车前草醇提物对水负荷模型大鼠的利尿作用研究

王一强 ,李 晶 ,张玉香 ,张 瑞 ,史晓伟

（1.甘肃卫生职业学院，甘肃 兰州 730300；2.兰州大学，甘肃 兰州 730000；3.甘肃省中医院，甘肃 兰州 730070）

2015 版中国药典规定，车前科植物车前Plantago asiatica L.或平车前 Plantago depressa Willd.的干燥全草作车前草用[1]。别名:当道、牛遗、牛舌草、车轮草、猪耳草、车轱辘菜、五根草等[2]，具有利尿通淋、凉血解毒、祛痰的功效，用于暑湿泄泻，热淋涩痛，水肿尿少、痰热咳嗽、吐血衄血、痈肿疮毒等[3-5]。现代医学研究表明，车前草中含有黄酮类、苯乙醇苷类、环烯醚萜类、三萜及甾醇类、挥发油、微量元素等多种有效成分，具有抗菌消炎、利尿、抗氧化、抗病毒、抗肿瘤、抗溃疡、修复受损细胞、降血糖、降血压、降血脂等药理作用[6-10]。

我国将车前作为中药材使用的历史悠久，其道地产区为江西赣江沿岸[11-12]。《图经本草》中记载，车前产地有陕西和甘肃，属于西北地区[13]，刘远平[14]在小陇山林区车前草开发前景和陈拓[15]等人在甘肃马衔山平车前叶片δ13C 的海拔和时间差异的研究中显示，甘肃也分布有一定规模的车前草。

本实验采用水负荷大鼠模型，研究江西车前草与甘肃车前草对水负荷大鼠的利尿作用，为进一步研究甘肃车前草临床利尿作用和扩大其栽培规模提供理论依据。

1 实验材料

1.1 实验动物

选取SPF 级别，同批雄性SD 大鼠100 只，清洁级，体质量(150±20)g，购自甘肃中医药大学实验动物中心，生产许可证号:SYXK(甘)2011-0001。实验前将动物置于室内适应环境1 周，室温18℃～20℃，标准大鼠饲料喂养，自由进食，饮用自来水。

1.2 药物与试剂

车前草（安国市广济堂，批号：19022805，产区：江西）；甘肃车前草（经鉴定为车前科车前属平车前的干燥全草，产区：甘肃天水小陇山）；氢氯噻嗪片（天津力生制药有限公司，批号：2003002）；血尿素氮（BUN）测试盒(上海科华生物工程股份有限公司)；碳酸酐酶(CA)试剂盒(上海科华生物工程股份有限公司)。

1.3 实验仪器

5417R 低温高速离心机(德国EPPENDORF 公司)；HH-S 型数显恒温水浴箱(江苏省金坛市医疗仪器厂)；ZY KHB-1280 型全自动生化仪(上海科华生物工程股份有限公司)；WFX-120A 原子吸收分光光度计（美国Beckman-coulter 公司）。

2 实验方法

2.1 试样液制备

江西、甘肃车前草各500g，适量粉碎，用80%乙醇浸泡12h 后，4 倍量80%乙醇回流提取3 次，每次2h，过滤，合并滤液并回收溶剂至干。江西、甘肃车前草醇提物用0.9% NaCl 溶液混悬，分别制成生药含量1.6 g/ml，0.4 g/ml，0.1 g/ml 的试样液；阳性对照药氢氯噻嗪用0.9% NaCl 溶液配成0.4 mg/ml 的溶液。

2.2 动物分组与造模

采用Aston 法[16-18]将SD 大鼠预先禁食(不禁水)18 h，2.5 mL/100g 去离子水灌胃，收集2 h 尿量，选择2 h 出入量比值＞40%的大鼠进行分组实验。

筛选合格SD 大鼠80 只，随机分为8 组，每组10 只，分别为：空白对照组，阳性对照组，江西车前草高剂量组（以下简称江草高）、中剂量组（以下简称江草中）、低剂量组（以下简称江草低），甘肃车前草高剂量组（以下简称甘草高）、中剂量组（以下简称甘草中）、低剂量组（以下简称甘草低）。实验大鼠置于标准鼠笼适应2d，代谢笼中适应3d，实验前禁食(不禁水)18h，以减少粪便的干扰。每组大鼠按25 mL/kg 体质量，用生理盐水灌胃，造成水钠潴留状态。

2.3 给药方法

造模结束30 min 后，轻压大鼠下腹，排尽余尿，各组进行灌胃治疗。实验时，各药物组给予含试样药物的0.9% NaCl 25 mL/kg，其中药物组高、中、低剂量组分别含生药量1.6 g/ml、0.4 g/ml、0.1 g/ml，阳性对照组含氢氯噻嗪0.4 mg/ml，空白对照组给予同体积生理盐水。

2.4 标本采集与指标检测

2.4.1 大鼠排尿量的测定

实验各组大鼠分别于给药第1d 收集大鼠1h、2h、4h、6h、24 h 的尿液，测定尿液体积并冻存于－20℃冰箱。

2.4.2 尿液中Cl－、Na+、K+浓度的测定

称取一定量NaCl 和KCl，配制成标准系列浓度。取出冻存于－20℃冰箱中的尿液，室温溶解并稀释至一定浓度，用原子分光光度计在766.5nm 处检测K+浓度，在589nm 处检测Na+浓度，精确吸取适量尿液并稀释至一定浓度，滴加5% K2CrO41 滴，摇晃均匀，缓缓加入AgNO3标准液，边滴边摇至橘红色不褪色为止，记录消耗的AgNO3标准液的体积，计算尿液中的Cl－浓度。

2.4.3 血尿素氮（BUN）和碳酸酐酶(CA)水平的测定

连续给药6 d,第6 d 给药1 h 后处死大鼠，取血约2 mL，立即放入低温离心机，1000 r/min 离心5 min，得到血清。按大鼠BUN 试剂盒和CA 试剂盒的说明书操作。

2.5 统计学方法

采用SPSS 20.0 软件进行处理，数据用均数±标准差（±s）表示，组间比较采用独立样本t 检验，多组组间比较采用单因素方差分析法，以P＜0.05 表示统计学差异显著，P＜0.01 表示统计学差异极显著。

3 结果

3.1 对水负荷大鼠排尿量的影响

由表1 可知，与空白对照组比较，车前草醇提物1 h 内的利尿效果不显著，阳性对照组的利尿效果显著（*P＜0.05）；1～4h 内，江草高组和甘草高组具有极显著的利尿效果（**P＜0.01），江草中、低组和甘草中组具有显著的利尿效果（*P＜0.05）；江草高、中、低剂量组和甘草高、中剂量组24 h 内的利尿效果有极显著性差异（**P＜0.01）。6 h后，甘草低剂量组与江草高剂量组比较，有显著性差异（ΔP＜0.05）。

表1 车前草醇提物对水负荷大鼠排尿量的影响（±s）

表1 车前草醇提物对水负荷大鼠排尿量的影响（±s）

注：与空白组比较＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，与江草高组比较ΔP＜0.05。

综上所述，车前草提取物有明显的利尿作用，但江西车前草的利尿作用稍强于甘肃车前草。

3.2 对水负荷大鼠尿液中Cl-、Na+、K+浓度的影响

实验结果显示，阳性对照组、江草高剂量组和甘草高剂量组大鼠尿液中Cl－、Na+、K+浓度与空白对照组比较，有极显著性差异（**P＜0.01），江草中剂量组和甘草中剂量组（对Cl－浓度的影响除外）对水负荷大鼠Cl－、Na+、K+的排泄也具有显著的促进作用（*P＜0.05）。与江草高剂量组比较，甘草低剂量组对水负荷大鼠Cl-、Na+、K+的排泄作用最弱。见表2。

表2 车前草醇提物对大鼠尿液中Cl－、Na+、K+浓度的影响（±s）

表2 车前草醇提物对大鼠尿液中Cl－、Na+、K+浓度的影响（±s）

注：与空白组比较＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，与江草高组比较ΔP＜0.05,ΔΔP＜0.01。

综上所述，车前草醇提物有明显促进Cl－、Na+、K+排泄的作用，但江西车前草的促进作用稍强于甘肃车前草。

3.3 对水负荷大鼠BUN 和CA 水平的影响

实验结果表明，与空白对照组比较，江草高剂量组与甘草高剂量组的BUN 浓度和CA 浓度明显下降，有显著的统计学差异（*P＜0.05），其他剂量组无差异。与江草高剂量组比较，甘草低剂量组的BUN 浓度和CA 浓度明显升高，有显著的统计学差异（ΔP＜0.05）。见表3。

表3 车前草醇提物对大鼠BUN 和CA 水平的影响（±s）

表3 车前草醇提物对大鼠BUN 和CA 水平的影响（±s）

注：与空白组比较＊P＜0.05，与江草高组比较ΔP＜0.05。

初步说明，车前草醇提物对水负荷大鼠的肾小球滤过功能有影响，且江苏车前草的肾小球滤过功能稍强于甘肃车前草。

4 讨论

车前草具有利尿通淋的功效，水负荷大鼠排尿量和电解质的排泄是影响车前草利尿作用的重要因素。本实验采用经典利尿模型，针对道地产区江西车前草和甘肃产车前草醇提物对水负荷大鼠的利尿作用进行比较观察，发现车前草醇提物具有利尿效果，且江西车前草的利尿效果强于甘肃车前草，但同等剂量下两者比较差异不明显。

排尿量的变化可以影响尿液中Cl-、Na+、K+的排泄，实验发现，车前草醇提物有明显促进Cl-、Na+、K+排泄的作用，但江西车前草对Cl-、Na+、K+的排泄作用强于甘肃车前草。可以得出，车前草醇提物可能是通过增加尿液排泄量和尿液中Cl-、Na+、K+的排泄量而达到利尿效果，且生含药量达到10g/kg 时才有效。

实验中还发现，江西车前草高剂量组与甘肃车前草高剂量组对BUN 浓度有明显的降低作用，说明车前草醇提物对水负荷大鼠的肾小球滤过功能有影响。江西车前草高剂量组与甘肃车前草高剂量组对CA 有明显的抑制作用，从而造成肾小管内H+减少，管腔中Na+的重吸收减少，最终导致Na+排出量增加，排尿量增加。

综上所述，车前草醇提物具有显著的利尿作用，且江西产车前草的利尿效果强于甘肃产车前草，但同等剂量下，两者利尿作用差异不明显。

5 展望

车前草与车前子为同一原植物的不同药用部位，车前子作为利尿药已大量在临床使用。经考证，车前草的道地产区位于江西赣江沿岸，但由于车前草适应性强，在田间地头随处可见，甘肃也分布有一定量车前草。现代药理研究表明，车前草也具有显著的利尿作用，但作为利尿药在临床使用的量远不及车前子。所以，临床上可将车前草作为利尿药广泛使用以扩大药用资源，同时，甘肃地区对车前草的规模化种植和发展也有待后期进一步深入研究。