2017—2020年扬州地区住院肺炎患者呼吸道病毒监测结果分析

黄 瑶， 张秀玲， 王 艳， 孔桂美， 徐 勤

（1.扬州市疾病预防控制中心检验科，江苏 扬州 225002；2.扬州大学医学院，江苏 扬州 225009）

发热呼吸道病毒感染是全球范围内引起人类发病和死亡的主要原因之一[1-4]，了解病原体对疾病诊治和预防具有十分重要的作用。鉴于呼吸道病毒疫情防控的复杂性[5-10]，本研究在扬州市住院肺炎患者中主动开展了呼吸道病毒病原学监测，对住院肺炎患者进行流感病毒、呼吸道合胞病毒、人腺病毒、人肠道病毒及人副流感病毒Ⅲ型这5种常见呼吸道病毒的检测，最大程度对呼吸道传染疫情进行预测，以及时采取应对措施，减少疫情对社会和经济发展的影响。

1 材料和方法

1.1 样本来源

收集江苏省苏北人民医院、扬州大学附属医院、扬州市第二人民医院、高邮市人民医院4家哨点医院符合“采样对象”定义的住院肺炎患者呼吸道咽拭子样本，每家哨点医院每周采集5人份样本，每周采集1～2次。样本采集后48 h内送至扬州市疾病预防控制中心病毒实验室，2～8 ℃保存；未能及时送达的样本，-70 ℃或以下保存，并于1周内送达；样本应避免反复冻融。

1.2 诊断标准

纳入符合以下3种情况之一的住院治疗的肺炎患者作为“采样对象”：（1）发热（腋下体温≥38 ℃），并具有肺炎的影像学特征，发病早期白细胞总数降低或正常（或淋巴细胞分类计数减少）；（2）符合呼吸道病毒感染临床表现（咽部不适、咽干或咽痛，鼻塞、流涕，鼻、咽、喉明显充血或水肿，咳嗽，咳痰，气短，听诊呼吸音异常，胸痛）中任意1项；（3）经规范抗菌药物治疗3 d，病情无明显改善，或呈进行性加重，或常见病原体感染不能解释的肺炎病例。

1.3 仪器和试剂

Kingfisher96全自动核酸提取仪、ZTLJB-Y64核酸提取试剂盒（西安天隆科技有限公司）、ABI ViiA7实时荧光定量PCR仪（美国ABI公司）；磁珠法病毒（NA）提取试剂盒（RD0164D，上海医脉赛生物科技有限公司）；甲型/乙型流感病毒、甲型H1N1流感病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒Victoria/Yamagata、副流感病毒Ⅲ型、腺病毒、呼吸道合胞病毒试剂盒和肠道病毒（通用型）核酸检测试剂盒（荧光PCR法）（江苏硕世生物公司）。

1.4 方法

将样本震荡处理后，采用Kingfisher96全自动核酸提取仪提取、纯化核酸，采用ABI ViiA7实时荧光定量PCR仪进行分型检测。对流感病毒阳性样本进一步行亚型分型检测。逆转录荧光聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）反应条件：50 ℃ 30 min，95 ℃ 5 min，95 ℃ 10 s、55 ℃延伸1 min，45个循环。荧光PCR反应条件：95 ℃ 5 min，95 ℃ 15 s、55 ℃延伸40 s，45个循环。结果判定：循环阈值（cycle threshold，Ct）≤35，且曲线呈S型为阳性；Ct>38或未检出为阴性。

1.5 统计学方法

采用SPSS 20.0软件及Excel 2019软件进行统计分析，计数资料以例或率表示，组间比较采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 监测采样情况

2017—2020年，共收到住院肺炎患者咽拭子样本1 479例，患者男887例，女592例，年龄为<1个月～94岁。各哨点医院各年样本上送情况见表1。

2.2 5种呼吸道病毒检出率

1 479例咽拭子样本中，检出病毒阳性195例，阳性检出率为13.18%，其中2种病毒混合感染7例（0.47%）。195例病毒阳性样本中，流感病毒检出率最高（5.54%），以下依次为呼吸道合胞病毒（2.63%）、人肠道病毒（1.89%）、人副流感病毒Ⅲ型（1.62%）、人腺病毒（1.01%）。7例混合感染病例中，人腺病毒合并人肠道病毒感染2例，人副流感病毒Ⅲ型合并人肠道病毒感染1例，呼吸道合胞病毒合并人肠道病毒感染2例，呼吸道合胞病毒合并人副流感病毒Ⅲ型感染2例。见表2。

2.3 呼吸道病毒检出时间分布

2017—2020年，各家哨点医院样本上送数量稳定。2017年阳性检出率最高，达19.83%（68/343），以下依次为2018年（13.40%，43/321）、2019年（17.44%，60/344）、2020年（5.10%，24/471），不同年份病毒检出率比较，差异有统计学意义（χ2=45.60，P<0.01）。

2017年呼吸道病毒检出高峰时间集中在3～5月和11～12月，2018年集中在7月和9月，2019年集中在1～3月和12月，2020年仅有9月1个小高峰。2017年3～5月检出病毒以B型Victoria流感病毒为主，11～12月则以新甲型H1N1流感病毒及人肠道病毒为主；2018年7月的高峰以呼吸道合胞病毒（12.50%）、人副流感病毒Ⅲ型（12.5%）、人肠道病毒（4.17%）和人肠道病毒与人副流感病毒Ⅲ型混合感染（4.17%）为主，阳性检出率达到33.34%，9月的高峰则以人肠道病毒为主（37.5%），人腺病毒、人副流感病毒Ⅲ型、人腺病毒+人肠道病毒混合感染及呼吸道合胞病毒+人肠道病毒混合感染检出率仅为4.17%，病毒阳性检出率高达54.18%；2019年1～3月主要为新甲型H1N1流感病毒感染，12月的高峰由H1N1流感病毒，B型Victoria流感病毒及呼吸道合胞病毒构成；2020年9月小高峰主要由呼吸道合胞病毒和人副流感病毒Ⅲ型构成。

2.4 不同性别、年龄住院肺炎患者呼吸道病原检出情况

887例男性患者中，101例病原检测阳性，阳性检出率为11.39%；592例女性患者中，94例病原检出阳性，阳性检出率为15.88%。男性、女性阳性检出率差异有统计学意义（χ2=6.4.26，P<0.05）。

根据患者年龄进行分组，不同年龄患者呼吸道病毒阳性检出率分别为：0～6岁组16.57%（90/543），7～18岁组18.00%（18/100），19～59岁组12.72%（44/346），≥60岁组8.78%（43/490）。不同年龄组阳性检出率差异有统计学意义（χ2=15.87，P<0.01）。

2.5 住院肺炎患者呼吸道病毒病原谱

2017、2018、2019 、2020年住院肺炎患者病毒病原谱有所不同（χ2=72.63，P<0.01）。2017年以流感病毒、人肠道病毒、人呼吸道合胞病毒为主，分别占所有检出病原体的54.41%、16.18%、16.18%；其中流感病毒共检出4个亚型，以B型Victoria为优势毒株，H1N1亚型同期共存，H7N9与H3N2亚型交替检出。2018年病毒病原谱则以人肠道病毒、呼吸道合胞病毒、人副流感病毒Ⅲ型为主，分别占所有检出病原体的32.56%、25.58%、13.95%，流感病毒检出率则大大降低，仅为13.95%，甲型流感病毒仅有新甲型H1N1检出，乙型流感病毒仅有B型Yamagata检出，分别占4.65%与9.30%。2019年病原谱以流感病毒为主（67.60%），除H7N9亚型之外，其余4种亚型均有检出，以新甲型H1N1与B型Victoria为主。2020年以呼吸道合胞病毒和人副流感Ⅲ型病毒为主（各占37.5%），流感病毒仅占8.34%。见表3。

2.6 不同性别患者病毒病原谱

住院肺炎患者中，男性、女性病毒病原谱差异无统计学意义（χ2=7.68，P>0.05），主要病原均为流感病毒和呼吸道合胞病毒。

2.7 不同年龄患者病毒病原谱

4个年龄组中，所占比例最大的均为流感病毒和呼吸道合胞病毒，其次为人肠道病毒和副流感病毒Ⅲ型。4个年龄组病毒病原谱构成差异具有统计学意义（χ2=27.33，P<0.05）。见表4。

表4 不同年龄患者病毒病原谱 例（%）

3 讨论

本研究通过对扬州市住院肺炎患者开展常见呼吸道病毒主动监测，初步了解了扬州地区住院肺炎患者病毒病原构成及流行情况。2017—2020年，扬州地区住院肺炎患者呼吸道病毒总检出率为13.18%，低于相关文献中发热呼吸道人群监测中的病毒总阳性率[11-12]，可能是住院肺炎患者病程已经进展了一段时间，多数经过了抗病毒药物治疗，导致病毒检出率有所下降；除此之外，本研究病原学监测只针对常见的5种呼吸道病毒，病毒检测范围小于相关文献的8～9种，可能会使病毒检出率有所下降。本研究病毒检出时间分布结果显示，2017年住院肺炎患者中呼吸道病毒阳性检出高峰主要集中在3～5月和11～12月，2018年集中在7月和9月，2019年集中在1～3月和12月，2020年仅有9月1个小高峰，这和相应病毒的流行高发季节基本能够一一对应。流感病毒的流行季节以冬春季为主，人肠道病毒的流行季节为夏秋季，人副流感病毒Ⅲ型则是全年都有流行。本研究中，呼吸道合胞病毒为秋冬季流行，与相关文献报道的流行季节为冬春季[11-12]略有不同，可能与地域、样本来源、样本基数不同有关。本研究由于病毒总体阳性检出率不高，各病毒流行趋势无法根据数据描述发病与年龄、季节等相关的流行病学特征，有待于日后进一步监测，扩充数据后进行描述。本研究结果显示，扬州地区2020年呼吸道病毒阳性检出率显著下降，流感病毒在1～3月零星出现过后一直未有检出，可能与2020年新型冠状病毒肺炎疫情发生后采取的严格隔离防范措施密切相关。

本研究不同性别住院肺炎患者呼吸道病毒检出结果显示，男性患者病毒阳性检出率低于女性，与相关文献报道的男性更易感呼吸道病毒[13-15]的结论不一致，这可能是因为样本来源不同导致的。但也有研究结果表明，女性感染呼吸道病毒，其临床症状可能更为严重，住院肺炎患者一般处于呼吸道感染症状较为严重的阶段，本研究结果是否可提示女性感染呼吸道病毒更易发展为肺炎，需要进一步的监测结果加以验证。

本研究不同年龄患者病毒检出率差异极显著，0～6岁儿童的阳性检出率最高，表明学龄前儿童免疫力较低，在幼托机构等场所容易交叉感染呼吸道病毒，与文献报道[16-19]一致，且易进展为肺炎，而≥60岁老年患者病例数仅次于0～6岁儿童，但阳性检出率最低，表明≥60岁老年人由于抵抗力下降，呼吸道感染容易进展为肺炎，但病毒性感染不是主要原因。

综上所述，2017—2020年扬州地区住院肺炎患者呼吸道病毒流行季节及病原谱每年均有所不同，但主要病原为流感病毒和呼吸道合胞病毒，应加强呼吸道病毒监测，将流感病毒及呼吸道合胞病毒作为呼吸道感染防控重点。