青蓝石膏口服液药效学试验

韩卢生，李焕荣，王玉民

（1.河南省卢氏县动物卫生监督所 472200；2. 北京农学院动科学院/国家级实验教学示范中心 102206）

禽巴氏杆菌病导致禽类高死亡率和低生产性能，造成养禽业巨大损失[1]。该病以发热、腹泻、呼吸困难为特征[2]。疫苗免疫和抗生素治疗是主要手段，中药治疗的病例报道很多[3,4]。而中兽药以其综合药效作用及耐药性、药物残留等较少发生在治疗畜禽传染病方面显示其独特优势[5-6]。

青蓝石膏口服液选取大青叶、生石膏、生地黄、牡丹皮、板蓝根等进行配伍，对症于禽巴氏杆菌病新研制的中兽药复方制剂，组方中的药物皆有清热、凉血、抗菌消炎的功效[7-8]，符合中兽医对巴氏杆菌病的辨证分析，推测其对防治禽巴氏杆菌起到一定作用。本研究旨在针对鸡巴氏杆菌病临床症状与病理特点，制定体外抑菌、杀菌、抗炎、解热等系列试验，为青蓝石膏口服液预防与治疗禽巴氏杆菌病提供药效学数据。

1 材料

1.1 试验动物、药品和菌种

试验动物：SPF级昆明种小鼠（雄性）、成年Sprague Dawley（SD）大鼠购自北京金牧阳试验动物养殖有限责任公司（动物生产许可证编号：SCXK（军）2007-0004和2007-0001）。

青蓝石膏口服液，河北科星药业有限公司中试产品，生产批号：20110602。含生药1.0g/mL；鸡巴氏杆菌，批号：1812，购自中国兽医药品监察所。

1.2 动物饲养条件

大、小鼠均雌雄各半分笼饲养，饲养温度为20℃±2℃，湿度为60%±5%。自由饮水，给药前禁食12h，自由饮水。

2 方法

2.1 体外抑菌杀菌试验

2.1.1 体外抑菌试验（MIC）

在肉汤培养基增菌，挑取单个菌落接种到2mL营养肉汤内，37℃培养18～24h，受试药物用一次性过滤器过滤除菌。采用二倍稀释法测定青蓝石膏口服液的MIC。每支试管加入2mL灭菌的含5%血清营养肉汤，加入2mL受试药物，依次倍比稀释，设7个稀释度，同时设阳性和阴性对照。37℃培养24h观察结果。以无菌生长的最低稀释度为MIC。

2.1.2 体外杀菌试验

取上述清洁透明的各试管培养物，划线接种含血清的营养琼脂平板，37℃培养24h，没有菌落生长的试管内药物的稀释度即该菌的最小杀菌浓度（MBC）。

2.2 解热试验

大鼠雌雄分笼饲养，每组雌雄各半，每组6只，观察3d后，称重测体温。设3个剂量组（高、中、低剂量组）及对照组，口服给药，给药30min后背部皮下注射2-4二硝基苯酚2mL，给药浓度为25mg/kg体重。对照组不给药仅注射2-4二硝基苯酚2mL。给药后每30min时监测一次体温，观察体温变化。

2.3 抗炎试验

雄性小鼠32只，随机分为4组，青蓝石膏口服液3个剂量组和模型组，每组8只。中药对照组灌胃，按0.25g/kg、0.5g/kg、0.75g/kg体重给药浓度0.1mL/只，0.2mL/只，0.3mL/只，1次/d，连续3d。最后一次给药后30min，将各组小鼠右耳的前后两侧涂上二甲苯，用量0.1mL，致炎时间为15sec。等待1h，麻醉处死小鼠后将两耳剪下，用打孔器在两耳的同一位置打下直径为8mm的圆形耳片，立即称重，每鼠右耳片减去左耳片质量即为耳片炎症肿胀度。

2.4 数据分析

应用SPSS12.0软件对测定的数据进行差异显著性检验，P＜0.05表示差异显著。试验结果用平均数±标准差（±S）表示。

3 结果

3.1 体外抑菌杀菌试验

抑菌试验结果显示青蓝石膏口服液对多杀性巴氏杆菌体外抑菌的最高稀释度为26，最低抑菌浓度为1∶64，生药含量为15.625mg/mL；对巴氏杆菌体外杀菌最高稀释度为25，最低杀菌浓度为1∶32，生药含量为31.25mg/mL。

3.2 解热试验

结果见表1。由表可知青蓝石膏口服液高剂量组在给药90min和150min可明显降低致热大鼠模型体温，可使2-4二硝基苯酚对大鼠的制热作用失效；中、低剂量组使大鼠高体温的维持时间缩短，升温幅度减小。

表1 大鼠解热试验体温测定结果

3.3 抗炎试验

青蓝石膏口服液高、中、低剂量组的肿胀值较生理盐水组显著减小（P＜0.05）（表2），且给药剂量越大效果越明显，各给药组间无统计学差异（P＞0.05)，表明青蓝石膏口服液可显著性抑制由二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀度。

表2 抗炎作用测定结果

4 讨论

禽巴氏杆菌病是由禽多杀性巴氏杆菌引起的一种接触性传染病，可危害多种家禽、野禽。其特征表现为败血性过程，发病率和死亡率都很高[7]，预防与药物治疗均可发挥一定作用。随着减抗替抗政策的颁布和对动物源食品安全的要求，研究开发新中兽药替代抗生素不失为一种好的手段。

在中药新药的开发中，中药药效学评价是至关重要的环节。许多中药或中药复方制剂通过药效学作用研究，用来确定新药预期的药效，阐明新药的作用机制或用来确定新药作用的强度[8]。金青口服液药效学研究发现对小鼠和发热家兔有抗菌、解热、消炎等药效学作用[9]。复方大青叶合剂可减轻炎性症状，降低大肠杆菌引起的家兔体温升高，并对葡萄球菌，链球菌，流感杆菌等多种细菌有抑制作用[10]。有研究显示大青叶有明显的抑菌作用，尤其对革兰氏阴性菌的更加显著[11]；大青叶提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀有抑制作用[12]。板蓝根不同有效部位多种提取物皆有不同程度的抑菌和解热作用[13]；生石膏归属于阳明病治疗用药，可用于清解里热。生石膏对发热的家兔有显著的退热作用[14]；此外，牡丹皮水煎剂可抑制多种急性炎症反应的发生[15]；生地黄也有抗炎与降温作用[16]。

青蓝石膏口服液药效学结果显示，最低抑菌生药含量为15.625 mg/mL，最低杀菌生药含量为31.25mg/mL，MIC和MBC分别为1∶64和1∶32；高中低剂量组均具有明显抗炎效果，且具有剂量依赖性；各剂量在一定程度上均可缓解对2,4-二硝基苯酚引起的体温升高，高剂量组降温速度快、效果明显，但中低剂量组可缩小高温持续时间，降低升温幅度。

5 结论

青蓝石膏口服液对鸡多杀性巴氏杆菌有抑菌、杀菌作用，也有抗炎、解热等药效学作用。为临床用药治疗相关疾病奠定基础。