赣北地区中蜂蜂房球菌病流行情况调查

陈桂平,丁剑峰,付戴波,周伟良,张串联,涂群

（1.江西省养蜂研究所，江西南昌330200；2.永修县立新乡农技站；3.九江市动物疾病控制中心）

蜂房球菌（Melissococcus pluton,MSSP）是一种革兰氏阳性、兼性厌氧菌。室温下，可以在蜂蜡中存活65d以上、在干枯的幼虫死亡残留物中存活3年，是引起蜜蜂“烂子病”的主要细菌性病原之一。江西省山区适宜中蜂养殖，每年饲养规模很大，是当地农民主要收入之一，而目前人工养殖的中蜂蜂群“烂子”现象日趋严重，给中蜂养殖带来很大经济损失，该病在江西省流行情况尚不清楚。为揭示该病在江西省赣北中蜂养殖区的流行现状和特点，本研究从赣北地区不同养蜂场采集患病幼虫、蜂脾等样品，分离鉴定蜂房球菌，分析各地蜂场蜂房球菌引起的烂子病流行情况，为有效防控该病提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品来源。赣北地区不同中蜂场采集的患病幼虫、可疑巢脾和花粉。在赣北地区选择4个县，每个县选择3个乡镇，每个乡镇选择3～6家蜂场，每家蜂场用无菌取样器采集可疑幼虫、巢脾和花粉各3份，做好标记，保温箱保存带回实验室。

1.1.2 主要试剂。葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露糖、蔗糖、果糖、蛋白胨、阿拉伯糖、柠檬酸钾、柠檬酸钠、海藻糖、蛋白胨、半胱氨酸等生化试剂均购于国药集团化学试剂北京有限公司。

1.2 方法

1.2.1 培养基配制。蛋白胨1g、半胱氨酸0.02g、葡萄糖0.5g、果糖0.5g、可溶性淀粉1g组成，琼脂2g加纯化水至100mL，用1mol/LKH2PO4调pH至7.0。

1.2.2 病原分离。将可疑幼虫、巢脾和花粉分别与同体积的无菌生理盐水匀浆[1]，在无菌操作台用灭菌接种环蘸取少量上清液接种在琼脂培养基表面，在5%～10%CO2厌氧条件下35℃培养24h，观察菌落形成，并挑起菌落进行革兰氏染色镜检。

1.2.3 生化鉴定。将分离的菌株接种于专门培养基进行培养与纯化[2～3]，然后将单一菌落分别接种在葡萄糖、乳糖、蔗糖、果糖、甘露糖、阿拉伯糖、海藻糖、麦芽糖、山梨糖、硝酸盐还原等微量生化鉴定管，在5%～10%CO2厌氧条件下35℃培养48h，进行生化鉴定。

2 结果

2.1 分离培养结果

分离临床样品，并挑取单一菌落纯培养后，在5%～10%CO2厌氧条件下35℃培养24h，可观察到图1所示菌落，细菌菌落直径在1mm左右，为半透明水滴样，边缘整齐，表面光滑、中心凸突的小菌落。

图1 细菌菌落形态

2.2 生化鉴定结果

对样品分离菌株进行生化鉴定，由表1结果可知，该菌能利用葡萄糖、果糖、蔗糖、海藻糖、阿拉伯糖、麦芽糖，而不能利用乳糖、甘露糖。厌氧和硝酸盐还原试验结果呈阳性。

表1 样品分离菌株的生化鉴定结果

2.3 细菌分离结果

由表2、表3结果可知，以不同地区蜂场感染程度来评价，60家蜂场中有34家蜂场检出带菌样品，蜂场检出率56.7%，其中武宁县蜂场检出率最高达61.1%、永修县60%、修水县53.3%、都昌县50%，4个县蜂场检出率均≥50%；以不同样品带菌程度来评价，360个样品中检出带菌样品194个，不同取样部位的样品检出率以幼虫为最高，达达50.6%。

表2 不同取样部位蜂房球菌检出情况 份、%

表3 不同地区蜂场蜂房球菌检出情况 户、%

3 讨论

由于蜂房球菌属于兼性厌氧菌，分离培养时对温度和CO2浓度均要求较高，需要熟练掌握分离培养技术。分离出的菌落与文献报道基本一致[4～5]，因此可确定从样品中分离出的细菌是蜂房球菌。

从不同乡镇蜂场检出率比较来看，永修县马口镇检出率最高为80%、都昌县多宝乡检出率最低为25%，4个县蜂场检出率均≥50%，说明蜂房球菌在当地蜂群中已存在传播流行，这与该菌在外省蜂场中的流行特点基本相符[6～7]。