子宫内膜异位症合并不孕患者血清miR-145表达及与临床病理类型及妊娠结局关系

陶中娥 张 晔

天津市第一中心医院(300070)

子宫内膜异位症(EMT)好发于育龄期女性，病变可逐步波及卵巢、子宫直肠凹、宫骶韧带等盆腔组织器官[1-2]。有研究[3]指出EMT是导致女性不孕的主要病因之一。腹腔镜手术及术后药物干预是目前治疗EMT合并不孕的最主要手段，但不同患者妊娠情况存在较大差异，推测可能存在其他影响患者病情及术后妊娠因素。EMT细胞在行为学上具有与恶性肿瘤细胞相似的种植、侵袭、远处转移等特点，而多种miRNAs被发现与恶性肿瘤细胞的上述生物学特点密切相关，Fang Cheng[4]研究在子宫内膜异位症患者黄体中期子宫内膜组织中发现miR-145异常表达，认为其在EMT患者并发不孕过程中发挥重要作用。但目前关于EMT患者血清miR-145表达变化研究涉及极少，且对患者腹腔镜术后妊娠结局是否有早期预测作用尚不明。本文以此为切入点，探讨EMT合并不孕患者血miR-145表达及对腹腔镜术后妊娠结局的早期预测价值，为患者治疗后妊娠成功早期评估、治疗方案细化等提供更多参考指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性收集2017年1月-2019年12月在本院接受治疗的EMT合并不孕患者临床资料作为EMT合并不孕组。纳入标准：①符合EMT诊断标准[5]，且正常同房(未采取避孕措施)≥1年未妊娠；②首次确诊子宫内膜异位症、既往无相关治疗史；③年龄20～42岁；④临床资料完整、配合相关检查且本人签署知情同意书。同期体检正常的育龄女性为正常对照组。本研究经本院伦理委员会审批。

1.2 腹腔镜检查及病理分型

所有EMT合并不孕患者均接受常规腹腔镜手术治疗。术中剥离的异位子宫内膜病灶均行病理检查，根据术中所见可将病理类型分为：①单纯腹膜型，腹腔镜下见盆腔腹膜的EMT种植灶，包括红色病变、棕色病变、白色病变；②内囊型，腹腔镜下见卵巢子宫内膜异位囊肿；③腺肌病型，子宫增大(>孕2个月)，临床出现渐进性痛经伴或不伴月经过多，B超基本明确为局限性病变。

1.3 血清miR-145测定

留取EMT合并不孕组(腹腔镜术前及术后48h)、正常对照组妇女空腹外周静脉血标本，采用荧光定量PCR法检测miR-145表达量：Trizol提取组织总RNA，将U6作为miRNA定量内参。引物序列如下：miR-145上游引物5’-CGTAGCTGAAGCTAGCCTA-3’，下游引物5’-ACGTAGAGCTGACGTAGAA-3’。反应条件如下：94℃预变性1min→95℃变性5s→60℃复性30s→72℃延伸60s，共计38个循环。采用2﹣△△CT法计算miR-139-5p表达水平。检测过程中涉及的反转录试剂盒、荧光定量PCR试剂盒均购自上海康朗生物科技有限公司。EMT合并不孕组根据血清miR-145表达量中位数分为高miR-145组、低miR-145组。

1.4 腹腔镜术后治疗及妊娠结局随访

EMT合并不孕组腹腔镜术后第3d肌注GnRH-α 3.75mg/次，每28d注射1次，共计3次，停药后开始试孕。术后每3个月随访一次，共随访12个月，记录试孕12个月内累计妊娠结局。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 基本情况

EMT合并不孕组122例，年龄(30.3±5.2)岁(22～41岁)，体质指数(BMI)(23.2±2.5)kg/m2(21～26 kg/m2)；正常对照组100例，年龄(31.0±5.9)岁(21～44岁)，BMI(23.4±2.8)kg/m2(21～27 kg/m2)。两组年龄、BMI比较无差异(P>0.05)。

2.2 血清miR-145水平比较

血清miR-145表达水平，EMT合并不孕组术前(0.78±0.12)高于正常对照组(0.56±0.09)，且术后(0.67±0.10)低于术前(均P<0.05)。EMT合并不孕患者不同病理类型者年龄、不孕时间、BMI无差异(P>0.05)，术前腺肌病型患者血清miR-145表达水平高于单纯腹膜型、内囊型患者(P<0.05)，而单纯腹膜型与内囊型患者无差异(P>0.05)。见表1。

表1 不同病理类型EMT合并不孕患者临床指标比较

2.3 EMT合并不孕患者术前血清miR-145与妊娠结局

EMT合并不孕患者中，高miR-145表达组术后宫内妊娠率、总妊娠率均低于低miR-145表达组(P<0.05)。见表2。

表2 EMT合并不孕患者术前血清miR-145不同表达与妊娠情况[例(%)]

2.4 EMT合并不孕患者术前血清miR-145对术后妊娠的预测价值

ROC曲线显示，EMT合并不孕患者术前血清miR-145水平预测术后妊娠的最佳截断值为0.685，AUC为0.758(95% CI 0.670～0.847)对应的敏感度、特异度分别为70.5%、69.2%。

图1 EMT合并不孕患者血清miR-145预测术后妊娠的ROC曲线

3 讨论

miR-145在恶性肿瘤中主要扮演抑制癌细胞活力的角色。Zhang[6]研究指出靶向抑制miR-145表达可促进三阴性乳腺癌细胞增殖和侵袭；Chang[7]发现下调miR-145表达可促进肺癌病情进展。但miR-145在EMT组织中的表达变化不同于恶性肿瘤组织，Bashti[8]研究证实EMT异位组织中高表达的miR-145是疾病潜在生物标志物。组织miR-145水平测定在早期筛查疾病、预测治疗结局方面的价值存在局限性，故本文测定EMT合并不孕患者术前血中miR-145水平，发现术前miR-145水平高于健康育龄女性，提示血清miR-145表达增加在EMT合并不孕病情过程中发挥一定作用。进一步分析发现不同临床病理类型的EMT患者血清miR-145水平存在明显差异，腺肌病型患者水平高于单纯腹膜型、内囊型患者，而临床中腺肌病型EMT患者的治疗更为复杂、不孕率更高[9]。提示术前血清miR-145水平可能与EMT病情严重程度有关。腹腔镜及术后GnRN-α治疗在增加EMT合并不孕患者的妊娠率方面的作用已得到较多研究[10-12]证实。本研究患者经上述治疗后12个月内妊娠情况存在差异，低miR-145表达患者的累计妊娠率高于高miR-145表达患者，提示术前血清miR-145表达增加不利于治疗后妊娠。ROC曲线分析，血清miR-145水平对EMT合并不孕患者术后妊娠有一定预测价值，提示测定术前血清miR-145在评估EMT合并不孕患者治疗后妊娠概率、指导治疗干预措施可能有一定临床作用。

综上所述，EMT合并不孕患者血清miR-145表达异常增高，且表达水平与患者异位内膜的临床病理类型、治疗后妊娠结局有一定关系，可能为临床患者的病情评估、治疗指导有一定指导意义。