环氧合酶-2、微卫星稳定表达与结直肠癌术后患者含奥沙利铂化疗方案预后的关系

朱 灵, 孟 芳, 崔 英

(江苏省无锡市锡山人民医院/东南大学附属中大医院无锡分院 肿瘤血液科, 江苏 无锡, 214000)

结直肠癌病因较复杂，预后差，其转移和侵袭受基因突变、环境等多方面因素的影响[1-2]。临床研究[3-4]显示, DNA微卫星不稳定(MSI)导致体内错配修复基因失活，复制过程中出现的错误不能修复，进而升高肿瘤发生概率，是结直肠癌尤其是部分散发性结直肠癌的发病机制。但临床对于部分患者微卫星稳定(MSS)与结直肠癌发生发展的关系并不明确[5-6], 而MSS状态说明没有错配修复基因的参与，细胞正常复制增殖，故可能存在其他的分子机制与结直肠癌的发生发展密切相关。既往研究[7-8]报道，环氧合酶-2(COX-2)水平升高是肿瘤发生发展的危险因素。目前临床关于MSS与结直肠癌相关性的报道很少，为进一步探究结直肠癌的发生机制，本研究分析了结直肠癌组织中COX-2、MSS表达与TNM分期及预后的关系，旨在为疾病诊治和预后评估提供参考依据，现报告如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

本次研究设计采用回顾性、单中心临床方案，选取2016年1月—2019年12月在本院治疗的结直肠癌患者70例作为研究对象。纳入标准: ① 符合《中国结直肠癌诊疗规范(2015版)》[9]中诊断标准者; ② 年龄>18岁者; ③ 临床分期Ⅰ～Ⅲ期者; ④ 在本院接受结直肠癌根治术及术后含奥沙利铂辅助化疗方案治疗者; ⑤ 临床资料保存完整者。排除标准: ① 术前有放化疗等抗肿瘤治疗史者; ② 合并有肝肾功能障碍、心脑血管疾病、免疫系统疾病等其他严重疾病者; ③ 随访资料不完整者。本研究获得医院伦理委员会审核批准。

1.2 方法

术后化疗方法: 70例患者术后均采用奥沙利铂联合卡培他滨(XELOX)辅助化疗方案。第1天，奥沙利铂(江苏恒瑞医药股份有限公司，生产批号20151122)130 mg/m2, 静脉滴注2 h; 第1～14天，卡培他滨(齐鲁制药有限公司，生产批号20151002)1 250 mg/m2, 2次/d, 口服。每3周重复1次。

COX-2检测方法: 采用免疫组织化学方法检测结直肠癌组织中COX-2表达情况。采用10%中性甲醛固定液将标本固定，常规脱水，石蜡包埋; 切成4 μm的连续切片; 烘干水分并脱蜡，标本中均依次滴加对应的兔抗人-COX-2抗体，过夜，苏木素染色，中性树胶封片。PBS代替一抗作为阴性对照。200倍显微镜下观察SP法染色结果。

COX-2蛋白表达评分: 以染色强度×阳性细胞占比作为最终记分判断依据, 0～1分提示阴性, 2分及以上判断为阳性[10]。染色强度评分: 无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。阳性细胞占比积分: 以总数1 000个肿瘤细胞为准，阳性表达率<10%为无阳性反应, 10%及以上提示阳性反应并进一步评分，其中阳性表达率≤5%为0分，阳性表达率为>5%～25%计1分，阳性表达率>25%～50%计2分，阳性表达率>50%计3分。

MSS判断方法[11]: 根据hMLH1、hMSH2、hMSH6、PMS2这4个错配修复蛋白表达缺失情况判断阳性, 4个错配修复蛋白全部表达(染色均为阳性)判断为MSS, 有1个或1个以上表达缺失则判断为MSI。

随访方法: 每年通过电话或门诊随访1次，每例患者随访需满2年，随访时间截至2021年4月。

1.3 统计学处理

2 结 果

2.1 一般资料

70例患者中，男39例，女31例; 年龄31～69岁，平均(50.45±12.24)岁; TNM分期为Ⅱ期39例, Ⅲ期31例; 结肠癌40例，直肠癌30例; COX-2和MSS阳性表达者34例(双阳组), COX-2阳性表达者12例和MSS阳性表达者11例(单阳组), COX-2和MSS阴性表达者13例(双阴组)。MSS、COX-2阳性表达的免疫组化染色图见图1。

A: MSS阳性表达; B: COX-2阳性表达。

2.2 各组临床病理及一般资料比较

双阳组、单阳组和双阴组患者的一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05); 双阳组TNM分期Ⅲ期者占比高于单阳组、双阴组，且单阳组高于双阴组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 各组临床病理及一般资料比较

2.3 各组无病生存时间比较

双阳组中位无病生存期为14个月(95%CI为13.22～14.78), 短于单阳组的24个月(95%CI为21.53～26.47)和双阴组的34个月(95%CI为27.35～40.65), 差异有统计学意义(P<0.05); 单阳组和双阴组的中位无病生存期比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见图2。

2.4 多因素分析

将患者临床病理指标、COX-2、MSS表达作为自变量，进展情况作为因变量，进行Cox比例风险回归分析，结果显示, TNM分期、COX-2、MSS表达是结直肠癌患者术后含奥沙利铂化疗方案预后的影响因素(HR=2.354、1.103、1.155,P<0.05)。

3 讨 论

结直肠癌是起病较为隐匿的消化系统恶性肿瘤之一，早期临床症状并不明显，大部分患者确诊时已发展至中晚期，错过手术最佳时期。晚期结直肠癌具有较强的扩散性和转移性，严重威胁患者的生命安全，患者生存期往往较短。目前，手术切除仍是结直肠癌最有效的治疗方式，为提高结直肠癌的治愈率和症状缓解率，结直肠癌患者术后常采用含奥沙利铂的化疗方案进行辅助化疗[12-13]。寻找可正确评估化疗方案的疗效和预后情况的血清标志物，有利于化疗方案的调整和优化。因此，本研究重点分析了COX-2、MSS水平变化与结直肠癌预后情况的关系，并采用Cox线性回归分析确定影响患者预后的危险因素。

DNA MSI在结直肠癌中具有独特的病理特征，常发生于右半结肠，以黏液腺癌常见，研究[14]证实MSI与结直肠癌患者的无疾病生存时间、化疗疾病控制率呈正相关，可有效评估患者预后情况。MSS是指hMLHl、hMSH2、hMSH6这3个参与复制错配纠正过程的错配修复蛋白的表达均无缺失，细胞增殖分化正常，存在其他的致癌分子机制[15-16]。目前，临床研究大多通过分析结直肠癌组织中MSS水平与癌旁组织中的差异，进而确定MSS在疾病诊断中的价值，但很少有研究报道MSS对结肠癌患者术后采用含奥沙利铂方案化疗的敏感性和有效性的影响。本研究结果显示，双阳组患者TNM分期Ⅲ期者占比高于单阳组和双阴组，差异有统计学意义(P<0.05); 双阳组患者的中位无疾病生存时间短于单阳组和双阴组，差异有统计学意义(P<0.05)。进一步行Cox比例风险回归分析结果显示，MSS表达是结直肠癌患者术后采用含奥沙利铂方案化疗预后的影响因素。由此提示，MSS上调参与结直肠癌的发生发展过程，可作为预后评估的重要指标。

COX-2是消化道肿瘤组织中高表达的一种诱导酶，通过表达前列腺素E2(PGE2)参与细胞凋亡过程，与肿瘤细胞的发生发展密切相关[17]。COX-2可分泌表达的PGE2是抑癌基因的上游调控者，具有促进抑癌基因bcl-2表达下调的作用，可抑制细胞凋亡，从而介导肿瘤细胞的发生发展[18-19]。本研究结果显示，双阳组患者TNM分期Ⅲ期者占比高于单阳组和双阴组，差异有统计学意义(P<0.05), 说明COX-2参与大肠癌的发生。本研究还发现，双阳组患者生存期长于单阳和阴性表达患者，说明COX-2高表达不仅是恶性肿瘤发生的早期事件，而且与恶性肿瘤的TNM 分期及患者预后均有直接关系。根据相关文献[20-21]结果，本研究进行Cox比例风险回归分析确定COX-2、MSS表达是结直肠癌患者术后采用含奥沙利铂方案化疗预后的影响因素，表明COX-2可促进癌细胞进一步分化，其异常表达与结直肠癌的发生有关。

综上所述, COX-2、MSS阳性表达可影响结直肠癌患者术后应用含奥沙利铂化疗方案的效果，缩短无疾病生存时间。本研究综合分析了COX-2、MSS水平异常与结直肠癌患者含奥沙利铂化疗方案化疗效果及预后的关系，并采用Cox比例风险回归分析确定了影响化疗效果和预后的危险因素，可为结直肠癌的临床治疗和预后评估提供依据，有利于优化化疗方案，提高化疗效果，对改善患者预后具有重要意义。但本研究纳入的样本量较小，分析结果可靠性有限，故未来仍需进一步加大样本量来验证结果。