鸭疫里氏杆菌与沙门氏菌感染的诊断

文│李媛（广西壮族自治区北海市动物疫病预防控制中心）

笔者对鸭疫里氏杆菌病与沙门氏杆菌混合感染的诊断展开讨论，分析了前驱期和明显期的临床症状，通过细菌学检验方法确定病原菌，结合对鸭疫里氏杆菌和沙门氏杆菌两种药敏实验，为养鸭户推荐敏感药物防治，减少经济损失。

一、发病情况

2019年3月广西壮族自治区北海市海城区高德镇某一养鸭场，存栏40多日龄番鸭1600只，50多日龄半番鸭1500只，在20日龄免疫禽流感疫苗，均在25～30日龄开始发病死亡，一天死亡3～4只，连续十几天。临床症状为40多日龄番鸭难以站稳，站立时摇晃，前仰后合，倒地翻滚，不易爬起，张口呼吸，粪便稀薄带气泡呈黄绿色，一天内死亡；50多日龄半番鸭难以站稳，站立时摇头摆尾，运动失调，张口呼吸，排绿色水样稀粪，一天内死亡。

二、流行病学调查

1.临床症状和解剖病变。在前驱期，表现为精神沉郁，采食量显著减少，对饲料的积极性显著降低；在明显期，出现张口呼吸和腹泻、可视黏膜苍白以及神经症状，一旦发病一天内死亡。解剖番鸭可见脾高度肿大，肾稍肿，直肠内容物呈绿色水样；半番鸭可见心肌有横纹和白斑，肝稍肿、肾稍肿，直肠内容物呈绿色水样。

2.病毒学检验。剪取病料（心脏、肝、脾、肺和气管），置研磨管研磨后，8000转/分钟离心2分钟，取上清200微升抽提RNA，分别用禽流感、新城疫、细小病毒、圆环病毒和呼肠弧病毒的核酸荧光PCR检测试剂盒进行扩增，结果显示全部为阴性。

3.细菌学检验。病料涂片染色镜检。取番鸭高度肿大的脾涂片，革兰氏染色，镜检可见少量革兰氏阴性细小杆菌。

鸭疫里氏杆菌分离培养鉴定。无菌操作，用接种环各自穿透挑取番鸭和半番鸭的脑，在巧克力色平板上划线，置烛缸37℃厌氧条件培养。结果显示，14小时后每条划线处长出几个无色透明露珠状菌落，挑取单个菌落的一半涂片，革兰氏染色镜检，见红色两极着色的细小短杆菌，初步判定为鸭疫里氏杆菌；无菌操作，挑取该菌落的另一半做纯培养，置烛缸37℃厌氧培养20小时，用生理盐水洗下纯培养菌苔菌落，用接种针蘸取菌液接种生化管，置烛缸37℃厌氧条件培养24～72小时。结果显示，不发酵葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、麦芽糖、阿拉伯糖、山梨醇、甘露醇和肌醇、MR-VP试验、硝酸盐还原、硫化氢产生和尿素分解均为阴性，确诊为鸭疫里氏杆菌。同时选择正常死亡鸭脑作为对照，结果显示正常鸭脑培养24小时无菌落，培养至72小时仍无菌落。

沙门氏菌分离鉴定。无菌操作，用接种环穿透挑取番鸭高度肿大的脾在麦康凯平板上划线，置37℃培养24小时。结果显示在每条划线处长出几个白色菌落，麦康凯平板由红色变为黄色，挑取单个菌落的一半涂片，革兰氏染色镜检，可见红色细小短杆菌，初步确定为沙门氏菌。挑取菌落另一半做纯培养，37℃培养20小时，用生理盐水洗下纯培养菌苔菌落，用接种针蘸取菌液接生化管，置37℃培养24～72小时。结果显示，发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇和肌醇、不发酵乳糖和蔗糖、MR-VP试验、硝酸盐还原、硫化氢产生和尿素分解均为阳性，诊断为沙门氏菌。

4.药敏试验。用一次性注射器吸取巧克力色平板上的菌液，分别注入2个TSA平板和2个巧克力色平板中；用一次性注射器吸取麦康凯平板上的菌液，注入4个新的麦康凯平板中，因培养基较干，静置片刻，待稍吸收，吸取多余菌液，平铺药敏纸片，做好标记。

鸭疫里氏杆菌20种药物敏感实验结果显示，抑菌圈直径20毫米以上的有：米诺环素、林可霉素、罗红霉素和庆大霉素；抑菌圈直径15～20毫米的有：诺氟沙星、复方新诺明和甲氧苄啶；其他可用药物有：丁胺卡那、左氧氟沙星、红霉素、环丙沙星、阿莫西林、氟苯尼考、恩诺沙星、多西环素、克林霉素、头孢氨苄，以上10种药敏纸片分布在两个巧克力色平板上，均无菌落生长。

沙门氏菌18种药物敏感实验结果显示，抑菌圈直径：氟苯尼考（23毫米）；大观霉素、诺氟沙星和复方新诺明（各19毫米）；左氧氟沙星（17毫米）、丁胺卡那（16毫米）、庆大霉素和恩诺沙星（各15毫米）；新霉素、头孢氨苄、多西环素、米诺沙星（10～14毫米）、环丙沙星（不规则无法测量）；无抑菌圈的是林可霉素、罗红霉素、红霉素、阿莫西林、克林霉素。

综合上述结果，选择对两种细菌均敏感的药物，首选氟苯尼考；其次诺氟沙星和复方新诺明；再次为左氧氟沙星、丁胺卡那和恩诺沙星。采取联合、轮换和交叉等用药形式，按疗程投药，以减小细菌产生耐药性的概率。

三、防治

1.环境条件差是诱发鸭疫里氏杆菌与沙门氏菌病的重要原因。建议养殖场每日消毒鸭圈，保持地面干燥，舍内通风良好，避免过度拥挤，补充维生素和微量元素，提高免疫力，减少应激，实施全进全出制度。由于该养殖场不具备自繁自养的条件，建议养殖场尽量保持鸭苗来源单一，同时加强鸭苗运输工具的消毒。

2.鸭疫里氏杆菌和沙门氏菌均易产生耐药性，应及时根据药敏试验结果筛选高敏药物，按照说明书进行给药，避免超量或滥用抗生素，每个疗程在4天以上，可有良好效果。

3.鸭疫里氏杆菌和沙门氏菌血清型较多，各型之间缺乏交叉保护作用，使用疫苗的血清型只有和本场流行株一致才能达到预防目的。加强血清型的监测工作是解决该病的关键，为研制合适的单价、多价或二联疫苗提供依据。

四、小结

1.本病例为不同日龄番鸭与半番鸭混合饲养，出现相似的临床症状，但仅从番鸭中分离到鸭疫里氏杆菌和沙门氏菌，究其原因可能与半番鸭抵抗力强且日龄较大有关，也可能与养殖场当日饲喂土霉素有关。

2.从临床症状看，该养殖场所感染的鸭疫里氏杆菌与沙门氏菌均为慢性病例，发病率不高，解剖也无典型的“三周炎”病变，仍需实验室检验进行确诊；因没有免疫接种与血清型对应的疫苗，当日发病即有死亡现象，因此应及时做药敏实验，筛选高敏药物，尽早预防。

3.鸭疫里氏杆菌药敏试验可用TSA和巧克力色平板，用巧克力色平板难以测量抑菌圈直径；因条件所限，本次实验所用菌液未用麦氏比浊管，菌液浓度未知，药敏试验水平有待进一步提高。