色粉末，分子式为C20H20O6。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δH：6.89(1H，s，H-2)，6.85(1H，s，H-3)，6.82(1H，m，H-6)，6.79(1H，s，H-2′)，6.80(1H，s，H-5′)，6.81(1H，s，H-6′)，4.73(2H，d，J=4.4 Hz，H-7，7′)，3.08(2H，m，H-8，8′)，3.87(4H，m，H-9，9′)，3.91(3H，s，3′-OCH3)，5.95(2H，s，-OCH2O-)。13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δC：132.9(C-1)，108.2(C-2)，146.7(C-3)，145.2(C-4)，114.2(C-5)，119.0(C-6)，85.9(C-7)，54.2(C-8)，71.7(C-9)，135.1(C-1′)，106.5(C-2′)，148.0(C-3′)，147.1(C-4′)，108.6(C-5′)，119.4(C-6′)，85.9(C-7′)，54.3(C-8′)，71.6(C-9′)，56.0(3′-OCH3)，101.1(-OCH2O)。以上数据与文献[14]报道一致，故鉴定化合物6为xanthoxyol。

化合物7白色粉末，分子式为C26H32O11。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δH：7.04(1H，d，J=7.8 Hz，H-5)，6.96(1H，s，H-2)，6.89(1H，s，H-2′)，6.85(1H，d，J=7.8 Hz，H-6)，6.75(1H，d，J=7.2 Hz，H-6′)，6.72(1H，d，J=7.2 Hz，H-5′)，4.88(1H，d，J=6.6 Hz，H-1″)，4.66(1H，d，J=3.6 Hz，H-7)，4.61(1H，d，J=3.6 Hz，H-7′)，4.13(2H，dd，J=3.6，7.2 Hz，H-9a，9′a)，3.76(6H，s，3，3′-OCH3)，3.73(2H，m，H-9b，9′b)，3.04(2H，m，H-8，8′)，8.90(1H，s，4′-OH)。13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δC：135.1(C-1)，110.3(C-2)，148.9(C-3)，145.8(C-4)，115.0(C-5)，118.1(C-6)，84.8(C-7)，53.6(C-8)，70.8(C-9)，132.1(C-1′)，110.3(C-2′)，147.4(C-3′)，145.7(C-4′)，115.0(C-5′)，118.5(C-6′)，85.0(C-7′)，53.4(C-8′)，70.9(C-9′)，100.0(C-1″)，73.1(C-2″)，76.7(C-3″)，69.6(C-4″)，76.9(C-5″)，60.6(C-6″)，55.6(3-OCH3)，55.5(3′-OCH3)。以上数据与文献[15]报道一致，故鉴定化合物7为(+)-松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物8淡黄色油状物，分子式为C19H24O3。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δH：7.34(2H，d，J=8.4 Hz，H-2，H-6)，6.78(2H，d，J=8.4 Hz，H-3，H-5)，7.55(1H，d，J=15.6 Hz，H-7)，6.26(1H，d，J=15.6 Hz，H-8)，4.94(1H，m，H-2′)，0.98(1H，m，H-3′a)，2.34(1H，m，H-3′b)，1.60(1H，m，H-4′)，1.72(1H，m，H-5′a)，1.28(1H，m，H-5′b)，1.20(1H，m，H-6′a)，1.98(1H，m，H-6′b)，0.80(3H，s，H-10′)，0.86(3H，s，H-8′)，0.83(3H，s，H-9′)。13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δC：126.2(C-1)，128.9(C-2，6)，114.9(C-3，C-5)，156.8(C-4)，143.2(C-7)，115.0(C-8)，47.9(C-1′)，79.1(C-2′)，35.8(C-3′)，43.9(C-4′)，26.2(C-5′)，27.0(C-6′)，46.8(C-7′)，17.9(C-8′)，17.9(C-9′)，12.5(C-10′)。以上数据与文献[16]报道一致，故鉴定化合物8为望春玉兰素C。

3 讨论

民间药是我国宝贵的文明成果，是人民群众在长期与疾病斗争中积累的医药财富，应当继承和发扬[17]。陕西七药是我国民间药的重要组成部分，在陕西大部分地区广为流传，主治多种疾病，疗效显著，具有重要的研究价值[18]。本实验对陕西七药之一白毛七乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位进行了化学成分研究，分离得到8个化合物，包括3个黄酮：2′-羟基-4，4′，6′-三甲氧基查尔酮(1)、2′-羟基-4，3′，4′，6′-四甲氧基查尔酮(2)和球松素(3)；2个甾体：5α，8α-环二氧-(22E，24R)麦角甾-6，22-二烯-3β-醇(4)和5α-豆甾烷-3，6-二酮(5)；2个木质素：xanthoxyol(6)和(+)-松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)；1个莰烷型单萜：望春玉兰素C(8)。其中，化合物2～8为首次从该植物中分离得到。本研究进一步发现了白毛七化学成分的多样性，可为陕西七药的深入开发利用提供参考。