山东肉鸭主要细菌病调查与耐药性分析

魏中锋 樊祜卿 王文秀 朱峰亮 姚静

摘 要：为了解山东肉鸭主要细菌病流行情况，本试验从山东菏泽、临沂、潍坊3个地区采取86个肉鸭养殖场发病病料进行细菌分离鉴定和耐药性进行分析。结果显示，大肠杆菌病阳性场68个，占比79.1%;浆膜炎阳性场78个，占比90.7%;沙门氏菌阳性场46个，占比53.5%;从3个地区共分离出埃希氏菌64种、里默氏杆菌34种、沙门氏菌53种。耐药性显示主要病原菌对20种抗菌药呈现多重耐药现象，埃希氏菌、里默氏杆菌呈现14重以上耐药，细菌性疾病控制愈发困难;沙门氏菌耐药以5～9重耐药为主。

关键词：肉鸭;细菌;耐药性

中图分类号：S858.32 文献标识码：B文章编号：1673-1085（2021）9-0052-05

随着鸭养殖业的规模化与集约化发展，鸭细菌病已成为阻碍养鸭业发展的重要因素[1]，山东省作为中国肉鸭养殖大省，尤其是菏泽、临沂和潍坊地区是山东肉鸭养殖较大地区之一。近年来，随着集约化、高密度化的增加，肉鸭细菌病呈现高发和多发态势，并且抗生素治疗效果较差，这给养殖场造成较大的经济损失。引起养鸭场发生细菌性疾病的病原较多，如大肠埃希氏菌、沙门氏菌、葡萄球菌、里默氏杆菌等，但不同地区分离的病原菌有所不同，山东主要流行的为大肠杆菌、沙门氏菌和鸭传染性浆膜炎。本研究拟通过对菏泽、临沂和潍坊地区肉鸭场主要细菌进行分离鉴定、耐药性分析和耐药基因检测，以期为肉鸭养殖细菌病预防与控制提供科学的防控方法。

1 材料与方法

1.1 病料来源

病料来自菏泽、临沂和潍坊地区临床具有典型症状的肉鸭，解剖有心包炎、肝周炎、腹膜炎、气囊炎等明显病变，无菌采取脑、肝脏、脾脏等病变组织。

1.2 主要药品和试剂

麦康凯琼脂、营养琼脂、MH培养基、LB肉汤培养基、缓冲蛋白胨水（ BPW） 、四硫磺酸钠煌绿（ TTB） 增菌液、亚硒酸盐胱氨酸（ SC） 增菌液、亚硒酸盐煌绿（ SBG） 增菌液、药敏纸片均购自天津市英博生化试剂有限公司。

1.3 方法

1.3.1 细菌分离鉴定 无菌采集病死鸭的肝脏、脾脏、肾脏、气囊等样本，划线接种于普通琼脂培养基和鲜血琼脂培养基。将普通琼脂培养基于恒温培养箱中37 ℃培养24 h;将鲜血琼脂平板分成两组，分别置于恒温培养箱中有氧和厌氧条件下，37 ℃培养48 h，期间观察细菌生长情况。然后挑取单个菌落进行纯化培养，对纯化培养物进行革兰氏染色镜检和生理生化鉴定，分析致病菌種类。

1.3.2 病原菌耐药性分析 将鉴定完的细菌培养物接种于胰蛋白胨大豆肉汤培样24 h，取100 μL细菌液体培养物，均匀涂布于鲜血琼脂平板，待培养基表面菌液晾干后，将药敏纸片贴于培养基上，恒温培养箱37 ℃培养36 h，测定抑菌圈直径，分析分离细菌的耐药情况。

2 结果与分析

2.1 菏泽、临沂和潍坊地区肉鸭发病情况

统计结果见表1。

本次调查共调查86个养殖场，采集了258个样品，其中大肠杆菌病阳性场68个，占比79.1%;浆膜炎阳性场场78个，占比90.7%;沙门氏菌阳性场46个，占比53.5%;大肠杆菌和浆膜炎混合感染场81个，占比94.2%;大肠杆菌和沙门氏菌混合感染44个，占比51.2%;浆膜炎和沙门氏菌混合感染43个，占比50%;大肠杆菌、浆膜炎和沙门氏菌3种菌混合感染27个场，占比31.4% 。

2.2 细菌分离鉴定结果

取纯培养的细菌接种细菌生化管，恒温箱37 ℃培养48 h，观察分离细菌发酵情况，并根据培养菌落形态特点和菌体染色特征，判定分离细菌种类，结果如表2所示。

本试验共分离埃希氏菌64种，其中肝脏分离32种，脾脏分离17种，肾脏分离13种，气囊分离2种。分离里默氏杆菌34种，其中肝脏分离22种，脾脏分离0种，肾脏分离0种，气囊分离12种.分离沙门菌53种，其中肝脏分离23种，脾脏分离7种，肾脏分离6种，气囊分离17种。

从表3可知，养鸭场主要病原菌均有不同程度的耐药现象。埃希氏菌分离株的耐药率：头孢吡肟（73.4%）、头孢噻肟（84.4%）、亚胺培南（81.3%）、氨苄西林（95.3%）、头孢曲松（92.2%）、庆大霉素（59.4%）、链霉素（37.5%）、新霉素（31.3 %）、卡那霉素（56.3 %）、四环素（96.9%）、强力霉素（84.4%）、红霉素（76.6%）、氯霉素（71.9 %）、乙酰螺旋霉素（93.8%）、阿奇霉素（67.2%）、环丙沙星（81.3 %）、氧氟沙星（93.8 %）、磺胺甲基异恶唑（90.6 %）、甲氧苄氨嘧啶（84.4 %）、复方新诺明（76.6 %）、林可霉素（87.5 %）、氟苯尼考（96.9 %），其中只有链霉素、新霉素卡拉霉素对埃希氏菌较为敏感。

里默氏杆菌分离株的耐药率：头孢吡肟（79.4%）、头孢噻肟（88.2%）、亚胺培南（82.4%）、氨苄西林（100.0%）、头孢曲松（94.1%）、庆大霉素（76.5%）、链霉素（67.6%）、新霉素（47.1%）、卡那霉素（55.9%）、四环素（79.4%）、强力霉素（64.7%）、红霉素（82.4%）、氯霉素（73.5 %）、乙酰螺旋霉素（88.2%）、阿奇霉素（47.1%）、环丙沙星（76.5 %）、氧氟沙星（88.2%）、磺胺甲基异恶唑（82.4%）、甲氧苄氨嘧啶（88.2%）、复方新诺明（76.5%）、林可霉素（88.2%）、氟苯尼考（94.1%），其中新霉素、卡那霉素、阿奇霉素对里默氏杆菌较为敏感。

沙门氏菌的耐药率：头孢吡肟（3.8%）、头孢噻肟（5.7%）、亚胺培南（1.9%）、氨苄西林（9.4%）、头孢曲松（7.5%）、庆大霉素（15.1%）、链霉素（3.8%）、新霉素（5.7%）、卡那霉素（9.4%）、四环素（39.6%）、强力霉素（30.2%）、红霉素（34.0%）、氯霉素（41.5%）、乙酰螺旋霉素（45.3%）、阿奇霉素（17.0%）、环丙沙星（5.7%）、氧氟沙星（3.8%）、磺胺甲基异恶唑（49.1%）、甲氧苄氨嘧啶（50.9%）、复方新诺明（45.3%）、林可霉素（17.0%）、氟苯尼考（26.4%），大多抗生素对沙门氏菌敏感，其中磺胺甲基异恶唑、甲氧苄氨嘧啶、复方新诺明为较为敏感。

2.4 肉鸭场病原菌多重耐药性分析

分析结果见表4。

由表4 结果可知，肉鸭场分离的细菌均存在多重耐药现象，其中埃希氏菌分离株多重耐藥现象最为严重，呈现14重以上耐药;里默氏杆菌分离株多重耐药现象次之，以5～13重常见;沙门菌分离株多重耐药现象相对较少，以5～9重耐药为主。

3 讨论与小结

随着肉鸭养殖越来越向集约化和规模化发展，饲养密度越来越大，细菌病的发生日益频繁，而且随着细菌耐药性的增加，细菌病更加难以控制，常给养殖业造成严重的经济损失[2]。大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌和沙门氏菌是引起鸭群细菌病的最常见病原，对我国肉鸭养殖的发展以及人类公共卫生安全构成严重威胁[3]，并且这3种病的临床症状很相似，肉鸭感染大多为2种以上混合感染[4]，因此从临床上难以诊断。本试验从菏泽、临沂、潍坊3个地区86个肉鸭养殖场病死鸭病料中分离出埃希氏菌64种、里默氏杆菌34种、沙门菌53种，说明在山东这3个地区肉鸭养殖场中细菌性污染较为普遍，并且出现多重感染越来越严重的趋势。随着抗菌药的广泛应用，细菌耐药现象不断增多[5]。本试验研究发现，肉鸭场中埃希氏菌、里默氏杆菌耐药性越来越普遍，呈现14重以上耐药，细菌性疾病控制愈发困难;沙门菌耐药以5～9重耐药为主，形势也不容乐观。

大肠杆菌作为一种条件性疾病，与养殖场的饲养条件有很大的关系，养殖设施和条件相对较好的发病率明显低于设施简陋的养殖场[6]，大肠杆菌的控制从根本上主要是改善养殖条件。鸭传染性浆膜炎作为常见肉鸭疾病，发病具有季节性，需要加强日常饲养管理，加强鸭舍的通风、环境干燥、清洁卫生、消毒，采用全进全出的饲养制度。沙门氏菌作为一种肉禽常见细菌病，在山东省养殖肉鸭中较为普遍，发病率也比较高[7]，感染可能与种禽场有关。

参考文献

[1] 张大丙.当前鸭病流行现状及防控对策[J].中国家禽，2012，34（7） ： 38-40.

[2] 林安，喻元，胡岚岚，等.鸭源大肠杆菌和沙门菌混合感染的分离鉴定及药敏试验[J].中国兽医杂志，2012，48（4） ： 45-47.

[3] 陆新浩，陈秋英，刘鸿等.当前鸭传染病的流行特点及防控建议[J].水禽世界，2012（02）：7-12.

[4] Wei B， Cha S Y， Kang M， Park I J， Moon O K， Park C K， Jang H K.Development and application of a multiplex PCR assay for rapid detection of 4 major bacterial pathogens in ducks[J]. Poultry Science， 2013，92（5）：1164-70.

[5] 张济培，韦庆兰，谭华龙，等.广东水禽源大肠埃希氏菌耐药性及氨基糖苷类耐药基因研究[J].动物医学进展，2016，37（ 5） ： 42-46.

[6] 刘英龙.潍坊地区鸭大肠杆菌病流行病学调査及防治措施研究[D].泰安：山东农业大学，2009.

[7] 王健丞.山东省部分地区鸡源致病菌耐药性及中药防治研宄[D].泰安：山东农业大学，2016.