一例鸭混合感染的细菌分离鉴定与药敏分析

盖小君 柴世庆 李玉杰 张栋 邢林林*

（1，山东省烟台市动物疫病预防与控制中心 264000；2，山东省动物疫病预防与控制中心 250010）

肺炎克雷伯氏菌为革兰氏阴性短粗杆菌，有荚膜，无芽孢，兼性厌氧菌，主要寄生于动物和人的呼吸道、肠道及水和谷物等处，为条件致病菌，发病无季节性，常呈地方性流行，亦有散发，主要病变有肺炎及其他器官化脓性病[1]，肺炎克雷伯菌是一种重要的肠杆菌科，可引起多种疾病，并且抗生素耐药性日益严峻。大肠杆菌为革兰氏阴性无芽孢的直杆菌，两端钝圆，主要寄生在人和动物的肠道内，鸭大肠杆菌病是一种急性败血性传染病，各日龄的鸭均易感染，以2～6 周龄雏鸭群多发。葡萄球菌是革兰氏阳性菌，不形成芽孢和荚膜，呈葡萄串状排列，该菌在自然环境中广泛存在，多种动物及人均易感，鸭和鹅一般是由于璞或趾被划破而感染，急性病例主要症状是跗、胫和趾关节发生炎性肿胀，也常见结膜炎和腹泻。

1 材料与方法

1.1 试验材料

荧光定量PCR 仪、禽流感病毒荧光定量PCR 试剂盒、革兰氏染色液、梅里埃生化及药敏仪。

1.2 临床症状

2020 年3 月6 日接到潍坊某肉鸭养殖场样品，品种为樱桃谷肉鸭，发病初期个别鸭子瘸腿，厌食，饮水量增加，眼角有分泌物，病程2～3d 死亡。使用阿莫西林、磺胺嘧啶钠+黄芪多糖混合饮水后效果不明显。继而大群采食量下降，咳嗽，甩脖，肿头现象明显增多，拉稀。死亡数量增加，300 只/d，发病10d。该养殖场养殖方式为网上饲养，养殖规模30000 只。

1.3 剖检病变

肝周炎、腹膜炎、气囊炎,肝脏轻微肿胀，胆囊充盈，小肠黏膜脱落，内包有大量黏液，肠壁变薄，盲肠扁桃体肿胀，直肠末端弥漫性出血。喉头充血，并有黏液。气管环出血，肺脏水肿，气囊浑浊。心肌肥大，心包积液少量增多。病毒检测选取病鸭的肝脏、淋巴结、脾脏、气管等样品送至分子生物学实验室进行检测，通过核酸提取仪提取核酸，根据检测试剂盒的具体操作步骤，对于提取的核酸进行荧光PCR 检测。

1.4 细菌分离鉴定及药敏分析

在无菌环境下，用接种环蘸取病料于培养皿中划线培养，挑出培养出的菌落进行革兰氏染色，使用显微镜观察细菌形态。挑取单菌落，在琼脂培养基上进行纯化培养，用棉棒挑取纯化后的单菌落制备0.5～0.63Mc 浓度的菌悬液，根据仪器操作指南，将菌悬液、鉴定卡片和药敏卡片分别做好标记，装载上机，5～18h 后读取结果。

2 结果

2.1 病毒学检测结果

经过病毒荧光PCR 检测，病料中禽流感病毒、鸭瘟病毒、鸭黄病毒、副黏病毒未检出。

2.2 细菌镜检结果

革兰氏染色后油镜下观察分离菌株，显示为两种阴性杆菌，一种阳性球菌。

2.3 细菌鉴定及药敏结果

选取GN 革兰氏阴性杆菌鉴定卡、GN13 革兰氏阴性杆菌药敏卡和GP 革兰氏阳性球菌鉴定卡片和GP67 革兰氏阳性球菌药敏卡片，装机检测，经过鉴定感染细菌为大肠杆菌、葡萄球菌和肺炎克雷伯氏菌。筛选的敏感抗生素主要是头孢噻赛肟钠、罗红霉素、替米考星、庆大霉素、多西环素、粘杆菌素、呋喃唑酮。

2.4 治疗措施

（1）保持鸭舍通风、干燥，加强舍内消毒。保持鸭舍空气流通，饲养网面干燥，及时清理病死鸭。每日分别用百毒杀、戊二醛带鸭消毒一次。

（2）参照药敏试验结果对症治疗。饮水中添加替米考星（1g 兑水20kg）、粘杆菌素（1g 兑水20kg）、双黄连口服液混合饮水；发病初期瘫痪的鸭子肌肉注射庆大霉素0.2ml/kg。

（3）治疗3d 后鸭群采食量上升，精神状态明显好转，死亡数量有每天死亡200 只/d，降至10 只/d 左右。

3 讨论

随着我国养殖业逐步发展，养殖环境也复杂多样，如北方肉鸭养殖多为地面笼养，饲养密度大，空气流通不畅，并且养殖人员在科学管理、科学养殖方面的意识不强或知识缺乏，导致出现混合感染的概率增加，大大阻碍了我国鸭养殖业的发展。另外，由于大量使用抗生素，导致抗生素耐药情况日趋明显，普通抗生素药物杀灭细菌的效力大大减弱，细菌耐药性已成为全球瞩目的重要问题。2019 年，Fan Yang 等从河南省的医院和4 种动物中共采集了189 株非重复性肺炎克雷伯菌，189株肺炎克雷伯菌分离株对15 种抗生素的耐药率在11.6%～77.8%之间。在猪中检测到的药耐药率最高，为93.6%，其次是人（90.4%）、鸡（88.9%），牛（52.0%）和绵羊（50.0%）[2]。肺炎克雷伯菌的耐药性在亚洲是一个明显的现存危险，需要对此进行强有力的监测，以遏制这种威胁。对于公共卫生部门来说，监测和报告抗微生物菌株的变化非常重要[3]。

因此，在养殖过程中，首先应建立科学合理的生物安全措施[4]，生物安全至关重要，是防止外来动物疫病的重要屏障，根据本场情况制定科学合理的免疫程序，可减少发病概率，提高产能。另外，应定期对畜舍进行卫生清洁和消毒，这是防制动物疫病的重要手段，鸭群应加强饲养管理，提供充足的营养物质，注意环境变化，防止因环境影响，降低鸭群抵抗力。