2016～2020年上海市松江区猪蓝耳病的监测与分析

金一春，许柯，朱骏，曹向英，孙文梅，胡晓艳

（上海市松江区食用农产品安全监督检测中心，上海 松江 201611）

猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的一种急性高致病性传染病，其变异毒株的感染可引起高发病率和高死亡率，因其传播速度快、发病率高，给我国养猪业造成了严重的经济损失，成为危害当前养猪业的主要疫病之一［1］。目前，猪蓝耳病尚无特效治疗药物，我国一直采取疫苗接种的方法来预防和控制［2］。

为了解上海松江区猪群猪蓝耳病的免疫效果，准确掌握其流行病学规律，笔者于2016～2020年采用ELISA方法和荧光RT-PCR方法对本区内规模场、种养结合家庭农场的猪群在春秋两季进行集中监测。

1 材料

1.1 被检样品 选择上海市松江区规模场、种养结合家庭农场的猪群，于2016～2020 年共采集5 728份猪血液样品，其中规模场3 867份、种养结合家庭农场1 861份。

1.2 检测试剂 猪繁殖与呼吸综合征酶联免疫吸附试验（ELISA）检测试剂盒、荧光聚合酶链式反应（RT-PCR）检测试剂盒，分别购自IDEXX 和北京生科尚仪科技有限公司；磁珠法核酸提取试剂盒购自广州美基生物科技有限公司。

2 方法

2.1 ELISA检测

2.1.1 操作步骤 检测试剂在室温下充分回温，用超纯水将浓缩洗液作10倍稀释，用样品稀释液将被检血清作40 倍稀释，阴、阳性对照血清不作稀释；在微量反应板各相应孔中加入已处理过的被检血清及阴、阳性对照血清各100 μL，振荡混匀，封膜，21 ℃下孵育30 min；用约300 μL 洗涤液重复洗涤板孔4 次，最后一次洗涤后将板拍干；每孔加入酶标抗猪IgG 抗体100 μL，振荡混匀，封膜，21 ℃下孵育30 min；同样洗板4 次拍干后，每孔加入TMB 底物溶液100 μL，避光21 ℃孵育15 min；每孔加入终止液100 μL，混匀后置酶标仪上，用单波长650 nm读取结果。

2.1.2 结果分析 在实验条件成立下，分析S∕P值：若S∕P＜0.4，则该样品为猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体阴性；若S∕P≥0.4，则该样品为猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体阳性。

2.2 荧光RT-PCR检测

2.2.1 核酸提取 准备96 孔板，分别取130 μL Buffer MLB及10μL Proteinase K和10 μL MagBind Particles加入孔A，再取已处理样品及阴阳性对照各50 μL加入孔A；取150 μL Buffer MW1 加入孔B；取150 μL Buffer MW2 加入孔C、D；取50 μL Nuclease Free Water 加入孔H，将96 孔板与磁力外套放入仪器相应位置，启动程序运行至结束；将96孔板孔H中的液体吸入1.5 mL离心管中，低温保存备用。

2.2.2 核酸扩增 反应总体积25.5 μL，分别含15 μL PCR 反应液，0.25 μL TaqDNA 酶，0.25 μL PCR 酶及10 μL 模板。扩增条件：42 ℃30 min，92 ℃3 min；92 ℃10 s，45 ℃30 s，72 ℃60 s，5次循环；92 ℃10 s，60 ℃30 s，40次循环。

2.2.3 结果分析 在实验条件成立下，分析Ct值：Ct 值小于30 且出现典型的扩增曲线者，判为阳性。

3 结果

3.1 2016～2020 年间猪蓝耳病免疫抗体检测结果 从表1 可以看出，2016～2020 年间松江区规模场、种养结合家庭农场的猪蓝耳病抗体免疫合格率分别为89.8%、86.8%、91.2%、95.3%、91.6%和94.6%、93.3%、99.0%、98.6%、90.9%，均达到群体抗体合格率大于或等于70%的要求。2016～2019 年规模场的猪蓝耳病抗体免疫合格率略低于种养结合家庭农场。2016～2017 年及2019～2020 年松江区猪蓝耳病抗体免疫合格率总体呈下降趋势，如图1所示。

表1 2016～2020年上海市松江区猪蓝耳病免疫抗体检测结果

图1 2016～2020年松江区猪蓝耳病免疫抗体合格率趋势图

3.2 2016～2020年间猪蓝耳病病毒RT-PCR检测结果 从表2检测结果可以看出，除了2016年规模场有检测出猪蓝耳病阳性（阳性率为0.7%）外，其他年份均未检出。

表2 2016～2020年上海市松江区猪蓝耳病病原学检测结果

4 讨论

4.1 从本次监测结果来看，上海市松江区猪蓝耳病的整体免疫情况良好，但通过此次监测发现在疫病免疫防控工作上仍有上升空间，应加强防控监管力度。

4.2 饲养管理、仔猪补栏、免疫接种、诊断治疗等不规范操作都会影响抗体免疫效果。本次调查发现2016～2019 年规模场的猪蓝耳病免疫抗体合格率低于种养结合家庭农场，2016～2017年及2019～2020 年猪蓝耳病免疫抗体合格率总体呈下降趋势，分析原因可能与猪场的免疫程序及猪群健康状况等因素有关。为了确保猪群的免疫效果，应加强主要疫病的持续监测，科学制定符合生产实际的免疫程序。

4.3 针对2016 年检出猪蓝耳病阳性的情况，笔者还应用荧光PCR检测方法对2016年和2017年的血液样本进行了猪圆环病毒2 型检测，结果显示2016、2017 年猪圆环病毒2 型的阳性率分别是10.2%、0.8%，由此推测2016、2017 年规模场猪群有猪圆环病毒2型感染现象，由于其免疫抑制性，严重影响了猪蓝耳病免疫抗体的产生。猪场应引起重视，建立良好的饲养管理措施，制定科学的消毒程序，严格生物安全管理制度，保证饲料品质和青绿饲料的供给，减少猪群应激［3］，加强猪群自身免疫力提升，从而提高免疫效果。

4.4 控制猪蓝耳病应以预防为主［4］，猪群注射疫苗后应进行定期、持续的免疫抗体监测，及时了解免疫效价水平，对免疫效果不理想的猪群及时补免，最终提高本地区猪蓝耳病的防制效果。■