边境牧羊犬感染吉氏巴贝斯虫的诊断和治疗

马鹤嘉，张津朝，李积旭，李英，康明，袁听，孙亚丽

(1.青海大学农牧学院，西宁810016；2.重庆三峡职业学院动物科技学院，重庆404155)

巴贝斯虫病(Babesiosis)是红细胞内寄生性原虫引起的蜱传性寄生虫病，巴贝斯虫隶属顶复门梨形虫纲梨形虫目巴贝斯科巴贝斯属，可以感染家畜、野生动物和人[1]。犬巴贝斯虫病的病原体主要有吉氏巴贝斯虫(Babesia gibsoni)、犬巴贝斯虫(Babesia canis)、韦氏巴贝斯虫(Babesia canis vogeli)和犬罗氏巴贝斯虫(Babesia canis rossi)四种[2]。在我国，犬巴贝斯虫和吉氏巴贝斯虫的感染较常见,韦氏巴贝斯虫和犬罗西巴贝斯虫少有报道[3]。吉氏巴贝斯虫虫体很小，多位于红细胞边缘或偏中央，大小为1～2.5 μm，呈现椭圆形、圆形、梨籽形、环形、杆状等多种形态，以成对形态存在居多[4-6]。

犬巴贝斯虫病症状常呈慢性经过，临床体征从轻度一过性至重度溶血引起死亡的急性疾病不等[7-9]。其致病机理主要是染虫红细胞裂解导致溶血性贫血，在特殊情况下会进一步导致器官衰竭甚至死亡[10,11]。在早期常表现为间歇热，喜卧怠动，精神沉郁，常出现贫血、黄疸、腹水等一系列症状[12]。血液寄生虫病的诊断方法主要有常规的病原学诊断和血清学诊断，包括PCR(聚合酶链式反应)、RLB(反向线性斑点杂交)、LAMP(环介导等温扩增)、ELISA(酶联免疫吸附试验)、IFAT(间接荧光抗体试验)等[12-16]。在本次病例中，根据临床症状、血常规检查以及分子生物检测结果，对一例边境牧羊犬感染吉氏巴贝斯虫进行了确诊及治疗。

1 病例介绍

边境牧羊犬，1.5岁，雄性，体重18kg。于2020年3 月进行常规免疫， 6月进行了体内驱虫，8月进行了体外驱虫，发病前未见有异常。2020年9月以来，近一周的时间，患犬精神沉郁，食欲废绝，嗜睡，大小便正常。平日饮食不规律，就诊前一天吃过骨头，并伴有呕吐等症状，直肠体温为40.3℃，呼吸频率32次/min，心率129次/min。

2 诊断

2.1血涂片检查 将患病犬的静脉抗凝血滴至清洁载玻片上，将其涂成均匀火焰状薄层。用甲醛固定后，采用吉姆萨染色法染色数分钟，蒸馏水清洗后镜检。观察发现红细胞内虫体被染成蓝紫色点状小体，呈现圆形和梨形。初步诊断为犬巴贝斯虫病。如图1所示，患犬血涂片(箭头标记处为虫体 10×100)A、B图均为患犬体内红细胞染色镜检结果。巴贝斯虫具有多形性，但在染色血涂片的细胞学检查中，通常能观察到梨状包涵体。根据红细胞内包涵体的大小，将其分为小型(1.0～2.5 μm)或大型(2.6～5.0 μm)巴贝斯虫。传统上，将所有大形态的巴贝斯虫感染犬指定为犬巴贝斯虫，而所有小形态的巴贝斯虫均认定为吉氏巴贝斯。由于并未检测出红细胞中包涵体的大小，因此初步确诊为巴贝斯虫病。

2.2血常规检查 表1检测结果表明该患病犬红细胞数目下降至1.84 L，其中血红蛋白下降至44 L，红细胞压积显示为12.4 L，血小板低至39 L，也低于正常范围。这些血常规指标主要是由于虫体寄生在宿主的红细胞内，所以大量红细胞溶血，宿主动物产生贫血溶血等临床症状。由于炎症反应，导致淋巴细胞百分比升高至35.5%，中性粒细胞百分比显著下降至57.6%。表2生化检验结果表明，总胆红素和球蛋白较正常范围值分别升高至21 U/L和49 U/L。其肌酐、尿素、血尿素氮/肌酐、总蛋白、白蛋白、丙氮酸转移酶和碱性磷酸酶的指标均处在正常范围之内。

表1 血常规检测结果

表2 生化指标检测结果

2.3PCR诊断 根据核酸提取试剂盒的说明，按照标准的反应程序和条件对采集的抗凝血液样本提取基因组DNA，利用 PCR方法扩增梨形虫18S rRNA基因[5]。凝胶电泳显示了与预测一致的350 bp的核苷酸序列。测序结果，通过NCBI(National center for biotechnology information)的Blastn比对分析确定了犬吉氏巴贝斯虫。采用MEGA7软件进行了系统进化分析(图2)。结果显示了分支长度总和= 1.65819395的最优树。系统进化树分析结果显示(圆点表示本研究中所获得的序列)，该核苷酸序列与吉氏巴贝斯虫的相似度100%，可以判定虫种为吉氏巴贝斯虫。

图2 基于18S rRNA基因构建的分子系统进化树(★表示本研究中的序列)

3 治疗和护理

首先检查病犬体表有无蜱虫，注意犬的颈下部、四肢内侧、耳道、毛发多的地方。使用外用驱虫药(大宠爱或福来恩)抹在叮咬部位，蜱的口器松动萎缩就会自动脱落(切忌口器留在皮肤内)，之后在皮肤破损部位抹上消炎药并保持清洁。同时对患犬肌肉注射血虫净，血虫净主要清除锥虫、梨形虫、焦虫、附红细胞体等。它的主要成分是三氮脒，将该药配制成5%的溶液，按3mg/kg进行深度肌肉注射，病情严重的每隔48h用药一次，连用3d。此后静脉注射促进红细胞生成的药物并输血进行辅助治疗。经过22d针对性治疗后，患病犬症状趋于好转，呕吐次数减少，各项指标稳定在正常范围内，精神状态明显改善，食欲基本恢复正常。第25d再次血涂片检测，未发现虫体，患病犬痊愈，无复发现象。

4 讨论和小结

犬巴贝斯虫可分为犬吉氏巴贝斯虫、犬巴贝斯虫、犬韦氏巴贝斯虫和犬罗西巴贝斯虫。本病例根据患病犬临床症状，结合血涂片显微镜观察和分子生物学诊断最终确诊为吉氏巴贝斯虫。巴贝斯虫裂殖子在宿主红细胞内度过其生命周期的无性生殖阶段，因此会导致宿主动物产生溶血性贫血。要根据患病犬实际情况进行肌肉注射血虫净，严重贫血的辅助输血治疗。要注意和犬瘟、犬细小病毒病等疾病的鉴别诊断。巴贝斯虫病治疗药物还有咪唑苯脲、阿奇霉素、阿托伐醌、克林霉素和奎宁等。

蜱的活动存在季节性，要提前做好预防工作。重点在灭蜱和防蜱上，从而切断传播途径。并且要定期给犬做好体外驱虫。在过去十年中，全球许多地区的犬巴贝斯虫病例数量增加，主要原因是对动物福利和疾病问题缺乏认识，经济条件的限制以及缺乏负责任的宠物饲养，增加了蜱传播疾病的持续存在。此外，社会经济和生态因素，包括全球化国际贸易增加、旅游和旅行、气候变化、犬的流动性增加和与野生动物接触，改变了蜱地理性分布和犬巴贝斯虫病的感染模式。因此，犬巴贝斯病的防控也要从多方面入手，结合实际情况，做出合理的防控措施。