胶乳免疫比浊法C 反应蛋白测定试剂盒的准确度性能验证

黄燕虹（第一作者，通信作者），张旭（第一作者），潘晓芳，朱秀霞

广东省医疗器械质量监督检验所综合检验四室 （广东广州 510663）

C 反应蛋白（C reactive protein，CRP）是由5个相同的亚单位组成的α 球蛋白，由肝细胞合成，在胎儿期产生。健康人体的血清中CRP 含量很低，但在细菌感染、恶性肿瘤、创伤、冠心病等发生后其含量会急剧升高，并在24～48 h 达到峰值，CRP 含量可反映炎症反应的剧烈程度，其水平与炎症严重程度成正相关，炎症治愈后含量会显著降低，浓度在一周内可恢复至正常水平。CRP 虽不能作为特定疾病的检测指标，但其对于各种炎症、组织损伤和细菌感染过程以及疾病恢复期的监测与病情评估均具有重要的价值[1-5]。

近年来，CRP 指标的检测已成为医学检验的一种常规手段，被应用于临床各领域，而评估CRP 测定试剂盒的性能有利于保障CRP 测定试剂盒检测结果的有效性和准确性。本研究旨在探讨不同企业的CRP 测定试剂盒在符合企业自身技术要求的前提下，准确度性能是否符合YY/T 1513-2017《C 反应蛋白测定试剂盒》[6]行业标准要求，现报道如下。

1 材料和方法

1.1 仪器和试剂

仪器：全自动生化分析仪（Beckman Coulter，Inc.，AU680型）。

CRP测定试剂盒：来自14家企业，本研究中各企业名称分别以字母A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K、L、M、N表示，所有试剂盒采用的检测方法为胶乳增强免疫比浊法、胶乳免疫比浊法或免疫比浊法，试剂盒均由R1和R2组成。

1.2 检测样本

检测样本包括低、中、高3个浓度。高浓度样本直接采用的是国际标准物质ERM®-DA474/IFCC 的原液，其靶值浓度为41.2 mg/L；低、中浓度样本的浓度分别为10.3、20.6 mg/L，均由高浓度样本稀释而来。

1.3 检测方法

根据行业标准YY/T 1513-2017中准确度的要求，采用AU680全自动生化分析仪和14家企业的试剂盒，严格按照仪器及试剂盒的操作要求分别对3个浓度的准确度样本进行检测，每个浓度分别检测3次，并计算3次测量结果的相对偏差（relative deviation，RD），RD=（检测值-标示值）/标示值×100%。

2 准确度性能验证结果

14家企业试剂盒对高浓度样本检测结果的RD均符合行业标准YY/T 1513-2017的要求，即在-15%～15%之间；11家企业试剂盒对中浓度样本检测结果的RD符合行业标准要求，3家企业|RD|在15%～20%之间；只有8家企业试剂盒对低浓度样本检测结果的RD符合行业标准要求，而6家不符合行业标准要求，其中，3家企业|RD|在15%～20%之间，3家企业|RD|>20%，见表1～3。

表1 14家企业高浓度样本准确度实验结果

表2 14家企业中浓度样本准确度实验结果

3 原因分析

分析准确度实验结果发现，不同企业检测国际标准物质ERM®-DA474/IFCC 的结果存在较大差异，部分企业的准确度测试结果甚至不符合行业标准YY/T 1513-2017的要求，主要原因如下。（1）部分企业的产品技术要求达不到行业标准的要求：行业标准要求采用RD法，而部分企业采用的是比对实验的方法；行业标准要求分别计算3次结果的RD，而部分企业则计算的是3次结果平均值的相对偏差，未严格按照行业标准的要求执行；行业标准要求合理设置2 ～3个浓度进行实验，而部分企业只检测了1个浓度。（2）不同企业自身的溯源体系不同：从结果分析，在测定浓度为10.3 mg/L 的国际标准物质时，6批结果均不符合行业标准的相应要求，其中有5批在定标时采用的是企业自身提供的校准品，表明溯源体系对实验结果的准确度具有一定影响；国际标准物质的赋值一般选择该试剂盒产品所对应的国际公认的金标准方法进行，但在实际注册过程中，每个厂家都会用自己内部的溯源过程对准确度参考品进行赋值，即使最高一级的溯源是国际标准品，但最终溯源至准确度参考品时，整个溯源链传递越长，引入的不确定度便越大，导致准确度参考品的值越不准确，这也可以解释为什么使用企业提供的准确度参考品用来做实验时，RD符合要求，但测试国际标准物质的结果却较差。

表3 14家企业低浓度样本准确度实验结果

4 小结

随着CRP 临床应用的日趋广泛，十分必要提高CRP 检测的准确度。14家企业CRP 测定试剂盒的准确度性能验证结果表明，企业在产品注册过程中的检验方法和要求与行业标准要求不一致，未严格按照行业标准要求进行注册检验。

为了解决不同厂家试剂盒检验结果不统一的问题，建议企业和同行从以下4点进行改进：（1）相关标准委员会可开展国家标准及行业标准的相关培训，深刻解读和讨论标准内容，便于企业更好地理解并执行相关标准的具体要求；（2）各地医疗器械技术审评部门应加强对相关标准的学习，统一审评尺度；（3）生产企业应高度关注相关行业标准的更新，并及时对产品技术要求做出相应的调整；（4）生产企业可通过参加原卫生部临检中心室间质评等方式进一步确证该试剂体系的临床符合率[6-8]。

本研究尚存在不足之处，首先，所分析试剂盒数量较少；其次，所选用的国际标准品较为单一，未引入其他国际公认参考品和国家标准品，后续还需更加深入广泛地研究予以进一步验证。