传统手工染色和现代仪器染色的对比和相关染色程序的改进研究

梁津杰

（广东省江门市中心医院 病理科，广东 江门 529000）

0 引言

传统手工染色是临床病理标本照片染色的常规手段，但由于其效率低、原材料成本高，在诸多标本送检量较大的医院中，传统手工标本照片染色的缺陷逐步凸显，因而近年来逐渐被现代仪器染色工具所替代。但为了准确了解传统手工染色与现代仪器染色的实际效果，本文对比了传统手工然色与现代仪器染色程序、方法、效果，并选择我院手术室以及门诊的300 例病理标本作为研究对象，分别采取传统手工染色与现代仪器染色，探究染色后两组标准的染色效率与染色效果情况[1]。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择广东省江门市中心医院手术室以及门诊2019年7 月至2019 年12 月内的300 例病理标本作为研究对象，随机将研究对象分成手工组与仪器组，每组标本150 例，病理标本主要来自妇科、甲乳外科以及胃肠外科。

1.2 方法

1.2.1 仪器组方法

染色方法：仪器组本次处理标本共150 例，每例病例有2 张制片，共300 张照片，采用全自动染色机进行染色，染色过程中使用伊红溶液，其中一张使用醋酸化伊红溶液（共150 张），另一张则单独使用水溶性伊红溶液（共150 张），以便判断醋酸化伊红产生的影响。染色后使用全自动封片机对制片进行封固[2]。

染色过程：蜡块完成切片处理后，将其置于载玻片上进行染色，染色后编号、入架，将恒温鼓风干燥箱温度设置在65℃干燥载玻片，时长20min；再使用全自动染色机进行染色：（1）使用二甲苯脱蜡，脱蜡时间每步4min；（2）无水乙醇Ⅰ，时间为1min；（3）无水乙醇Ⅱ，时间为1min；（4）95%乙醇，时间为1min；（5）85%乙醇，时间为1min；（6）水洗2min；（7）1.5%醋酸，时间为1min，（8）苏木素，时间为7min；（9）水洗1min；（10）0.5%盐酸乙醇，时间为4s；（11）水洗2min；（12）促蓝液，时间为2min；（13）水洗2min；（14）95%乙醇（每例病理标本仅一张玻片使用，共150 张），时间为1min（使用普通水溶性伊红的150 张跳过此步）；（15）0.2%醋酸化醇溶性伊红，时间为5s（普通水溶性伊红的染色时间为2min）；（16）85%乙醇，时间为6s；（17）95%乙醇，时间为8s；（18）无水乙醇，时间1min；（19）苯酚+TO，时间为2min；（20）二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ、二甲苯Ⅲ，时间均为3min，完成染色后，全自动封片机封固，贴裱，成片[3]。

1.2.2 手工组方法

染色方法：在干燥箱中取出切片后进行手工染色，并采用中性树胶封固。

染色过程：（1）使用TO，微波炉中火加热脱蜡，脱蜡时间每步5min；（2）无水乙醇Ⅰ，时间为1min；（3）无水乙醇Ⅱ，时间为1min；（4）95%乙醇，时间为1min；（5）85%乙醇，时间为1min；（6）水洗2min；（7）1.5%醋酸，时间为1min；（8）苏木素，时间为6min；（9）水洗2min；（10）0.5%盐酸乙醇，时间为4s；（11）水洗2min；（12）促蓝液，时间为2min；（13）水洗2min，（14）95%乙醇（每例病理标本仅一张玻片使用，共150 张），时间为1min（使用普通水溶性伊红的150 张跳过此步）；（15）0.2%醋酸化醇溶性伊红，时间为5s（普通水溶性伊红的染色时间为2min）；（16）85%乙醇，时间为6s；（17）85%乙醇，时间为6s；（18）95%乙醇，时间为8s；（19）无水乙醇，时间2min；（20）苯酚+TO，时间为2min；（21）TO Ⅰ、TO Ⅱ、TO Ⅲ，时间均为5min，完成染色后，全自动封片机封固，贴裱，成片[4]。

1.3 观察指标

对比两组标本照片染色所需时间；对比两组标本照片染色效果，包括红蓝适度、核质鲜明、色彩亮丽三项指标；对比仪器组伊红溶液使用中添加醋酸化醇溶性伊红的效果[5]。

1.4 统计学分析

使用SPSS 23.0 软件对所获数据进行分析，其中染色所需时间以及伊红溶液添加80%乙醇效果数据为计量资料，检验应使用Student’s test 工具；标本照片染色效果为计数资料，检验使用χ2test 工具。P<0.05，代表差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组标本照片染色所需时间对比结果

如表1 所示，两组均处理了150 例病例标本照片，每组共300 张照片，两组单张染色时间与总染色时间均呈现出明显的对比，仪器组单张染色平均时间为（43.25±1.75）min，而手工组单张染色平均时间突破了60min，差异十分明显；而总染色时间上手工组消耗时间大大高出仪器组，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

表1 两组标本照片染色所需时间对比结果（）

表1 两组标本照片染色所需时间对比结果（）

2.2 两组标本照片染色效果对比结果

本次研究中，选择红蓝适度、核质鲜明、色彩亮丽作为评价标本照片染色效果的三项指标，从仪器组统计结果来看，三项均超过了250 张，而手工组均低于250 张，组间差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

表2 两组标本照片染色效果对比结果（n，%）

2.3 仪器组标本伊红溶液中添加醋酸化醇溶性伊红效果对比

仪器组300 张标本照片中，150 张使用普通水溶性伊红，150 张使用普通水溶性伊红+醋酸化醇溶性伊红，加入醋酸化醇溶性伊红后，伊红溶液使用时间有所延长，组间差异有统计学意义（P<0.05），见表3。

表3 仪器组标本伊红溶液中添加醋酸化醇溶性伊红效果对比（）

表3 仪器组标本伊红溶液中添加醋酸化醇溶性伊红效果对比（）

注：本次对比中以500mL伊红溶液与500mL水溶性伊红+醋酸化醇性伊红溶液使用时间为对象。

3 讨论

病理标本照片染色是临床观察与诊断的重要依据之一，目前临床上涌现出传统手工染色以及现代仪器染色两种染色方法，其中传统手工染色过程复杂、单张照片染色耗时长，并且使用大量原材料，随着标本送检量的不断增加，该染色方法已不足以满足临床所需，逐步被现代仪器染色所取代[6]。利用现代自动化仪器进行标本照片染色，有效提升了染色效率以及染色质量，具有较强的问题性，弥补了传统手工染色的弊端。而且整个染色过程在封闭空间内进行，可通过与活性炭等过滤装置的配合，减少化学试剂挥发对环境造成的污染[7]。

本科室仪器染色中将改良Gill 苏木精作为主要材料，其虽成本高、配制过程复杂，但染色效率高，保证核膜清晰、色彩鲜艳，是保障染色质量的关键，目前是临床病理标本照片染色中最佳的核染液。虽然成本高、配制复杂，但单次用量少，无需进行加温等处理，与其它材料混合后也不会产生化学反应、生成沉淀，因此，无需再进行金属膜过滤。但从本次研究中发现，传统手工染色以及现代仪器染色中均使用了改良Gill苏木精作为染料，但手工组染色效率以及染色效果仍然低于仪器组，从而突出染色方法对于染色效率以及染色效果的影响[8]。

而目前研究中对于该课题也有着较为丰富的研究，其中张鹏等[9]学者的研究中选择绍兴市妇幼保健院手术室与门诊的50 例标本作为研究对象，标本照片均为妇产科标本照片，共计200 张照片，其中2 张为一组，每组100 张，分别采用传统手工染色以及Leica ST5020 全自动染色机，研究中发现仪器染色具有效率高、效果好、稳定的优势；而在醋酸化伊红的研究上，也得到了具有延长伊红溶液使用时间的结果。从其研究数据来看，仪器染色整个过程需43min 左右，而手工染色程序过于复杂，整个过程需60min 以上；伊红使用醋酸化伊红后对1500 张切片进行染色后依然保障色彩鲜艳，但普通水溶性伊红处理1500 张切片后，颜色则较为陈旧。

综上所述，可将现代仪器染色广泛运用于临床，但在染色程序上，由于苏木精以及仪器的使用大大提高了染色效果，脱水透明环节可减少乙醇与二甲苯处理环节，优化整个处理程序，减少原料的消耗。并且可根据临床使用习惯确定染液位置、染缸位置，以便使染色操作更加方便，减少不必要时间的浪费，有效提升染色效率。